本文關(guān)鍵詞：不同藥物對(duì)大鼠子宮內(nèi)膜異位癥模型Leptin、Stat3和Caspase3的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：子宮內(nèi)膜異位癥(endometriosis, EMS)也稱內(nèi)異癥,是一種雌激素依賴性婦科常見病,其生物學(xué)特征隨著女性體內(nèi)激素周期性改變而變化。臨床癥狀主要包括：盆腔痛,盆腔包塊、不孕等表現(xiàn)。EMS具有轉(zhuǎn)移、侵襲、粘附、血管形成、凋亡減少等類似惡性腫瘤細(xì)胞的特征,也被稱為“良性癌”。我們前期的研究發(fā)現(xiàn),瘦素(leptin)、瘦素受體(leptin receptor, OB-R)和stat3在EMS異位內(nèi)膜上均有表達(dá),提示leptin有可能通過與OB-R結(jié)合,激活JAK2/stat3途徑,促進(jìn)EMS病灶的增殖,同時(shí)伴隨著局部能量代謝的異常。此外caspase3作為調(diào)控細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵分子,在EMS異位內(nèi)膜細(xì)胞的凋亡中扮演著舉足輕重的角色。辛伐他汀(simvastatin)屬于他汀類藥物,主要通過抑制膽固醇的合成,降低低密度脂蛋白,增加高密度脂蛋白,從而達(dá)到降膽固醇的作用。還可通過多條信號(hào)通路作用于全身多個(gè)臟器,發(fā)揮其調(diào)節(jié)機(jī)體代謝、抗腫瘤、抗炎、抗凋亡、預(yù)防缺血再灌注損傷等多方面效應(yīng)。二甲雙胍(metformin)既往主要用于治療2型糖尿病。然而近年來越來越多的文獻(xiàn)證明：二甲雙胍可通過不同的機(jī)制發(fā)揮重要的抗腫瘤作用。既然EMS具有能量代謝異常、凋亡降低等特點(diǎn),那么辛伐他汀和二甲雙胍這兩種既可改善機(jī)體能量代謝,又可通過多種途徑促進(jìn)細(xì)胞凋亡的藥物,是否可以用來治療EMS呢!本實(shí)驗(yàn)從EMS病灶的能量代謝和細(xì)胞凋亡異常著手,嘗試從新的角度,研究EMS的發(fā)病機(jī)制，為EMS的藥物治療提供新的靶點(diǎn)。目的1、建立Lewis大鼠同種異體腹腔移植EMS模型。2、觀察葛根素、辛伐他汀、二甲雙胍和米非司酮對(duì)大鼠EMS病灶的影響。3、探討四種藥物是否對(duì)EMS病灶中Leptin及其下游分子stat3產(chǎn)生作用。4、通過觀察四種藥物對(duì)EMS病灶caspase3的影響,探討其對(duì)EMS病灶細(xì)胞凋亡的影響。方法1、選擇健康雌性Lewis大鼠,共70只,其中供體組9只,實(shí)驗(yàn)組61只,建立大鼠同種異體EMS模型,每日給予苯甲酸雌二醇0.05mg/100g,月幾注，，共4周。2、觀察大鼠EMS病灶的體積,篩選建模成功的大鼠,計(jì)算建模成功率。3、隨機(jī)選擇50只EMS大鼠,分為五組：1)對(duì)照組;2)葛根素組(50mg/kg);3)辛伐他汀組(5mg/kg);4)甲雙胍組(126mg/kg);5)米非司酮組(6.33mg/kg),每組各10只。每組分別給相應(yīng)的藥。繼續(xù)每日苯甲酸雌二醇0.05mg/100g,肌注,飼養(yǎng)4周。4、處死大鼠,再次觀察病灶體積,取出病灶,待下一步實(shí)驗(yàn)。5、免疫組化(IHC)、實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)和蛋白免疫印跡法(Western-blot)檢測leptin、Stat3、Caspase-3;結(jié)果1、53只大鼠建模成功,成功率86.9%,每個(gè)病灶平均體積為27.01±3.72mm3。2、二甲雙胍組和米非司酮組的病灶體積小于對(duì)照組,葛根素組病灶體積大于對(duì)照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;辛伐他汀組病灶體積與對(duì)照組相比無明顯差異。3、冰凍切片IHC示：①葛根素組leptin的表達(dá)與對(duì)照組無明顯差異;其他三組Leptin的表達(dá)均低于對(duì)照組;②辛伐他汀組Stat3的表達(dá)低于對(duì)照組;葛根素組Stat3的表達(dá)與對(duì)照組無明顯差異;二甲雙胍組和米非司酮組的Stat3的表達(dá)均高于于對(duì)照組。③葛根素組caspase3的表達(dá)與對(duì)照組相比無明顯差異;辛伐他汀組caspase3的表達(dá)均低于對(duì)照組;二甲雙胍組和米非司酮組caspase3的表達(dá)均高于于對(duì)照組。4、RT-PCR顯示：①四組實(shí)驗(yàn)組Leptin mRNA的表達(dá)均低于對(duì)照組;②葛根素組和辛伐他汀組Stat3 mRNA的表達(dá)低于對(duì)照組;二甲雙胍組和米非司酮組Stat3 mRNA的表達(dá)高于對(duì)照組；③葛根素組caspase3 mRNA表達(dá)與對(duì)照組無明顯差異;其他三組實(shí)驗(yàn)組Leptin mRNA的表達(dá)均低于對(duì)照組。5、Western-blot示：①辛伐他汀組Leptin含量低于對(duì)照組;二甲雙胍組和米非司酮組Leptin含量的表達(dá)高于對(duì)照組;葛根素組Leptin含量與對(duì)照組無差異;②四實(shí)驗(yàn)組stat3蛋白含量均低于對(duì)照組：③葛根素組caspase3含量低于對(duì)照組;其他三組caspase3蛋白含量的表達(dá)高于對(duì)照組。結(jié) 論1、Lewis大鼠同種異體腹腔移植EMS模型,成活率高,易觀察,大鼠生存能力強(qiáng),可接受多次手術(shù),具有完整的免疫系統(tǒng),在很大程度上與人EMS的組織和生化特征相一致。2、葛根素可降低EMS異位內(nèi)膜中Leptin、Stat3、caspase3 mRNA表達(dá)和caspase3蛋白的含量，Leptin、Stat3蛋白的含量增加,可能是刺激了leptin、 stat3途徑,同時(shí)抑制了EMS異位內(nèi)膜細(xì)胞的凋亡,不適用于EMS的治療。3、辛伐他汀未抑制病灶生長,但病灶中l(wèi)eptin、stat3、caspase3 mRNA和蛋白含量均下降。因此,需進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)探討辛伐他汀是否可用于治療EMS。4、二甲雙胍不能通過leptin、OB-R、tat3信號(hào)通路,而可能是通過caspase3誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡來抑制EMS病灶的生長。二甲雙胍有望成為新的EMS治療藥物。5、米非司酮可通過caspase3誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡來抑制EMS病灶的生長。6、Leptin可用于EMS的診斷,但不能用于判定療效,無法成為EMS的參考檢測指標(biāo)。7、通過對(duì)EMS能量代謝和凋亡的研究,有助于明確EMS細(xì)胞的增殖和死亡,明確新的治療理念,探索新的治療藥物。
【關(guān)鍵詞】：子宮內(nèi)膜異位癥 瘦素 stat3 caspase3 辛伐他汀 二甲雙胍 葛根素 米非司酮
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R-332;R711.71
【目錄】：

• 中英文縮略詞表5-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 前言13-15
• 第一部分 Lewis大鼠子宮內(nèi)膜異位癥同種異體移植模型的建立15-21
• 實(shí)驗(yàn)材料15
• 實(shí)驗(yàn)方法15-16
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果16-18
• 討論18-19
• 參考文獻(xiàn)19-21
• 第二部分 不同藥物對(duì)大鼠子宮內(nèi)膜異位癥模型leptin、Stat3和Caspase3的影響21-57
• 材料和方法21-40
• 討論40-47
• 參考文獻(xiàn)47-57
• 全文總結(jié)57-58
• 文獻(xiàn)綜述58-66
• 參考文獻(xiàn)62-66
• 個(gè)人簡歷、碩士期間發(fā)表文章情況66-67
• 致謝67

【相似文獻(xiàn)】

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