【摘要】：宮頸癌(cervical cancer)嚴(yán)重危害現(xiàn)代女性的身心健康,目前其發(fā)病率居女性惡性腫瘤的第四位。盡管隨著目前宮頸癌篩查工作的實施有助于顯著降低宮頸癌的發(fā)病率和死亡率,但宮頸癌篩查僅可盡早檢查出部分宮頸癌前病變,不能篩查全部的宮頸病變,也不能篩查具有風(fēng)險因素的高危人群。故尋找影響宮頸病變的相關(guān)因素并進(jìn)一步研究其致宮頸癌發(fā)生的分子機(jī)制,可避免對相應(yīng)良性病變進(jìn)行檢測和不必要的治療,并可且為提出宮頸癌新的預(yù)防措施提供理論依據(jù)。葉酸屬于水溶性B族維生素,其參與DNA的合成,并能通過影響表觀遺傳修飾來調(diào)控基因的表達(dá)。葉酸近年來被發(fā)現(xiàn)在多種上皮惡性腫瘤的進(jìn)展和預(yù)防方面發(fā)揮重要作用。這些研究一致地提示葉酸攝入量(膳食和膳食補(bǔ)充)或葉酸的血液測量值與這些惡性腫瘤呈反向關(guān)聯(lián)。上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)可以通過各種機(jī)制引起器官纖維化及在腫瘤發(fā)生與發(fā)展中起著重要的作用。EMT賦予宮頸癌細(xì)胞遷移和侵襲特性,誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞特性,防止細(xì)胞凋亡和衰老,并可逃逸免疫應(yīng)答。本實驗通過使用不同濃度的葉酸干預(yù)宮頸癌Siha細(xì)胞,分析未經(jīng)葉酸干預(yù)后與經(jīng)葉酸干預(yù)后的宮頸癌Siha細(xì)胞中EMT相關(guān)蛋白E-鈣粘蛋白及波形蛋白的表達(dá)情況,分析葉酸、EMT及宮頸病變之間的關(guān)系,為宮頸癌的防控提供可靠依據(jù)。目的:探討葉酸是否可以影響宮頸癌Siha細(xì)胞中EMT的標(biāo)志物E-鈣粘蛋白與波形蛋白的表達(dá),分析葉酸是否參與宮頸上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化,進(jìn)而影響宮頸癌細(xì)胞的生長、侵襲及轉(zhuǎn)移。方法:1.對宮頸癌Siha細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),并用不同濃度的葉酸進(jìn)行干預(yù);2.運用MTT實驗方法檢測培養(yǎng)基中含有葉酸的Siha細(xì)胞的增殖速率與未經(jīng)葉酸干預(yù)的空白對照組即A組的細(xì)胞增殖速率;3.運用劃痕實驗方法檢測培養(yǎng)基中含有葉酸的Siha細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力與未經(jīng)葉酸干預(yù)的空白對照組即A組的細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力;4.運用Transwell侵襲實驗檢測培養(yǎng)基中含葉酸的Siha細(xì)胞的遷徙能力與空白對照組中Siha細(xì)胞的遷徙能力;5.運用Western Blotting方法檢測培養(yǎng)基中含葉酸的Siha細(xì)胞波形蛋白、E-鈣粘蛋白的表達(dá)量與未經(jīng)葉酸干預(yù)的空白對照組中Siha細(xì)胞波形蛋白、E-鈣粘蛋白的表達(dá)量。6.統(tǒng)計方法均采用SPSS22.0軟件進(jìn)行,組間差異采用單因素方差分析進(jìn)行統(tǒng)計,所有的計量資料符合正態(tài)分布均采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(X±S)形式表示,P0.05為差異存在統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果:1.MTT實驗方法檢測到培養(yǎng)基中含有葉酸的Siha細(xì)胞的增殖速率低于不含葉酸的空白對照組,并且隨著葉酸濃度的升高Siha細(xì)胞增殖的速率逐漸降低。2.劃痕實驗檢測到培養(yǎng)基中含有葉酸的Siha細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力低于不含葉酸的空白對照組,并且隨著葉酸濃度的升高Siha細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力逐漸降低。3.Transwell侵襲實驗檢測到培養(yǎng)基中含葉酸的Siha細(xì)胞的遷徙能力低于未經(jīng)葉酸干預(yù)的空白對照組,并且隨著葉酸濃度的升高Siha細(xì)胞遷徙能力逐漸降低。4.Western Blotting方法檢測結(jié)果顯示:培養(yǎng)基中含葉酸的Siha細(xì)胞波形蛋白的表達(dá)量低于未經(jīng)葉酸干預(yù)的空白對照組,并且隨著葉酸濃度的升高Siha細(xì)胞波形蛋白的表達(dá)逐漸降低;而培養(yǎng)基中含葉酸的Siha細(xì)胞E-鈣粘蛋白的表達(dá)量均高于未經(jīng)葉酸干預(yù)的空白對照組,并且隨著葉酸濃度的升高Siha細(xì)胞E-鈣粘蛋白的表達(dá)量逐漸升高,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。結(jié)論:1.葉酸對宮頸癌細(xì)胞的增殖與侵襲能力具有抑制作用。2.葉酸可促進(jìn)宮頸癌Siha細(xì)胞中E-鈣粘蛋白的表達(dá),抑制波形蛋白的表達(dá)而抑制宮頸癌細(xì)胞發(fā)生上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT),從而抑制宮頸癌的發(fā)生與發(fā)展。
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R737.33
【圖文】：

錄不同濃度的葉酸干預(yù)后連續(xù) 48h，不同線圖 2-1（以時間為橫坐標(biāo)、細(xì)胞個數(shù)為同濃度葉酸干預(yù)后，Siha 細(xì)胞的增殖能力酸干預(yù)）相比，隨著葉酸濃度的升高（Bml），Siha 細(xì)胞增殖速率逐漸減少,表明細(xì)能力具有抑制作用。Cell Count-C20:00 20:00:00Cell Count-C3Time0:00:00 2:00:00 4:00:00 6:00:00 8:00:00 10:00:00 12:00:00 14:00:00 16:00:00 18:00:00 20:00:003603804004204404604805005200:00:00 2:00:00 4:00:00 6:00300320340360380400420440460B 組

D 組圖 2-3：Transwell 侵襲實驗檢測不同濃度葉酸干預(yù)后 48h Siha 細(xì)胞侵襲能力2.4 Western Blotting 檢測不同濃度葉酸對 Siha 細(xì)胞中 E-cadherin 蛋白、Vimentin 蛋白表達(dá)水平的影響Western Blotting 方法檢測結(jié)果顯示：A 組（未經(jīng)葉酸干預(yù)的 Siha 細(xì)胞）細(xì)胞中 E-cadherin 蛋白的表達(dá)水平低于經(jīng)葉酸干預(yù)組（葉酸濃度：B 組 0.1mol/ml；C 組 0.5mol/ml；D 組 1mol/ml），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。而 A 組（未經(jīng)任何處理的 Siha 細(xì)胞）細(xì)胞中 Vimentin 蛋白的表達(dá)水平高于經(jīng)葉酸干預(yù)組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。進(jìn)一步說明經(jīng)過葉酸干預(yù)后能夠使宮頸癌 Siha

D 組圖 2-4 ： MTT 檢測四組 Siha 細(xì)胞 12h、24h、48h 增殖情況Figure2β-actin β-actinE-鈣粘蛋白 波形蛋白圖 A 圖 B圖 2-5：圖 A、B 為四組 Siha 細(xì)胞中 E-鈣粘蛋白、波形蛋白的表達(dá)（從左到右依次為 A 組、B 組、C 組、D 組）

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本文編號：2747877