【摘要】：目的探討不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)與蛻膜組織中巨噬細(xì)胞自噬狀態(tài)之間的關(guān)系。方法根據(jù)流產(chǎn)情況分為不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)組(觀察組)和人工流產(chǎn)組(對照組),每組病例各30例。將蛻膜組織制成細(xì)胞懸液后分離淋巴細(xì)胞,通過CD14+免疫磁珠分選巨噬細(xì)胞,抗F4/80檢測純度,比較兩組中巨噬細(xì)胞數(shù)量。通過免疫組化檢測蛻膜中巨噬細(xì)胞表達(dá),評價(jià)巨噬細(xì)胞與流產(chǎn)間關(guān)系;通過RT-q PCR檢測細(xì)胞自噬相關(guān)基因Atg5,Atg7,LC3-Ⅱ和Bnip3表達(dá)水平的改變;Western Blot檢測LC3-Ⅱ水平以評價(jià)自噬狀態(tài),對比兩組之間差異。結(jié)果觀察組中巨噬細(xì)胞純度為(88.87±3.89)%,對照組為(82.84±3.98)%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=5.93,P0.01)。巨噬細(xì)胞在觀察組中陽性表達(dá)率為96.7%(29/30)高于對照組中的80.0%(24/30)。觀察組中自噬相關(guān)基因ATG5、ATG7、LC3-Ⅱ和Bnip3的m RNA表達(dá)水平高于對照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t值分別為2.90,2.67,12.00,12.13,P值均0.01)。Western Blot檢測顯示觀察組中LC3-Ⅱ相對表達(dá)量為0.51±0.23,對照組為0.24±0.09,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=5.96,P0.01)。結(jié)論在不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)病例中,蛻膜中巨噬細(xì)胞的自噬高于對照組,巨噬細(xì)胞的自噬與不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的發(fā)生有一定的相關(guān)性。
【圖文】：

0.000175）；觀察組中巨噬細(xì)胞含量為（2.29±0.16）×106/mL；對照組為（2.13±0.01）×106/mL兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=5.50,P=0.000698）。2.2免疫組化檢測蛻膜中巨噬細(xì)胞情況以抗F4/80為單抗，蛻膜組織石蠟切片為標(biāo)本行免疫組化，檢測蛻膜組織中各組巨噬細(xì)胞含量。巨噬細(xì)胞在觀察組與對照組中均有表達(dá)（見圖1），但是在觀察組中陽性表達(dá)率為96.7%（29/30）遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于對照組中的陽性率80.0%（24/30）（見表1）。χ2檢驗(yàn)顯示兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.04，P=0.021）。a、b:觀察組c、d:對照組圖1免疫組化檢測兩組蛻膜組織中巨噬細(xì)胞含量（免疫組化×200）表1免疫組化檢測兩組巨噬細(xì)胞含量（例）組別觀察組對照組例數(shù)3030F4/80蛋白的表達(dá)（染色強(qiáng)度×陽性細(xì)胞百分比）-16+26++1010+++1782.3蛻膜組織中巨噬細(xì)胞自噬現(xiàn)象的檢測2.3.1RT-qPCR方法檢測與細(xì)胞自噬相關(guān)的基因表達(dá)水平的改變從新鮮蛻膜組織中獲取的巨噬細(xì)胞，抽提RNA后經(jīng)凝膠電泳驗(yàn)證，證實(shí)mRNA保存完整。見圖2。圖2RNA電泳圖通過RT-qPCR擴(kuò)增巨噬細(xì)胞中的自噬相關(guān)基因ATG5、ATG7、LC3-Ⅱ和Bnip3的mRNA，與內(nèi)參比較獲得其相對表達(dá)量。其中觀察組中ATG5、ATG7、LC3-Ⅱ和Bnip3的mRNA相對表達(dá)量分別··765

。4個(gè)自噬相關(guān)基因mRNA表達(dá)水平在兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t值分別為2.90，2.67,12.00,12.13，P值分別為0.006,0.011,0.000和0.000），觀察組中自噬相關(guān)基因的表達(dá)水平高于對照組。2.3.2WesternBlot檢測兩組LC3-Ⅱ表達(dá)情況以GAPDH蛋白表達(dá)為內(nèi)參照，，觀察組中LC3-Ⅱ表達(dá)量為0.51±0.23，對照組表達(dá)量為0.24±0.09，兩組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=5.96,P=0.000)。圖3為部分樣本中LC3-Ⅱ的WesternBlot檢測結(jié)果。圖4為所有樣本LC3-Ⅱ表達(dá)量的WesternBlot檢測結(jié)果散點(diǎn)圖。泳道1~3、7~9：觀察組；泳道4~6、10~12：對照組圖3LC3-ⅡWesternBlot結(jié)果（部分樣本）圖4LC3-Ⅱ表達(dá)量的散點(diǎn)圖（所有樣本）3討論巨噬細(xì)胞是調(diào)控母體免疫狀態(tài)產(chǎn)生免疫耐受的重要細(xì)胞，從而決定胚胎是否可以免受免疫打擊而流產(chǎn)［6-8］。巨噬細(xì)胞是天然性免疫和獲得性免疫的橋梁，通過識別并耐受胚胎抗原直接影響妊振結(jié)局，巨噬細(xì)胞的功能異常是導(dǎo)致母胎耐受異常、流產(chǎn)發(fā)生的重要原因［9-11］，研究已經(jīng)證明在流產(chǎn)的動物模型及臨床標(biāo)本中巨噬細(xì)胞均處于活化狀態(tài)。我們的研究也證實(shí)這點(diǎn)，在流產(chǎn)病例中蛻膜組織的巨噬細(xì)胞含量增加，并且巨噬細(xì)胞處于活化狀態(tài)。3.1巨噬細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)作用在免疫網(wǎng)絡(luò)中巨噬細(xì)胞既是免疫效應(yīng)細(xì)胞，又是免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞［12-13］。（1）正相調(diào)節(jié)作用：體內(nèi)的巨噬細(xì)胞一般處于靜止?fàn)顟B(tài)，當(dāng)受到某些因素如病原體等異物或細(xì)胞因子等刺激后活化，活化的巨噬細(xì)胞功能明顯增強(qiáng)，不但吞噬各種病原體，殺傷腫瘤細(xì)胞，而且還向T細(xì)胞提呈抗原，分泌細(xì)胞因子參與免疫應(yīng)答，該作用稱為免疫正相調(diào)節(jié)作用。（2）負(fù)相調(diào)節(jié)作用：巨噬細(xì)胞中還存在一種抑制性巨噬細(xì)胞，分泌多種可溶性抑制物如前列腺素、活性氧分子等抑制淋巴細(xì)胞增
【作者單位】： 中山大學(xué)孫逸仙紀(jì)念醫(yī)院婦產(chǎn)科;
【基金】：廣東省科技社會發(fā)展項(xiàng)目(2012B032000006)
【分類號】：R714.21

【參考文獻(xiàn)】

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1 張宗梁,宋秋寶,林明群,丁躍梅,康小偉,姚

本文編號：2549851