【摘要】：目的:稽留流產(chǎn)(Missed abortion,MA)是流產(chǎn)中的一種特殊類型,隨著二胎政策的放開,發(fā)病率逐漸升高,目前稽留流產(chǎn)的發(fā)病機制尚不十分明確,且缺乏早期預(yù)測靶標(biāo)。有研究認(rèn)為氧化應(yīng)激及凋亡可能參與了稽留流產(chǎn)的發(fā)生,本研究篩選參與氧化應(yīng)激,凋亡等多種代謝途徑的臨床常用血液指標(biāo):γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶(gamma glutamyltransferase,GGT),乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase,LDH),腺苷脫氨酶(adenosine deaminase,ADA)和纖維蛋白原(Fibrinogen,FIB),分析其在稽留流產(chǎn)患者及正常妊娠(Normal pregnancy,NP)孕婦外周血中的表達(dá)情況,并分析各項指標(biāo)的診斷價值。同時,檢測自噬關(guān)鍵因子Beclin-1及LC3在正常妊娠和稽留流產(chǎn)患者的妊娠組織(絨毛及蛻膜)中的表達(dá)情況,探究自噬與稽留流產(chǎn)發(fā)病機制之間的關(guān)系,為稽留流產(chǎn)篩選預(yù)測靶標(biāo)。通過Beclin-1相關(guān)的生物信息學(xué)分析,探索其可能涉及的致病機制。方法:1.回顧性分析2014年3月-2017年3月收治的795例稽留流產(chǎn)患者及694例正常妊娠患者其GGT,LDH,ADA和FIB的表達(dá)情況,并根據(jù)年齡平均分為年齡組1(17-27歲),年齡組2(28-38歲)和年齡組3(39-49歲)。分別統(tǒng)計每一年齡組的表達(dá)差異,以了解年齡因素與各指標(biāo)表達(dá)差異之間的關(guān)系。應(yīng)用ROC曲線對各項血液學(xué)指標(biāo)進(jìn)行分析。2.選取2017年1月-2017年3月收治的36例稽留流產(chǎn)患者作為稽留流產(chǎn)組,同期收治的36例自愿終止妊娠的正常妊娠孕婦作為正常妊娠組。利用HE染色觀察兩組絨毛及蛻膜組織的特點,利用免疫組化觀察Beclin-1在兩組絨毛及蛻膜組織中的定位情況,利用RT-PCR檢測兩組絨毛及蛻膜組織中Beclin-1mRNA的表達(dá)水平,利用Western Blot檢測兩組絨毛及蛻膜組織中Beclin-1蛋白、LC3II/LC3I比值的表達(dá)水平。3.應(yīng)用STRING在線軟件繪制Beclin-1蛋白互作網(wǎng)絡(luò)圖,進(jìn)而應(yīng)用DAVID在線分析軟件對篩選到的相互作用蛋白進(jìn)行信號通路富集分析,以預(yù)測Beclin-1參與的作用機制及可能調(diào)控的下游蛋白。結(jié)果:1.與正常妊娠患者相比,血清GGT和ADA水平在稽留流產(chǎn)患者中明顯增加(GGT:MA:17.68±9.85IU/L;NP:14.57±7.93 IU/L,P0.0001;ADA:MA:6.05±3.94 IU/L;NP:5.67±3.36 IU/L,P0.05),血漿FIB水平在稽留流產(chǎn)患者中呈下降趨勢(MA:4.31±0.91g/L;NP:4.44±0.96g/L,P0.01)。血清LDH水平在兩組之間沒有明顯差異(MA:148.05±30.46 IU/L;NP:149.34±27.88 IU/L,P0.05)。進(jìn)一步年齡分組發(fā)現(xiàn):ADA與FIB的表達(dá)僅在17-27歲年齡組有統(tǒng)計學(xué)差異,GGT在各年齡組中均有明顯的統(tǒng)計學(xué)差異。2.GGT、ADA、FIB、LDH的ROC曲線下面積(AUC)分別為0.643、0.548、0.539、0.527。3.HE染色顯示:與正常妊娠患者的絨毛及蛻膜組織相比,稽留流產(chǎn)絨毛組織的合體滋養(yǎng)層及細(xì)胞滋養(yǎng)層明顯萎縮變薄,滋養(yǎng)細(xì)胞中出現(xiàn)核固縮,絨毛組織出現(xiàn)不同程度的退行性改變,絨毛間質(zhì)出現(xiàn)纖維樣變性�；袅鳟a(chǎn)患者蛻膜組織的血管數(shù)目相對減少,血管腔不規(guī)則,表現(xiàn)為組織結(jié)構(gòu)疏松,腺上皮細(xì)胞腫脹,腺腔顯示不清,蛻膜細(xì)胞體積增大,染色較淺,表現(xiàn)出明顯的水腫。4.免疫組化顯示Beclin-1蛋白在稽留流產(chǎn)絨毛及蛻膜組織中的表達(dá)模式呈上調(diào)趨勢。5.與正常妊娠組相比,Beclin-1 mRNA在稽留流產(chǎn)絨毛(NP:1.00±0.17;MA:1.48±0.24,P0.001)及蛻膜組織(NP:1.00±0.37;MA:2.30±0.37,P0.001)中均呈上調(diào)趨勢,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。Beclin-1蛋白在稽留流產(chǎn)絨毛(NP:1.00±0.34;MA:2.90±0.60,P0.001)及蛻膜組織(NP:1.00±0.29;MA:3.00±0.73,P0.001)中均呈上調(diào)趨勢,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。LC3II/LC3I在稽留流產(chǎn)絨毛(NP:1.00±0.27;MA:2.34±0.46,P0.001)及蛻膜組織(NP:1.00±0.02;MA:1.89±0.33,P0.001)中均呈上調(diào)趨勢,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。6.通過STRING篩選到30個與Beclin-1相互作用的蛋白質(zhì),其中下游蛋白ATG14和PIK3C3有至關(guān)重要的作用。信號通路富集分析顯示,Beclin-1及其相互作用蛋白顯著富集在自噬、凋亡、癌癥、炎癥等途徑中。結(jié)論:1.與正常妊娠孕婦相比,稽留流產(chǎn)患者外周血中GGT及ADA水平均呈上調(diào)趨勢,FIB水平呈下調(diào)趨勢,且均有統(tǒng)計學(xué)差異,進(jìn)一步年齡分組后發(fā)現(xiàn)血清ADA與FIB的表達(dá)僅在17-27歲年齡組有統(tǒng)計學(xué)差異,GGT在各年齡組中均有明顯的統(tǒng)計學(xué)差異。同時,GGT的ROC曲線下面積最大,診斷價值相對較高,因此GGT有望成為稽留流產(chǎn)可靠的預(yù)測靶標(biāo)。2.Beclin-1 mRNA及蛋白的表達(dá)、LC3II/LC3I的比值在稽留流產(chǎn)患者的絨毛及蛻膜組織中均表現(xiàn)為上調(diào)趨勢,提示細(xì)胞自噬參與了稽留流產(chǎn)的發(fā)生。3.ATG14和PIK3C3可能是與Beclin-1密切相關(guān)的下游蛋白,同其他相關(guān)蛋白相互作用構(gòu)成的網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)可能作用于細(xì)胞自噬、凋亡、腫瘤、炎癥等通路,為今后進(jìn)一步研究Beclin-1在稽留流產(chǎn)中的作用機制提供了方向。
【圖文】：

pregnancy例數(shù) 年齡（歲） 流產(chǎn)患者 36 27.6±5.1 妊娠患者 36 28.3±4.4 >0.05 常妊娠患者及稽留流產(chǎn)患者絨毛及蛻膜組織組絨毛組織光鏡下的區(qū)別妊娠患者的絨毛組織大小均勻一致，光鏡下可見 層，絨毛間質(zhì)及血管。絨毛表面有 2 層滋養(yǎng)層質(zhì)呈空泡狀或細(xì)顆粒狀，為合體滋養(yǎng)層；內(nèi)層滋多角形，邊界清楚，細(xì)胞質(zhì)透明，為細(xì)胞滋養(yǎng)層

圖 3.3 稽留流產(chǎn)患者絨毛組織 HE 染色圖片（200X）.3 HE staining picture of villus tissue in patients with missed ab蛻膜組織光鏡下的區(qū)別妊娠患者的蛻膜組織結(jié)構(gòu)比較致密，可見到比較多的方狀或扁平狀，排列整齊，腺腔形態(tài)規(guī)則，腺體分泌正常，胞質(zhì)豐富，細(xì)胞核結(jié)構(gòu)清晰，，未見明顯炎性細(xì).4）
【學(xué)位授予單位】：江蘇大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R714.21

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本文編號：2615856