【摘要】：目的： 研究新型Ⅱa類HDAC抑制劑CC1007能否增強人卵巢癌細胞株HO8910、SKOV3、SKOV3/DDP對順鉑的敏感性及產(chǎn)生逆轉(zhuǎn)耐藥的作用,并初步探討CC1007靶向HDAC4復合物調(diào)節(jié)STAT1活性逆轉(zhuǎn)卵巢癌順鉑耐藥的可能機制。 方法： 1.采用體外誘導的方式,取對數(shù)生長期SKOV3細胞在含順鉑的培養(yǎng)液中培養(yǎng),逐漸增加藥物濃度,誘導出耐藥細胞株SKOV3/DDP。 2.MTT比色法檢測不同藥物組干預HO8910、SKOV3、SKOV3/DDP細胞24h、48h、72h后細胞生長抑制率,實驗分組設立空白組、對照組、單用順鉑組、單用CC1007組、順鉑聯(lián)合CC1007組,計算半數(shù)抑制濃度(IC50),并繪制濃度-抑制率圖形及時問-抑制率圖形。實驗重復3次。 3.蛋白質(zhì)印跡法分析不同藥物組處理前后HDAC4、STAT1、pSTAT1的表達情況。實驗重復3次。 4.實驗所得數(shù)據(jù)應用SPSS17.0統(tǒng)計學軟件進行統(tǒng)計學分析,P0.05表示有統(tǒng)計學意義,統(tǒng)計方法使用單因素方差分析、直線回歸分析及t檢驗。 結(jié)果： 1.對SKOV3細胞經(jīng)過順鉑誘導,獲得在順鉑濃度為2.0ug/ml培養(yǎng)基中良好生長的SKOV3/DDP細胞株,耐藥指數(shù)RI=耐藥細胞IC50/親本細胞IC50=10.251(ug/ml)/3.081(ug/ml)=3.33。 2.MTT比色法檢測：(1).單用CC1007組：H08910細胞48h半數(shù)抑制濃度IC50為10.831±1.035μM,SKOV3細胞48h半數(shù)抑制濃度IC50為60.462±1.781μM, SKOV3/DDP細胞48h半數(shù)抑制濃度IC50為28.355土1.453μM。(2).單用順鉑組：H08910細胞24h半數(shù)抑制濃度IC50為5.492ug/ml,48h IC50為1.207ug/ml,72h IC50為0.762ug/ml; SKOV3細胞24h半數(shù)抑制濃度IC50為5.161ug/ml,48h IC50為3.081ug/ml,72h IC50為2.570ug/ml; SKOV3/DDP細胞24h半數(shù)抑制濃度IC50為32.817ug/ml,48hIC50為10.251ug/ml,72h IC50為6.470ug/ml。順鉑對三種卵巢癌細胞的抑制率呈明顯濃度和時間依賴關系,三種卵巢癌細胞對順鉑敏感程度依次為：HO8910SKOV3SKOV3/DDP細胞。(3).順鉑聯(lián)合CC1007組：5μM CC1007聯(lián)合順鉑對H08910細胞48h順鉑半數(shù)抑制濃度IC50為0.476ug/ml;10μM CC1007聯(lián)合順鉑對SKOV3細胞48h順鉑IC50為1.81ug/ml;10μM CC1007聯(lián)合順鉑對SKOV3/DDP細胞48h順鉑IC50為3.572ug/ml。順鉑聯(lián)合CC1007與單用順鉑兩種用藥方式比較差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),低劑量CC1007對三種卵巢癌細胞HO8910、SKOV3、SKOV3/DDP的順鉑增敏作用顯著。 3.蛋白質(zhì)印跡法分析：(1).STAT1基礎表達量與三種細胞順鉑的IC50呈正相關；·(2).HDAC4表達水平與卵巢癌細胞順鉑耐藥性呈正相關,耐藥株SKOV3/DDP較其親本株SKOV3的HDAC4表達量有所增加；(3).三種卵巢癌細胞中p-STAT1基礎表達量均不高,順鉑作用下,HDAC4低表達的H08910中p-STAT1表達量無明顯改變,HDAC4高表達的SKOV3/DDP中p-STAT1表達量明顯增加,CC1007抑制了順鉑誘導的p-STAT1表達增加,在HDAC4高表達的SKOV3/DDP中抑制作用最顯著。 結(jié)論： 1.低劑量CC1007能明顯增強HO8910、SKOV3對順鉑的敏感性,且一定程度上逆轉(zhuǎn)了耐藥細胞株SKOV3/DDP耐藥性。 2. HDAC4表達水平與卵巢癌細胞的順鉑敏感性呈負相關,卵巢癌的順鉑耐藥性與HDAC4高表達從而激活STAT1(p-STAT1表達增加)相關。 3.CC1007能靶向HDAC4復合物,抑制HDAC4復合物介導的STAT1激活,發(fā)揮逆轉(zhuǎn)卵巢癌順鉑耐藥的作用。
【圖文】：

SK0V3/DDP圖5三種細胞HDAC4基礎表達量，兩兩比較P<0.05，，有統(tǒng)計學意義3.2.3三種細胞不同藥物分組P-STAT1表達Western blot法檢測H08910、SKOV3、SK0V3/DDP三種細胞不同藥物分組P-STAT1表達量，（3-actin作為內(nèi)參。結(jié)果顯示，三種細胞p-STATl基礎表達量均不高，H08910細胞中P-STAT1表達量，除control組與單用CC1007組比較P<0.05外，其余各組兩兩比較P〉0.05,差異無統(tǒng)計學意義（見圖6)
【學位授予單位】：中南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R737.31

【共引文獻】

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本文編號：2587091