發(fā)布時(shí)間：2020-04-06 14:48

【摘要】：子宮內(nèi)膜癌(Endometrial Carcinoma,EC)是影響婦女健康,最常見的生殖道惡性腫瘤之一。近年來,全世界范圍內(nèi)子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病率呈明顯上升,并趨于年輕化。盡管子宮內(nèi)膜癌的治療方法和意見不斷改善,但是晚期患者的治療仍為困難,五年生存率低、復(fù)發(fā)率高。仍需進(jìn)一步探索子宮內(nèi)膜癌發(fā)生發(fā)展的機(jī)制,尋找可靠的分子治療靶點(diǎn)并提高癌癥預(yù)后水平。課題組前期臨床研究發(fā)現(xiàn),與正常子宮內(nèi)膜組織相比,子宮內(nèi)膜癌組織中SNCG陽(yáng)性表達(dá)率明顯增高,并隨著淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、手術(shù)病理分期和肌層浸潤(rùn)深度的增加而增高,SNCG陽(yáng)性表達(dá)組總體生存率明顯低于陰性表達(dá)組。隨后,我們通過Western Blot技術(shù)篩選出SNCG蛋白高表達(dá)量的人子宮內(nèi)膜癌HEC-1A細(xì)胞株,并篩選出慢病毒質(zhì)粒載體沉默SNCG基因效果最佳的一組shRNA序列,構(gòu)建穩(wěn)定沉默SNCG基因的HCE-1A細(xì)胞株,并作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)的細(xì)胞模型。隨后通過CCK-8法、細(xì)胞克隆形成、細(xì)胞劃痕愈合、侵襲小室、細(xì)胞生長(zhǎng)周期及細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),SNCG基因沉默后,體外培養(yǎng)的子宮內(nèi)膜癌HEC-1A細(xì)胞增殖、遷移、侵襲和抗凋亡能力明顯減弱,細(xì)胞周期阻滯于G1、G2/M期。SNCG基因異常高表達(dá)促進(jìn)子宮內(nèi)膜癌惡性生物學(xué)行為的機(jī)制有待我們研究。國(guó)內(nèi)外研究表明,腫瘤的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)復(fù)雜的多途徑分子調(diào)控過程。而絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路是生物體內(nèi)重要的,并廣泛分布的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)之一,主要參與細(xì)胞的生長(zhǎng)、發(fā)育、分裂、分化和死亡等多種生化反應(yīng)信號(hào)的識(shí)別和傳遞過程。本研究首先構(gòu)建人子宮內(nèi)膜癌裸鼠皮下移植瘤模型,利用蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)HEC-1A細(xì)胞和裸鼠皮下移植瘤組織中MAPK相關(guān)蛋白的表達(dá)量,通過體外和體內(nèi)研究探討SNCG基因調(diào)控MAPK信號(hào)通路促進(jìn)子宮內(nèi)膜癌惡性生物學(xué)行為的分子機(jī)制。第一部分人子宮內(nèi)膜癌裸鼠皮下移植瘤模型的建立及SNCG基因?qū)σ浦擦錾L(zhǎng)的影響【目的】構(gòu)建人子宮內(nèi)膜癌裸鼠皮下移植瘤模型,并觀察SNCG基因穩(wěn)定沉默對(duì)人子宮內(nèi)膜癌裸鼠皮下移植瘤生長(zhǎng)情況的變化�！痉椒ā坷眉�(xì)胞傳代培養(yǎng)慢病毒質(zhì)粒載體shRNA處理后SNCG基因穩(wěn)定沉默的HEC-1A細(xì)胞(實(shí)驗(yàn)組),和僅轉(zhuǎn)染慢病毒空質(zhì)粒載體的HEC-1A細(xì)胞(空轉(zhuǎn)染組)。將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的兩組細(xì)胞株分別接種于20只雌性裸鼠右側(cè)肩胛背部皮下,建立人子宮內(nèi)膜癌裸鼠皮下移植瘤模型。觀察裸鼠皮下成瘤情況,并測(cè)量皮下瘤長(zhǎng)徑(L)和短徑(W),計(jì)算體積(V=1/6π×L×W~2)。4周后處死裸鼠,取出瘤體測(cè)量長(zhǎng)短徑和重量,并液氮冷凍保存�！窘Y(jié)果】實(shí)驗(yàn)組SNCG基因穩(wěn)定沉默的人子宮內(nèi)膜癌裸鼠皮下移植瘤生長(zhǎng)速度較空轉(zhuǎn)染組明顯減慢(P0.05)。裸鼠處死日,SNCG基因沉默的實(shí)驗(yàn)組移植瘤體積(75.06±85.46)mm~3明顯小于空轉(zhuǎn)染組(1112.58±590.90)mm~3(P0.05);且實(shí)驗(yàn)組移植瘤重量為(0.106±0.105)g,明顯小于空轉(zhuǎn)染組組(0.951±0.377)g(P0.05)�！窘Y(jié)論】SNCG基因沉默可抑制人子宮內(nèi)膜癌裸鼠皮下移植瘤的生長(zhǎng),所得瘤體為后續(xù)信號(hào)通路實(shí)驗(yàn)奠定組織基礎(chǔ)。第二部分SNCG基因調(diào)控MAPK信號(hào)通路促進(jìn)子宮內(nèi)膜癌惡性進(jìn)展的機(jī)制研究【目的】探討SNCG基因調(diào)控MAPK信號(hào)通路促進(jìn)人子宮內(nèi)膜癌惡性進(jìn)展的機(jī)制�！痉椒ā繉�(shí)驗(yàn)對(duì)象:細(xì)胞實(shí)驗(yàn)組:慢病毒質(zhì)粒載體sh RNA處理后SNCG穩(wěn)定沉默的HEC-1A細(xì)胞;細(xì)胞空轉(zhuǎn)染組:僅轉(zhuǎn)染慢病毒空質(zhì)粒載體的HEC-1A細(xì)胞;瘤體實(shí)驗(yàn)組:用SNCG基因沉默的HEC-1A細(xì)胞構(gòu)建的人子宮內(nèi)膜癌裸鼠皮下移植瘤組織;瘤體空轉(zhuǎn)染組:用空轉(zhuǎn)染組HEC-1A細(xì)胞構(gòu)建的人子宮內(nèi)膜癌裸鼠皮下移植瘤組織。通過蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)MAPK信號(hào)通路的相關(guān)蛋白ERK1/2、JNK1/2/3、P38、ERK5及各個(gè)磷酸化蛋白的相對(duì)表達(dá)量,并計(jì)算每個(gè)MAPK相關(guān)蛋白的磷酸化比值�！窘Y(jié)果】與細(xì)胞空轉(zhuǎn)染組相比,SNCG基因沉默的HEC-1A細(xì)胞ERK1+2、JNK1+2+3、P38、ERK5蛋白表達(dá)量無(wú)明顯差異(P0.05);但p-ERK1+2和p-ERK5表達(dá)下降,p-JNK1+2+3和p-P38表達(dá)增高;p-ERK1+2/ERK1+2比率和p-ERK5/ERK5比率降低,p-JNK1+2+3/JNK1+2+3比率和p-P38/P38比率增高(P0.05)。與瘤體空轉(zhuǎn)染組相比,SNCG基因沉默的人子宮內(nèi)膜癌裸鼠皮下移植瘤組織中ERK1+2、JNK1+2+3、P38、ERK5蛋白表達(dá)量無(wú)明顯差異(P0.05);但p-ERK1+2和p-ERK5表達(dá)下降,p-JNK1+2+3和p-P38表達(dá)增高;p-ERK1+2/ERK1+2比率和p-ERK5/ERK5比率降低,p-JNK1+2+3/JNK1+2+3比率和p-P38/P38比率增高(P0.05)。【結(jié)論】子宮內(nèi)膜癌SNCG基因高表達(dá)可激活ERK1/2和ERK5信號(hào)通路,并抑制JNK1/2/3和P38信號(hào)通路,從而促進(jìn)子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展。
【圖文】：

19圖 1-1 實(shí)驗(yàn)組和空轉(zhuǎn)染組人子宮內(nèi)膜癌裸鼠皮下移植瘤大體標(biāo)本Figure1-1 The general sample of subcutaneous xenograft tumor of human endometrial carcinoma innude mice of experimental group that SNCG stable silencing and empty vector transfection group.

-3 處死日實(shí)驗(yàn)組和空轉(zhuǎn)染組人子宮內(nèi)膜癌裸鼠皮下移植瘤體積柱olume of subcutaneous xenograft tumor of human endometrial carcinp that SNCG stable silencing and empty vector transfection group at-4 處死日實(shí)驗(yàn)組和空轉(zhuǎn)染組人子宮內(nèi)膜癌裸鼠皮下移植瘤重量柱eight of subcutaneous xenograft tumor of human endometrial carcinp that SNCG stable silencing and empty vector transfection group at
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R737.33

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本文編號(hào)：2616652