【摘要】：目的：1.構(gòu)建maspin基因真核表達載體pc3-maspin,以脂質(zhì)體法將pc3-maspin穩(wěn)定轉(zhuǎn)染至宮頸鱗癌SiHa細胞株。2.檢測轉(zhuǎn)染前后maspin mRNA及蛋白在SiHa細胞株中的表達變化。3.穩(wěn)定轉(zhuǎn)染成功后檢測maspin基因高表達對SiHa細胞生物學行為的影響,探討maspin在宮頸鱗癌發(fā)生、發(fā)展過程中的作用。方法：定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(real time RT-PCR)及半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)法檢測轉(zhuǎn)染前后SiHa細胞中maspin mRNA的表達差異,Western Blot及細胞免疫化學技術(shù)(SABC法)檢測轉(zhuǎn)染前后SiHa細胞中maspin蛋白的表達差異。MTT比色法檢測轉(zhuǎn)染前后細胞增殖能力的變化,流式細胞技術(shù)檢測轉(zhuǎn)染前后SiHa細胞的凋亡率和細胞周期以觀察SiHa細胞生物學行為的變化。結(jié)果：maspm真核表達質(zhì)粒以脂質(zhì)體法穩(wěn)定轉(zhuǎn)染宮頸鱗癌SiHa細胞株后,RT-PCR及real time RT-PCR在轉(zhuǎn)錄水平上顯示轉(zhuǎn)染目的基因的SiHa細胞(SiHa-m)中mRNA表達較轉(zhuǎn)染空載體組(SiHa-p)和空白對照組(SiHa)明顯上調(diào)(P0.05),SiHa-p組與SiHa組之間無顯著差異(P0.05)；Western Blot及IHC技術(shù)均顯示轉(zhuǎn)染maspin基因的SiHa細胞(SiHa-m)中masp in蛋白的表達明顯上調(diào)(P0.05),SiHa-p組與SiHa組之間無顯著差異(P0.05)；MTT法測定顯示SiHa-m細胞增殖能力較SiHa-p組和SiHa組明顯降低(P0.05),SiHa-p組與SiHa組之間無顯著差異(P0.05)；流式細胞技術(shù)測定凋亡率,結(jié)果顯示SiHa-m組凋亡率較SiHa-p組和SiHa組顯著升高(P0.05),SiHa-p組與SiHa組之間無顯著差異(P0.05)；細胞周期結(jié)果顯示SiHa-m組G1期細胞比例較SiHa-p組和SiHa組明顯增多,S期細胞比例較SiHa-p組和SiHa組明顯減少(P0.05)；SiHa-p與SiHa組在細胞周期及凋亡率方面無顯著性差異(P0.05)。結(jié)論：maspin基因能明顯抑制SiHa細胞的增殖能力,提示maspin在宮頸癌組織中起著腫瘤抑制作用,其有望成為子宮頸鱗癌新的基因治療靶點。但仍需進一步的試驗研究來探究masp in抑制子宮頸癌細胞生長的作用機制。
【學位授予單位】：濱州醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R737.33
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本文編號：2535879