【摘要】：目的:探索安石榴甙(PUN)在機(jī)械力誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞凋亡中的作用及其可能機(jī)制。方法:不同濃度(0、2.5、5、10、25、50、100μmol/L)的PUN處理L929細(xì)胞不同時(shí)間(12、24、48小時(shí))后,采用CCK8法檢測(cè)細(xì)胞增殖活性;采用Western blot檢測(cè)不同濃度PUN(0、2.5、5、10、25μmol/L)處理24小時(shí)后Nrf2蛋白表達(dá);將L929細(xì)胞根據(jù)是否行PUN(10μmol/L,24小時(shí))預(yù)處理和是否采用四點(diǎn)彎曲力學(xué)加載系統(tǒng)進(jìn)行機(jī)械力干預(yù)(5333μstrain,1 Hz,4小時(shí))分為4組:空白對(duì)照組、加力組、PUN組及PUN加力組,采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡率;采用Western blot檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白Bax、Bcl-2及caspase3的表達(dá);采用H2DCF-DA熒光探針檢測(cè)各組細(xì)胞內(nèi)活性氧簇(ROS)水平的變化。結(jié)果:PUN在濃度10μmol/L、作用時(shí)間24小時(shí)對(duì)細(xì)胞增殖活性及Nrf2蛋白表達(dá)的促進(jìn)作用最顯著;與對(duì)照組相比,加力組細(xì)胞凋亡率明顯增加、ROS水平顯著上升、Bax表達(dá)和Active-caspase3/caspase3比率明顯增加(P0.05);與加力組相比,PUN加力組細(xì)胞凋亡率顯著減少、ROS水平明顯降低、Bcl2表達(dá)顯著增加、Bax表達(dá)和Active-caspase3/caspase3比率降低(P0.05)。結(jié)論:PUN可明顯減少機(jī)械力誘導(dǎo)的成纖維細(xì)胞凋亡,其機(jī)制可能是通過(guò)上調(diào)抗氧化蛋白Nrf2的表達(dá),從而抑制機(jī)械力誘導(dǎo)ROS水平上升所導(dǎo)致的氧化損傷。

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