【摘要】：目的:探討PKCε-siRNA對人宮頸癌ME180細(xì)胞蛋白激酶Cε(PKCε)mRNA、蛋白表達(dá)及ME180細(xì)胞增殖與侵襲能力影響。方法:建立PKCε-siRNA轉(zhuǎn)染組(實驗組)、NC-siRNA轉(zhuǎn)染組(陰性對照組)、未行處理組(對照組)。Real-time PCR法檢測各組細(xì)胞PKCεmRNA表達(dá)。Western-blot法檢測各組PKCε、細(xì)胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、基質(zhì)金屬蛋白酶2(MMP-2)蛋白表達(dá)。采用MTT比色法觀察各組細(xì)胞增殖能力,采用劃痕實驗觀察各組細(xì)胞遷移能力,采用Transwell法觀察各組細(xì)胞侵襲能力,熒光素酶報告基因檢測絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)信號通路的活性。結(jié)果:與對照組相比,實驗組PKCεmRNA明顯降低,表達(dá)量為對照組的18.3%,兩組差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。PKCε、Cyclin D1、MMP-2蛋白表達(dá)水平明顯降低。在MTT實驗中,實驗組細(xì)胞72小時的A值為0.517±0.031,與對照組(0.925±0.063)相比增殖能力明顯降低,兩組差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。實驗組遷移和侵襲能力明顯低于對照組。實驗組MAPK轉(zhuǎn)錄活性(4.5±0.2)低于對照組(16.3±0.9),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:通過siRNA技術(shù)降低PKCε表達(dá),可有效干擾MAPK通路,明顯抑制宮頸癌ME180細(xì)胞增殖及遷移侵襲能力。

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本文編號：2557674