【摘要】：目的:免疫檢查點是免疫療法的熱點之一。研究表明,錯配修復(fù)(mismatch repair,MMR)蛋白缺失的患者是免疫檢查點抑制劑治療的優(yōu)勢人群。淋巴細胞活化基因3(lymphocyte activation gene-3,LAG-3)是表達在T細胞表面的免疫檢查點分子,LAG-3在結(jié)直腸癌中的表達增高與MMR缺失相關(guān),但在子宮內(nèi)膜樣腺癌中未見報道。叉頭狀轉(zhuǎn)錄因子3(Forkhead box P3,FoxP3)是調(diào)節(jié)性T細胞的標志性分子。LAG-3~+FoxP3~+調(diào)節(jié)性T細胞在多種實體瘤中表達增加,并與腫瘤的不良預(yù)后相關(guān),但在子宮內(nèi)膜癌中少見報道。本研究觀察子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中LAG-3、FoxP3與MMR蛋白表達水平及與臨床病理特征的相關(guān)性;探討LAG-3與MMR蛋白表達的相關(guān)性,以說明MMR缺失子宮內(nèi)膜癌患者是否為抗LAG-3免疫治療的優(yōu)勢人群。方法:選擇2016-2017年間有完整臨床病理資料的子宮內(nèi)膜樣腺癌203例,用免疫組化的方法檢測MMR蛋白表達情況;并在其中選取36例MMR蛋白表達缺失(deficient in MMR,dMMR)的病例與36例MMR蛋白完整表達(proficient in MMR,pMMR)病例按照1:1配比組成配對資料72例,選取的病例在年齡,腫瘤發(fā)生的部位,大小,組織學(xué)分級之間差別無統(tǒng)計學(xué)意義;用免疫組化的方法檢測FoxP3和LAG-3的表達情況;分析兩者表達與MMR表達、腫瘤浸潤淋巴細胞數(shù)目、腫瘤大小、彌漫性生長方式、組織學(xué)分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間的相關(guān)性;分析FoxP3和LAG-3二者表達的相關(guān)性;免疫熒光的方法檢測FoxP3和LAG3的亞細胞定位;并利用TCGA數(shù)據(jù)庫分析FoxP3、LAG3及MMR蛋白在內(nèi)膜癌中的表達。結(jié)果:(1)本研究中203例子宮內(nèi)膜樣腺癌中dMMR病例共56例(27.6%)。dMMR內(nèi)膜癌發(fā)生部位多位于子宮角,呈局限性生長方式(P0.05);pMMR發(fā)生部位多位于子宮體布滿宮腔內(nèi),呈彌漫性生長(P0.05)。dMMR患者發(fā)病年齡較pMMR患者年輕,但是差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義。MMR表達情況與腫瘤浸潤深度,組織學(xué)分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間沒有明顯相關(guān)性(P0.05)。(2)選取的dMMR病例與pMMR病例相比,LAG-3在腫瘤浸潤淋巴細胞(tumor infiltrating lymphocyte,TIL)中以及在間質(zhì)浸潤淋巴細胞中表達增高,FoxP3在間質(zhì)浸潤淋巴細胞中高表達(P0.01)。(3)LAG-3表達增高與腫瘤彌漫性的生長方式相關(guān),腫瘤常布滿整個宮腔(P0.01)。FoxP3與LAG-3表達情況與腫瘤大小有關(guān)(P0.01),與發(fā)病年齡、腫瘤部位、組織分化、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、ER、PR和P53無明顯相關(guān)性。(4)LAG-3表達在淋巴細胞的膜表面,FoxP3表達在淋巴細胞的細胞核,二者表達有相關(guān)性(P0.05)。免疫熒光證實兩者存在同一細胞上的共表達。(5)TCGA數(shù)據(jù)庫中分析MSI的病例MSS的病例相比LAG-3mRNA表達水平增高,LAG-3與FoxP3的mRNA表達正相關(guān),LAG3 mRNA表達水平隨腫瘤分期增高而增加,與患者預(yù)后沒有明顯相關(guān)性。結(jié)論:LAG-3蛋白在dMMR子宮內(nèi)膜樣腺癌組織內(nèi)高表達,提示對dMMR子宮內(nèi)膜樣腺癌患者采用抗LAG-3治療獲益的可能性更大。LAG-3與FoxP3表達水平正相關(guān),且二者在同一細胞共表達,推測LAG-3促進免疫逃逸的機制可能與FoxP3~+調(diào)節(jié)性T細胞有關(guān)。因此,dMMR子宮樣腺癌患者可能是抗LAG-3治療的優(yōu)勢人群;抗LAG-3免疫治療的作用機制可能與FoxP3~+調(diào)節(jié)性T細胞有關(guān)。
【圖文】：

在檸檬酸鈉緩沖液的高壓鍋中加熱進行抗原修復(fù)。山羊血清封閉 與 FoxP3 混合比例為 1：1 的一抗、4°C 孵育過夜。次日，熒光二bbit IgG-FITC（absin 生物技術(shù)有限公司：abs20004）、Goat An antibody（absin 生物技術(shù)有限公司：abs20007）孵育切片。37°CAPI（賽默飛公司：D1306）復(fù)染細胞核。用尼康-50i 熒光顯微鏡。果判讀L 數(shù)目：復(fù)閱 HE 切片，觀察腫瘤內(nèi)腫瘤浸潤淋巴細胞（tumor incyte，TIL）數(shù)目。TIL 僅代表腫瘤細胞巢內(nèi)或腫瘤腺體內(nèi)的淋巴細質(zhì)內(nèi)浸潤淋巴細胞（圖 1）。在淋巴細胞浸潤最多的區(qū)域計數(shù)至少野（200 倍），總數(shù)大于 42 個淋巴細胞/10 HPF 被定義為腫瘤具有高-20]。

中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文巴細胞 LAG-3（+），31 例（86.1%）腫瘤間質(zhì)浸潤淋巴細胞 FoxP3（+）（圖 2此外，，在腫瘤浸潤前沿淋巴細胞密度一般均高于腫瘤的中心區(qū)域以及間質(zhì)中淋細胞密度，腫瘤浸潤的前沿區(qū)域 LAG-3 及 FoxP3 陽性淋巴細胞的表達水平高腫瘤區(qū)域和間質(zhì)區(qū)域的浸潤淋巴細胞。LAG-3 與 FoxP3 在表達水平增高的病例腫瘤最大徑較大（P<0.01）；LAG-FoxP3 陽性淋巴細胞百分率與 TIL 數(shù)目正相關(guān)（P<0.01）；LAG-3 表達增高與瘤彌漫性的生長方式相關(guān)，腫瘤常布滿整個宮腔（P<0.01），LAG-3 和 FoxP3達與年齡，腫瘤位置，組織分化，腫瘤浸潤深度，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移， ER， PR 和 之間無顯著相關(guān)性（表 3）。dMMR 與 pMMR 病例相比，LAG-3 在 TIL 以及間浸潤淋巴細胞中表達增高（P<0.01），F(xiàn)oxP3 在間質(zhì)浸潤淋巴細胞中表達增（P<0.01）（表 2）。
【學(xué)位授予單位】：中國醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R737.33

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