【摘要】：課題背景：卵巢癌是三大婦科惡性腫瘤之一，，致死率居首位，發(fā)病率逐年遞增，但病因至今不明。卵巢癌種類繁多，其中85-90%為上皮性卵巢癌，其發(fā)生與卵巢表面生發(fā)上皮中的未分化細(xì)胞有關(guān)，這些細(xì)胞一旦發(fā)生基因突變或者在致癌基因存在時(shí)，即可轉(zhuǎn)化并發(fā)展為惡性腫瘤。因此從分子生物學(xué)角度，研究上皮性卵巢癌的發(fā)生機(jī)制極為關(guān)鍵。人類基因組中4-9%的轉(zhuǎn)錄本為長鏈非編碼RNA（Long non-coding RNA,LncRNA），它們沒有開放式可讀框，不能編碼蛋白質(zhì)，長度超過200核苷酸單位。大量研究表明lncRNA作為一類功能性RNA分子，可在表觀遺傳、轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄后等水平調(diào)控其他基因的表達(dá)，從而誘導(dǎo)包括腫瘤在內(nèi)的疾病的發(fā)生發(fā)展。因此，研究卵巢癌中特異性的lncRNA是探討卵巢癌發(fā)生發(fā)展機(jī)制的重要手段。2003年Rangel等人發(fā)現(xiàn)了一個(gè)人卵巢癌組織特異性lncRNA—HOST2（Human Ovarian Cancer SpecificTranscript2），但并沒有深入研究HOST2在上皮性卵巢癌中的作用機(jī)制，目前亦未見相關(guān)報(bào)道。 研究目的：驗(yàn)證HOST2在上皮性卵巢癌中的特異性表達(dá)，通過相關(guān)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步探討HOST2在該腫瘤中的生物學(xué)功能，其潛在的調(diào)控分子和相互作用機(jī)制，及其與上皮性卵巢癌發(fā)生發(fā)展的可能聯(lián)系，為上皮性卵巢癌的早期診斷和靶向治療提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和理論依據(jù)。 研究方法：通過生物信息學(xué)方法預(yù)測并篩選與HOST2相關(guān)的關(guān)鍵分子，及可能涉及的細(xì)胞內(nèi)信號調(diào)控通路；以O(shè)VCAR-3上皮性卵巢癌細(xì)胞為細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)對象，以2010年8月至2013年3月采集的50例上皮性卵巢癌組織標(biāo)本、50例卵巢上皮性良性腫瘤為組織學(xué)實(shí)驗(yàn)對象，定量、定性并定位分析HOST2及其相關(guān)分子在上皮性卵巢癌中的表達(dá)；通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法外源性改變HOST2及其相關(guān)分子的表達(dá)后，觀察兩者的相互作用，再通過一系列體內(nèi)體外實(shí)驗(yàn)觀察它們的表達(dá)對上皮性卵巢癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響；利用報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)研究HOST2與其關(guān)鍵分子之間可能發(fā)揮作用的microRNA。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：HOST2在上皮性卵巢癌中特異性高表達(dá)，且參與上皮性卵巢癌細(xì)胞的遷移、侵襲、增殖等生物學(xué)行為，體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)外源性降低HOST2的表達(dá)能夠抑制上皮性卵巢癌的生長。HOST2序列與膜蛋白C1orf186的編碼序列存在一段541個(gè)堿基幾乎完全一致的區(qū)域，兩者在上皮性卵巢癌中的表達(dá)密切相關(guān)（相關(guān)系數(shù)＝0.9972），HOST2與C1orf186或通過與miR1266的競爭性結(jié)合作用調(diào)控彼此的表達(dá)。C1orf186在上皮性卵巢癌中的表達(dá)亦呈特異性高水平表達(dá)，且上皮性卵巢癌中存在膜蛋白C1orf186表達(dá)陽性的一群細(xì)胞（C1orf186＋），C1orf186＋細(xì)胞的比例與上皮性卵巢癌的組織學(xué)分化程度呈負(fù)相關(guān)，且這部分細(xì)胞具有很強(qiáng)的致瘤能力。磷酸化STAT3蛋白在C1orf186＋上皮性卵巢癌細(xì)胞中表達(dá)高，且參與維持C1orf186＋細(xì)胞的遷移、侵襲、增殖等生物學(xué)行為，STAT3信號通路的激活在一定程度上有賴于膜蛋白C1orf186與STAT3上游信號分子JAK2的結(jié)合。 結(jié)論：HOST2和C1orf186在上皮性卵巢癌中特異性高表達(dá)，兩者與miR-1266的競爭性結(jié)合的結(jié)局或在一定程度上導(dǎo)致了上皮性卵巢癌的發(fā)生與進(jìn)展。HOST2調(diào)控下的C1orf196-JAK2-STAT3信號通路可能是C1orf186＋這一細(xì)胞亞群生長得以維持的關(guān)鍵。HOST2和C1orf186均有潛力作為新的靶標(biāo)，用于上皮性卵巢癌的靶向干預(yù)治療。
【圖文】：

圖 1 真核細(xì)胞內(nèi) lncRNA 的調(diào)控模式圖[8]迄今為止，許多研究發(fā)現(xiàn)，某些 lncRNA 僅在特定的發(fā)育階段出現(xiàn)[9]，具有組織和/或細(xì)胞特異性[10]；某些腫瘤中 lncRNA 的特異性表達(dá)水平可作為該腫瘤的診斷標(biāo)志物和/或潛在的治療靶點(diǎn)（如前列腺癌中的 DD3）[11]；某些 lncRNA 與許多腫瘤的轉(zhuǎn)移有關(guān)，如 MALAT1 在早期非小細(xì)胞癌中的表達(dá)缺乏特異性，若腫瘤進(jìn)展并發(fā)生轉(zhuǎn)移，則其表達(dá)水平顯著升高[12]，另外，MALAT1 在乳腺癌、肝癌等許多人類腫瘤中也被異常調(diào)控[13]。綜上所述，LncRNA 與惡性腫瘤的發(fā)生和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，因此，通過研究上皮性卵巢癌中特異性的lncRNA是我們揭示該惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展機(jī)制的重要手段。2003 年 Rangel 等人利用 SAGE 數(shù)據(jù)庫、分子克隆、Northern blot、RT-PCR 等技術(shù)發(fā)現(xiàn)在人類卵巢癌組織中存在一組特異性的轉(zhuǎn)錄本（human ovarian cancer-specifictranscripts, HOST1-5）, 在正常組織和非卵巢癌疾病中的表達(dá)不典型，但在四種主要類型的卵巢癌組織中均呈不同程度高水平表達(dá)[14]，尤其是上皮性卵巢癌。在這組卵巢

圖 1 HOST2 引物擴(kuò)增 OVCAR3 細(xì)胞 cDNA 的 PCR 產(chǎn)物第一列為標(biāo)記條帶大小用的 DNA Ladder；右側(cè)兩列為 PCR列人惡性腫瘤細(xì)胞株：MKN28、Huh-7、HepG2、McF-7、DU-2、ARK2、Hela、OVCAR-3，在每種細(xì)胞處于對數(shù)生長期且每種細(xì)胞樣品中的總 RNA，經(jīng)總 RNA 的反轉(zhuǎn)錄得到相應(yīng)的 cRT-PCR 反應(yīng)檢測這些細(xì)胞中 HOST2 的表達(dá)。結(jié)果顯示：相對中的表達(dá)，上皮性卵巢癌細(xì)胞中 HOST2 的表達(dá)特異性升高（圖VCAR-3 細(xì)胞的 cDNA 樣品中 HOST2 的擴(kuò)增循環(huán)數(shù)比內(nèi)參 5 個(gè)循環(huán)，例如：若 CTGAPDH≈19，CTHOST2≈24。
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R737.31

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2533353