【摘要】：目的:高危型HPV(HR-HPV)感染是宮頸病變發(fā)生的主要原因,HPV16為其主要型別。全球約60.6%的宮頸癌由HPV16感染引起。HPV16 E2、E6、L1、L2作為HPV致癌的關(guān)鍵基因,含有多種與RNA結(jié)合蛋白及蛋白復(fù)合體結(jié)合的位點(diǎn)。hnRNP E2作為一種特殊的RNA結(jié)合蛋白,在基因轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄后調(diào)控中具有獨(dú)特作用,其特有的KH域?yàn)槠渑cHPV16基因特異性結(jié)合提供了生物學(xué)基礎(chǔ)。但是在宮頸病變中hnRNP E2的作用及其與HPV16關(guān)鍵基因的關(guān)系目前尚無定論。本研究采用人群研究和體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)兩種方法,旨在探討hnRNP E2與HPV16關(guān)鍵基因在宮頸病變中的作用及其相互關(guān)系,以期為宮頸癌的病因和發(fā)病機(jī)制研究提供理論依據(jù),為宮頸癌的預(yù)防和治療開拓新思路。方法:從課題組2014年6月至2014年9月于山西省介休市建立的社區(qū)宮頸病變隊(duì)列中,選取正常宮頸(NC)婦女67名、低度宮頸上皮內(nèi)瘤變(CINⅠ)患者69名、高度宮頸上皮內(nèi)瘤變(CINⅡ/Ⅲ)患者68名,以及同期山西省腫瘤醫(yī)院確診的40名宮頸鱗狀細(xì)胞癌(SCC)患者為研究對(duì)象。采用結(jié)構(gòu)式問卷收集研究對(duì)象的一般人口學(xué)特征、個(gè)人生活習(xí)慣和生殖情況等資料的基礎(chǔ)上,采集宮頸活檢組織或手術(shù)標(biāo)本以及宮頸脫落細(xì)胞,采用導(dǎo)流雜交法檢測(cè)宮頸脫落細(xì)胞HPV16的感染情況,Western blot法檢測(cè)宮頸組織中hnRNP E2及HPV16 E2、E6、L1、L2的蛋白表達(dá)量。同時(shí)選取宮頸癌細(xì)胞SiHa(HPV16陽性)為研究對(duì)象,采用過表達(dá)技術(shù)對(duì)SiHa細(xì)胞的hnRNP E2進(jìn)行上調(diào)。設(shè)立hnRNP E2過表達(dá)組為實(shí)驗(yàn)組,以mock組(空白對(duì)照)和vector組(陰性對(duì)照)為對(duì)照,采用Real-time PCR法檢測(cè)HPV16各關(guān)鍵基因mRNA的表達(dá)水平。利用SPSS21.0軟件進(jìn)行相關(guān)資料的χ~2檢驗(yàn)、χ~2趨勢(shì)檢驗(yàn)、方差分析、重復(fù)測(cè)量方差分析。對(duì)不服從正態(tài)分布的資料采用Kruskal-Wallis H檢驗(yàn),兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。兩變量間的相關(guān)關(guān)系采用Spearman秩相關(guān)。以α=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。結(jié)果:1.HPV16感染與宮頸病變的關(guān)系:HPV16感染率在NC組、CINⅠ組、CINⅡ/Ⅲ組和SCC組分別為10.4%、14.5%、41.2%和67.5%,隨著病變程度的加重,HPV16感染率逐漸上升(χ~2_(趨勢(shì))=46.627,P0.001)。CINⅡ/Ⅲ組和SCC組HPV16的感染率均高于NC組。HPV16感染與宮頸病變呈正關(guān)聯(lián)(CINⅠ:aOR=3.23(0.61-17.07);CINⅡ/Ⅲ:aOR=13.19(2.59-67.22);SCC:aOR=49.45(7.87-310.61)),是宮頸病變的危險(xiǎn)因素。2.HPV16早期基因與宮頸病變的關(guān)系:HPV16 E2和E6的蛋白表達(dá)量在不同宮頸病變組的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(HPV16 E2:H=19.870,P=0.001;HPV16 E6:H=16.201,P=0.001)。HPV16 E2蛋白表達(dá)量在CINⅡ/Ⅲ組低于NC組,在SCC組均低于NC組和CINⅠ組;而HPV16 E6蛋白表達(dá)量在SCC組高于CINⅠ組,其余組間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。SCC組HPV16 E2/E6的比值均低于NC組和CINⅠ組。3.HPV16晚期基因與宮頸病變的關(guān)系:HPV16 L1蛋白表達(dá)量(H=12.011,P=0.007)和L2蛋白表達(dá)量(H=11.859,P=0.008)在不同宮頸病變組的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。SCC組HPV16 L1和L2蛋白表達(dá)量均低于CINⅠ組,其余組間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4.hnRNP E2與宮頸病變的關(guān)系:hnRNP E2的蛋白表達(dá)量在不同宮頸病變組的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(H=37.854,P0.001)。hnRNP E2蛋白表達(dá)水平在SCC組和CINⅡ/Ⅲ組均高于NC組,SCC組高于CINⅠ組,其余各組間的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。隨著宮頸病變程度的加重,hnRNP E2蛋白低表達(dá)率逐漸升高(χ~2_(趨勢(shì))=20.389,P0.001)。5.hnRNP E2與HPV16早期和晚期基因之間的關(guān)系:hnRNP E2的蛋白表達(dá)量與HPV16 E2/E6比值(r=0.212,P0.001)、HPV16 L1(r=0.278,P=0.022)和HPV16 L2(r=0.446,P0.001)之間呈正相關(guān)關(guān)系。HPV16 E2的蛋白表達(dá)量與HPV16 E6(r=-0.295,P=0.025)呈負(fù)相關(guān)關(guān)系,與HPV16 E2/E6比值(r=0.572,P0.001)呈正相關(guān)關(guān)系,其他因子之間的相關(guān)性無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。6.hnRNP E2對(duì)宮頸癌細(xì)胞HPV16基因表達(dá)的影響:hnRNP E2過表達(dá)組HPV16 E2、E6、L1和L2的mRNA表達(dá)水平均低于mock組和vector組(P0.05)。結(jié)論:1.HPV16感染可增加發(fā)生宮頸病變的風(fēng)險(xiǎn),因此及時(shí)對(duì)未感染者接種HPV疫苗,對(duì)于宮頸癌變的早期預(yù)防具有重要意義。HPV16 E2低表達(dá)、HPV16 E6高表達(dá)、L1和L2低表達(dá)、E2/E6低比值均可增加罹患CINⅡ/Ⅲ和SCC的風(fēng)險(xiǎn),可以作為CINⅡ/Ⅲ和SCC輔助診斷的生物標(biāo)志物,用于宮頸病變的早期篩查,對(duì)于癌變進(jìn)展的風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)具有潛在價(jià)值。2.hnRNP E2蛋白低表達(dá)可增加罹患CINⅡ/Ⅲ和SCC的風(fēng)險(xiǎn),提示hnRNP E2的表達(dá)水平可以反映宮頸病變的進(jìn)展,hnRNP E2表達(dá)降低可以作為宮頸病變加重的輔助診斷指標(biāo)。3.hnRNP E2與E2/E6比值、HPV16 L1和HPV16 L2蛋白表達(dá)量之間呈正相關(guān)關(guān)系,提示在宮頸病變的發(fā)生發(fā)展過程中,hnRNP E2與HPV16 E2、E6、L1和L2的表達(dá)可能存在相互影響。4.上調(diào)hnRNP E2后,宮頸癌細(xì)胞HPV16 E2、E6、L1和L2的mRNA表達(dá)水平均降低,提示hnRNP E2可能作為轉(zhuǎn)錄抑制因子,抑制HPV16 E2、E6、L1和L2的轉(zhuǎn)錄。
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R737.33

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2617514