【摘要】：目的： 探討內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激對(duì)HeLa細(xì)胞碳離子輻射應(yīng)答的影響及可能機(jī)制。 材料與方法： 利用內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)劑二硫蘇糖醇誘導(dǎo)HeLa細(xì)胞發(fā)生內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng),MTT法分析不同濃度二硫蘇糖醇對(duì)HeLa細(xì)胞存活的影響。用不同劑量的碳離子輻照二硫蘇糖醇預(yù)處理的HeLa細(xì)胞,用細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)分析細(xì)胞存活,用流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞周期分布及細(xì)胞凋亡率,用細(xì)胞衰老β-半乳糖苷酶檢測(cè)試劑盒檢測(cè)細(xì)胞衰老,用熒光顯微鏡及流式細(xì)胞儀觀察并檢測(cè)細(xì)胞酸性自噬泡和自噬相關(guān)蛋白Beclin1的表達(dá),用常規(guī)制片法評(píng)估染色體畸變情況。并用自噬抑制劑3-MA研究了碳離子輻射誘導(dǎo)的自噬對(duì)HeLa細(xì)胞存活的影響。 結(jié)果與結(jié)論： (1)我們的研究結(jié)果表明,單獨(dú)碳離子輻照可以使HeLa細(xì)胞存活率下降,并導(dǎo)致G2/M期和凋亡細(xì)胞顯著增加。我們還發(fā)現(xiàn)碳離子輻照后AVO陽(yáng)性細(xì)胞和Beclin1蛋白質(zhì)表達(dá)水平的都升高了,提示在HeLa細(xì)胞中有自噬發(fā)生。此外,碳離子輻照后HeLa細(xì)胞發(fā)生衰老現(xiàn)象。 (2)當(dāng)加入自噬抑制劑3-MA后,酸性自噬泡細(xì)胞陽(yáng)性率顯著減少,自噬相關(guān)蛋白Beclin1的表達(dá)下降,表明自噬受到抑制。與單獨(dú)輻照組相比,3-MA聯(lián)合碳離子輻照引起了顯著的G2/M期阻滯和細(xì)胞凋亡,表明自噬對(duì)細(xì)胞遭受的碳離子輻射起到保護(hù)效應(yīng),3-MA具有輻射增敏作用。 (3)二硫蘇糖醇可以增加碳離子輻照引起的細(xì)胞死亡,降低克隆存活率,提示二硫蘇糖醇具有明顯的輻射增敏作用；與單獨(dú)輻照組相比,二硫蘇糖醇聯(lián)合碳離子輻照引起了顯著的G2/M期阻滯和細(xì)胞凋亡；而且,聯(lián)合處理組中有明顯的細(xì)胞衰老現(xiàn)象。同時(shí)我們還發(fā)現(xiàn),與單獨(dú)碳離子輻照組相比,加入二硫蘇糖醇后酸性自噬泡陽(yáng)性細(xì)胞率和自噬相關(guān)蛋白Belcin1表達(dá)水平都明顯上升,提示二硫蘇糖醇聯(lián)合碳離子輻照作用后細(xì)胞自噬被明顯激活。此時(shí)在聯(lián)合作用組中出現(xiàn)更多的衰老細(xì)胞和染色體畸變。 結(jié)果表明：持續(xù)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激改變了宮頸癌HeLa細(xì)胞對(duì)碳離子的輻射反應(yīng),有效增強(qiáng)HeLa細(xì)胞死亡,抑制其增殖活性,細(xì)胞自噬性細(xì)胞死亡、衰老和遺傳損傷可能是聯(lián)合處理增強(qiáng)HeLa細(xì)胞死亡的重要機(jī)制。
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R737.33

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2560119