【摘要】：目的：胚胎植入子宮內(nèi)膜是妊娠建立的初始過(guò)程和胚胎持續(xù)發(fā)育的關(guān)鍵。胚胎植入及早期妊娠時(shí),母胎界面位于與滋養(yǎng)層直接接觸的蛻膜上。人類的成功妊娠需要來(lái)自胎兒的滋養(yǎng)層細(xì)胞對(duì)子宮基質(zhì)的有節(jié)制地侵入。滋養(yǎng)細(xì)胞通過(guò)降解細(xì)胞外基質(zhì)使得其能夠浸潤(rùn)生長(zhǎng),這一過(guò)程需要基質(zhì)金屬蛋白酶MMPs及其天然的抑制劑TIMPs處于一個(gè)平衡狀態(tài)。滋養(yǎng)細(xì)胞的侵入作用與其周圍環(huán)境有著密切的聯(lián)系,其中子宮蛻膜組織對(duì)其的影響尤為重要。然而,子宮蛻膜細(xì)胞對(duì)滋養(yǎng)細(xì)胞的遷移作用和具體分子過(guò)程還有待于進(jìn)一步研究。本研究觀察蛻膜細(xì)胞條件培養(yǎng)液對(duì)滋養(yǎng)細(xì)胞遷移能力及相關(guān)調(diào)節(jié)基因(如MMPs、TIMPs等)表達(dá)的影響。 方法：我們利用原代培養(yǎng)細(xì)胞技術(shù),培養(yǎng)人蛻膜細(xì)胞以及人子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行免疫熒光染色,檢測(cè)細(xì)胞的上皮細(xì)胞分子標(biāo)記角蛋白(Cytokeratin,CK)和間質(zhì)細(xì)胞分子標(biāo)記波形蛋白(Vimentin),以確定原代培養(yǎng)是否成功。我們用收集到的兩種細(xì)胞的條件培養(yǎng)液(分別命名為DSC-CM和EMC-CM),對(duì)滋養(yǎng)細(xì)胞癌JAR分別進(jìn)行預(yù)處理,通過(guò)Transwell比較兩種處理對(duì)滋養(yǎng)細(xì)胞遷移能力的作用,并通過(guò)Q-PCR和Western blot比較兩者的MMPs和TIMPs表達(dá)水平的區(qū)別。 結(jié)果：應(yīng)用細(xì)胞免疫熒光染色鑒定體外培養(yǎng)的蛻膜和子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞,我們發(fā)現(xiàn)95%以上的細(xì)胞為波形蛋白陽(yáng)性,僅極少數(shù)細(xì)胞為角蛋白陽(yáng)性細(xì)胞(5%以下),證明我們的原代培養(yǎng)確實(shí)得到了人蛻膜細(xì)胞和人子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞。Transwell結(jié)果顯示, DSC-CM處理組的滋養(yǎng)細(xì)胞穿出小室的細(xì)胞數(shù)大于EMC-CM處理組和空白組,我們的結(jié)果提示DSC-CM具有促進(jìn)滋養(yǎng)細(xì)胞遷移的作用。Q-PCR結(jié)果顯示,DSC-CM處理組的滋養(yǎng)細(xì)胞MMP2和MMP9mRNA的表達(dá)水平顯著高于EMC-CM處理組；而TIMP1和TIMP2mRNA在兩組間無(wú)明顯差異。Western blot結(jié)果提示DSC-CM處理組的滋養(yǎng)細(xì)胞MMP2的表達(dá)高于EMC-CM處理組。 結(jié)論：結(jié)果顯示：與人子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞相比,早孕期蛻膜間質(zhì)細(xì)胞條件培養(yǎng)基DSC-CM能促進(jìn)滋養(yǎng)細(xì)胞的遷移,并上調(diào)MMP9和MMP2的表達(dá)；而TIMP1和TIMP2mRNA表達(dá)變化不明顯；提示DSC-CM可能通過(guò)促進(jìn)滋養(yǎng)細(xì)胞MMP2和MMP9的表達(dá),從而促進(jìn)細(xì)胞的遷移。
【圖文】：

浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文 文一結(jié)果3.結(jié)果3.1原代培養(yǎng)人蛻膜細(xì)胞以及人子宮內(nèi)膜細(xì)胞培養(yǎng)24小時(shí)后細(xì)胞貼壁達(dá)高峰，顯微鏡下觀察貼壁細(xì)胞形態(tài)，DSC多數(shù)呈梭形，少數(shù)呈三角形，細(xì)胞間平行或放射排列，細(xì)胞之間較獨(dú)立，，核呈圓形；EMC見(jiàn)有細(xì)胞呈漩禍排列致密細(xì)胞集落，梭形狀細(xì)胞插入性生長(zhǎng)（圖1)

圖2.子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞和稅膜間質(zhì)細(xì)胞近95% Vimentin陽(yáng)性EMC, Endometrium mesenchymal cell;DSC, Decidual stromal cell;BW, Black/white3.3 DSC-CM條件培養(yǎng)基誘導(dǎo)滋養(yǎng)細(xì)胞形態(tài)改變細(xì)胞條件培養(yǎng)基處理滋養(yǎng)細(xì)胞JAR,誘導(dǎo)時(shí)間為48小時(shí)，觀察細(xì)胞形態(tài)的變化，提示與EMC-CM對(duì)照組相比，DSC-CM組細(xì)胞由連接緊密的卵圓形轉(zhuǎn)變?yōu)榉植妓缮⒌乃笮危▓D3)。
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R711.71

【共引文獻(xiàn)】

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3 高天e

本文編號(hào)：2544231