【摘要】：目的： 研究新型Ⅱa類(lèi)HDAC抑制劑CC1007能否增強(qiáng)人卵巢癌細(xì)胞株HO8910、SKOV3、SKOV3/DDP對(duì)順鉑的敏感性及產(chǎn)生逆轉(zhuǎn)耐藥的作用,并初步探討CC1007靶向HDAC4復(fù)合物調(diào)節(jié)STAT1活性逆轉(zhuǎn)卵巢癌順鉑耐藥的可能機(jī)制。 方法： 1.采用體外誘導(dǎo)的方式,取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期SKOV3細(xì)胞在含順鉑的培養(yǎng)液中培養(yǎng),逐漸增加藥物濃度,誘導(dǎo)出耐藥細(xì)胞株SKOV3/DDP。 2.MTT比色法檢測(cè)不同藥物組干預(yù)HO8910、SKOV3、SKOV3/DDP細(xì)胞24h、48h、72h后細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率,實(shí)驗(yàn)分組設(shè)立空白組、對(duì)照組、單用順鉑組、單用CC1007組、順鉑聯(lián)合CC1007組,計(jì)算半數(shù)抑制濃度(IC50),并繪制濃度-抑制率圖形及時(shí)問(wèn)-抑制率圖形。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。 3.蛋白質(zhì)印跡法分析不同藥物組處理前后HDAC4、STAT1、pSTAT1的表達(dá)情況。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。 4.實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,P0.05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,統(tǒng)計(jì)方法使用單因素方差分析、直線回歸分析及t檢驗(yàn)。 結(jié)果： 1.對(duì)SKOV3細(xì)胞經(jīng)過(guò)順鉑誘導(dǎo),獲得在順鉑濃度為2.0ug/ml培養(yǎng)基中良好生長(zhǎng)的SKOV3/DDP細(xì)胞株,耐藥指數(shù)RI=耐藥細(xì)胞IC50/親本細(xì)胞IC50=10.251(ug/ml)/3.081(ug/ml)=3.33。 2.MTT比色法檢測(cè)：(1).單用CC1007組：H08910細(xì)胞48h半數(shù)抑制濃度IC50為10.831±1.035μM,SKOV3細(xì)胞48h半數(shù)抑制濃度IC50為60.462±1.781μM, SKOV3/DDP細(xì)胞48h半數(shù)抑制濃度IC50為28.355土1.453μM。(2).單用順鉑組：H08910細(xì)胞24h半數(shù)抑制濃度IC50為5.492ug/ml,48h IC50為1.207ug/ml,72h IC50為0.762ug/ml; SKOV3細(xì)胞24h半數(shù)抑制濃度IC50為5.161ug/ml,48h IC50為3.081ug/ml,72h IC50為2.570ug/ml; SKOV3/DDP細(xì)胞24h半數(shù)抑制濃度IC50為32.817ug/ml,48hIC50為10.251ug/ml,72h IC50為6.470ug/ml。順鉑對(duì)三種卵巢癌細(xì)胞的抑制率呈明顯濃度和時(shí)間依賴(lài)關(guān)系,三種卵巢癌細(xì)胞對(duì)順鉑敏感程度依次為：HO8910SKOV3SKOV3/DDP細(xì)胞。(3).順鉑聯(lián)合CC1007組：5μM CC1007聯(lián)合順鉑對(duì)H08910細(xì)胞48h順鉑半數(shù)抑制濃度IC50為0.476ug/ml;10μM CC1007聯(lián)合順鉑對(duì)SKOV3細(xì)胞48h順鉑IC50為1.81ug/ml;10μM CC1007聯(lián)合順鉑對(duì)SKOV3/DDP細(xì)胞48h順鉑IC50為3.572ug/ml。順鉑聯(lián)合CC1007與單用順鉑兩種用藥方式比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),低劑量CC1007對(duì)三種卵巢癌細(xì)胞HO8910、SKOV3、SKOV3/DDP的順鉑增敏作用顯著。 3.蛋白質(zhì)印跡法分析：(1).STAT1基礎(chǔ)表達(dá)量與三種細(xì)胞順鉑的IC50呈正相關(guān)；·(2).HDAC4表達(dá)水平與卵巢癌細(xì)胞順鉑耐藥性呈正相關(guān),耐藥株SKOV3/DDP較其親本株SKOV3的HDAC4表達(dá)量有所增加；(3).三種卵巢癌細(xì)胞中p-STAT1基礎(chǔ)表達(dá)量均不高,順鉑作用下,HDAC4低表達(dá)的H08910中p-STAT1表達(dá)量無(wú)明顯改變,HDAC4高表達(dá)的SKOV3/DDP中p-STAT1表達(dá)量明顯增加,CC1007抑制了順鉑誘導(dǎo)的p-STAT1表達(dá)增加,在HDAC4高表達(dá)的SKOV3/DDP中抑制作用最顯著。 結(jié)論： 1.低劑量CC1007能明顯增強(qiáng)HO8910、SKOV3對(duì)順鉑的敏感性,且一定程度上逆轉(zhuǎn)了耐藥細(xì)胞株SKOV3/DDP耐藥性。 2. HDAC4表達(dá)水平與卵巢癌細(xì)胞的順鉑敏感性呈負(fù)相關(guān),卵巢癌的順鉑耐藥性與HDAC4高表達(dá)從而激活STAT1(p-STAT1表達(dá)增加)相關(guān)。 3.CC1007能靶向HDAC4復(fù)合物,抑制HDAC4復(fù)合物介導(dǎo)的STAT1激活,發(fā)揮逆轉(zhuǎn)卵巢癌順鉑耐藥的作用。
【圖文】：

SK0V3/DDP圖5三種細(xì)胞HDAC4基礎(chǔ)表達(dá)量，兩兩比較P<0.05，，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義3.2.3三種細(xì)胞不同藥物分組P-STAT1表達(dá)Western blot法檢測(cè)H08910、SKOV3、SK0V3/DDP三種細(xì)胞不同藥物分組P-STAT1表達(dá)量，（3-actin作為內(nèi)參。結(jié)果顯示，三種細(xì)胞p-STATl基礎(chǔ)表達(dá)量均不高，H08910細(xì)胞中P-STAT1表達(dá)量，除control組與單用CC1007組比較P<0.05外，其余各組兩兩比較P〉0.05,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（見(jiàn)圖6)
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R737.31

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2587091