本文關(guān)鍵詞：EGCG對小鼠合子基因組激活和干細胞因子Sox2與Oct4表達的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:觀察表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)對小鼠體外發(fā)育1-細胞胚至2-細胞胚過渡的影響,研究EGCG對小鼠合子基因組激活和干細胞因子Sox2與Oct4表達水平的改變,為進一步探討EGCG影響小鼠植入前胚體外發(fā)育的機制提供實驗和理論依據(jù)。方法:1.以空白M16培養(yǎng)液為對照組,在M16中添加濃度為10μg/ml、20μg/ml EGCG為實驗組,收集昆明(kunming,KM)小鼠1-細胞胚(h CG后21h)。(1)進行體外連續(xù)培養(yǎng),計數(shù)各組發(fā)育至2-細胞胚、4-細胞胚、桑葚胚和囊胚的數(shù)目,并以1-細胞胚為基數(shù),計算各組至不同階段的發(fā)育率。(2)M16組及20μg/ml EGCG組的1-細胞胚體外培養(yǎng)至h CG后33h,利用熒光顯微鏡分別對磷酸化組蛋白H3陽性和陰性的1-細胞胚數(shù)量進行計數(shù),同時在倒置顯微鏡下計數(shù)2-細胞胚數(shù)量,觀察EGCG對1-細胞胚至2-細胞胚過渡的影響。。2.取h CG后21h 1-細胞胚分別在M16及20μg/ml EGCG培養(yǎng)液中體外培養(yǎng)至h CG后27h,收集1-細胞胚。(1)激光掃描共聚焦顯微鏡檢測e IF1A、ZSCAN4、SOX2和OCT4蛋白的表達定位情況。(2)Realtime-PCR檢測合子基因組激活相關(guān)基因e IF1A、Zscan4d、Mu ERV-L、Hsp70.1及干細胞因子Sox2與Oct4的m RNA水平。3.取h CG后27h 1-細胞胚分別在M16及20μg/ml EGCG培養(yǎng)液中體外培養(yǎng)至h CG后45h,收集2-細胞胚。(1)激光掃描共聚焦顯微鏡檢測e IF1A、ZSCAN4、SOX2和OCT4蛋白的表達定位情況。(2)Realtime-PCR檢測合子基因組激活相關(guān)基因e IF1A、Zscan4d、Mu ERV-L、Hsp70.1及干細胞因子Sox2與Oct4的m RNA水平。結(jié)果:1.添加EGCG實驗組的1-細胞胚體外培養(yǎng)各階段的發(fā)育率明顯高于M16組。添加20μg/ml EGCG的實驗組1-細胞胚至2-細胞胚的過渡率明顯高于對照組(P0.01),且未到2-細胞胚的1-細胞胚發(fā)育至M期的比率也高于M16組(P0.05)。2.體外培養(yǎng)的1-細胞胚(h CG后21h至27h):(1)激光掃描共聚焦顯微鏡檢測結(jié)果顯示:EGCG組1-細胞胚核內(nèi)ZSCAN4和SOX2熒光染色相對強度明顯高于M16組,其差異有統(tǒng)計學意義(P0.01),而1-細胞胚核內(nèi)e IF1A和OCT4熒光染色相對強度略高于M16組,其差異無統(tǒng)計學意義。(2)Realtime-PCR檢測結(jié)果顯示:EGCG組合子基因組激活相關(guān)基因Zscan4d、Mu ERV-L、Hsp70.1及干細胞因子Oct4的m RNA表達水平均高于M16組,其差異具有統(tǒng)計學意義(P0.01)。e IF1A和Sox2的m RNA表達水平略高于M16組,其差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。3.體外培養(yǎng)的2-細胞胚(h CG后27h至45h):(1)激光掃描共聚焦顯微鏡檢測結(jié)果顯示:EGCG組2-細胞胚核內(nèi)ZSCAN4和OCT4熒光染色相對強度明顯高于M16組,且差異有統(tǒng)計學意義(P0.01),2-細胞胚核內(nèi)e IF1A和SOX2熒光染色相對強度略高于M16組,其差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。(2)Realtime-PCR檢測結(jié)果顯示:EGCG組合子基因組激活相關(guān)基因Mu ERV-L、Hsp70.1及干細胞因子Oct4的m RNA表達水平高于M16組,且差異有統(tǒng)計學意義(P0.01)。e IF1A、Zscan4d及Sox2的m RNA表達水平略高于M16組,差異都無統(tǒng)計學意義(P0.05)。結(jié)論EGCG可以顯著提高小鼠胚胎體外發(fā)育1-細胞胚至2-細胞胚的過渡率,促進植入前胚早期的細胞周期進程。EGCG組1-細胞胚內(nèi)合子基因組激活相關(guān)基因Zscan4d、Mu ERV-L、Hsp70.1以及干細胞因子Oct4的m RNA水平明顯高于M16組,且SOX2的蛋白水平也明顯升高,說明EGCG可能調(diào)控小規(guī)模合子基因組的激活以及SOX2、Oct4的表達,促進1-細胞胚向2-細胞胚過渡。其次,EGCG組2-細胞胚內(nèi)e IF1A、Mu ERV-L、Hsp70.1與Oct4的m RNA或蛋白水平也明顯提高。這些結(jié)果顯示,EGCG可能通過調(diào)節(jié)合子基因組的激活及干細胞因子的表達水平,促進植入前胚的體外發(fā)育。
【關(guān)鍵詞】：表沒食子兒茶素沒食子酸酯 植入前胚 合子基因組激活 干細胞因子
【學位授予單位】：福建醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R714.8
【目錄】：

• 英語縮略語表4-5
• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-11
• 第一部分 EGCG 對小鼠 1-細胞胚合子基因組激活和干細胞因子 Sox2 與 Oct4 表達的影響11-34
• 1 實驗材料12-17
• 2 方法17-22
• 3 結(jié)果22-30
• 4 討論30-34
• 第二部分 EGCG 對小鼠 2-細胞胚合子基因組激活和干細胞因子 Sox2 與 Oct4 表達的影響34-47
• 1 實驗材料35-37
• 2 方法37-38
• 3 結(jié)果38-44
• 4 討論44-47
• 結(jié)論47-48
• 參考文獻48-52
• 綜述52-61
• 參考文獻58-61
• 致謝61

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 尚利青;張麗;鄭愛燕;鄒恒;李擁軍;;不同濃度EGCG對山羊卵母細胞成熟受精的影響[J];中國草食動物;2009年02期

2 于華忠,張東山,龔竹瓊;茶葉中EGCG含量分析研究[J];福建茶葉;2004年04期

3 邵根寶;高愛民;徐銀學;丁紅梅;賈超;劉紅林;;小鼠植入前胚胎MuERV-L基因表達特征研究[J];南京農(nóng)業(yè)大學學報;2007年04期

4 谷亞輕;李琳;尹萍;季金強;李擁軍;;EGCG對小鼠卵母細胞成熟的影響[J];上海畜牧獸醫(yī)通訊;2008年03期

  本文關(guān)鍵詞：EGCG對小鼠合子基因組激活和干細胞因子Sox2與Oct4表達的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：259834