本文關鍵詞：EFNB2和TM4SF1基因在宮頸癌干細胞樣細胞中的表達分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景及目的： 腫瘤干細胞學說認為腫瘤干細胞是腫瘤發(fā)生與復發(fā)的根源，針對腫瘤干細胞展開靶向治療是腫瘤治療的新方向。由于缺乏公認的宮頸干細胞標記物，使宮頸癌干細胞的研究極為困難，雖然，有學者采用SP法或無血清懸浮培養(yǎng)法，分離出了宮頸癌干細胞樣細胞，但它仍不夠純化，更缺乏對明確的表面標記物。本研究擬采用差異基因顯示技術，檢測經證實富集了宮頸癌干細胞的研究組細胞（SP+細胞及ABCG2+細胞），與缺乏宮頸癌干細胞的對照組細胞進行比較，依據(jù)各基因表達豐度差異，篩選出差異序列。為宮頸癌干細胞表面標記物的篩選提供依據(jù)，為進一步的宮頸腫瘤干細胞的分離與鑒定打下基礎，為宮頸癌以腫瘤干細胞為標靶進行治療提供線索。 方法： 1、選取于我院手術治療的宮頸鱗狀細胞癌IB2期患者標本，采用組織塊法進行原代培養(yǎng)，凍存、復蘇，利用流式細胞技術對建系培養(yǎng)的宮頸癌原代細胞進行SP分選。 2、選取宮頸癌Hela細胞進行培養(yǎng)，流式細胞技術進行ABCG2分選。 3、分別抽提分選的SP細胞、NSP細胞、ABCG2+細胞、ABCG2-細胞總RNA，逆轉錄合成cDNA，利用芯片篩選兩組細胞的差異表達基因。 4、對宮頸癌P10代細胞分選SP細胞和NSP細胞提取RNA進行RT-PCQ檢測，檢測目的基因的mRNA表達水平，驗證差異基因。 結果： 經過數(shù)據(jù)分析，在宮頸癌原代細胞中SP細胞的比例為1.66%。與之相對的，Hoechst33342陽性細胞為非側群細胞（NSP）。在加入ABC轉運蛋白抑制劑維拉帕米后，低Hoechst的SP細胞的比例顯著降低（＜1%）。 免疫熒光標記流式細胞儀檢測宮頸癌細胞株Hela細胞中ABCG2+細胞所占比例為11%，，其余為ABCG2-細胞亞群。 ABCG2+組與ABCG2-組相比，上調基因1801個，下調基因229。SP組與NSP組相比，上調基因1019個，下調基因405。兩組對照下調基因中存在55個交集基因，上調基因中存在12個交集基因。 EFNB2基因和TM4SF1基因在SP細胞及NSP細胞中均表達。RT-PCR實驗結果顯示，SP細胞中EFNB2基因表達量是NSP細胞的(7.12)倍。TM4SF1基因表達量是NSP細胞的(7.68)倍。 結論： 1、宮頸癌原代細胞中分離的SP細胞同ABCG2+細胞一樣，具有腫瘤干細胞的特性。 2、TM4SF1和EFNB2基因在宮頸癌原代SP細胞中高表達，可作為宮頸癌干細胞候選特異性表面標記物。 3、TM4SF1和EFNB2基因為分離宮頸癌干細胞提供了線索,為腫瘤干細胞靶向治療提供了新的思路和依據(jù)。
【關鍵詞】：EFNB2 TM4SF1 宮頸癌干細胞樣細胞 差異基因
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R737.33
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• ABSTRACT6-8
• 中英文縮略詞8-11
• 第1章 綜述11-17
• 1.1 腫瘤干細胞的概況11-12
• 1.2 腫瘤干細胞的分離純化12-14
• 1.3 差異基因與腫瘤干細胞的研究14-17
• 1.3.1 差異顯示技術在腫瘤研究中的應用14-15
• 1.3.2 差異顯示技術的分類15-17
• 第2章 宮頸癌干細胞樣細胞的分選17-24
• 2.1 宮頸癌 Hela 細胞的培養(yǎng)及 ABCG2 分選17-20
• 2.1.1 材料17-18
• 2.1.2 方法18-19
• 2.1.3 結果19-20
• 2.2 宮頸癌原代細胞的培養(yǎng)及 SP 分選20-24
• 2.2.1 材料20-21
• 2.2.2 方法21-22
• 2.2.3 結果22-24
• 第3章 基因芯片技術篩選宮頸癌細胞差異基因24-31
• 3.1 材料24-25
• 3.1.1 實驗細胞24
• 3.1.2 主要儀器和設備24
• 3.1.3 主要試劑24-25
• 3.2 試驗方法25-26
• 3.2.1 基因芯片表達譜檢測25-26
• 3.3 結果26-31
• 3.3.1 各個樣本 RNA 檢測報告26-27
• 3.3.2 基因序列檢測及分析27-31
• 第4章 宮頸癌原代細胞分選 SP 細胞及 NSP 細胞中差異基因的表達31-37
• 4.1 材料31-32
• 4.1.1 實驗細胞31
• 4.1.2 主要儀器及設備31-32
• 4.1.3 主要試劑32
• 4.2 試驗方法 RT-PCR 方法32-35
• 4.2.1 標本收集32
• 4.2.2 引物的設計與合成32-33
• 4.2.3 Trizol 法提取總 RNA33
• 4.2.4 反轉錄合成 cDNA33-34
• 4.2.5 熒光定量 RPC 的擴增34
• 4.2.6 結果判定34-35
• 4.3 結果35-37
• 第5章 討論37-43
• 5.1 宮頸癌干細胞的培養(yǎng)與分選37-38
• 5.2 差異基因篩選宮頸癌干細胞38-39
• 5.3 EFNB2 基因在宮頸癌干細胞樣細胞中的表達39-41
• 5.4 TM4SF1 基因在宮頸癌干細胞樣細胞中的表達41-43
• 第6章 結論43-44
• 參考文獻44-49
• 作者簡介及在學期間所取得的科研成果49-50
• 致謝50

【參考文獻】

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  本文關鍵詞：EFNB2和TM4SF1基因在宮頸癌干細胞樣細胞中的表達分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：257317