【摘要】：子宮內(nèi)膜癌是婦科惡性腫瘤中最常見的腫瘤,美國2014年數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)每年發(fā)病人數(shù)達(dá)49560,死亡人數(shù)8190。無孕激素拮抗的持續(xù)雌激素刺激對于子宮內(nèi)膜癌發(fā)生發(fā)展起著重要的作用。雄烯二酮和睪酮向雌激素的轉(zhuǎn)化是由芳香化酶P450催化的。雖然絕經(jīng)后婦女的體內(nèi)雌激素水平較低,但是腫瘤內(nèi)局部雌激素的合成會導(dǎo)致腫瘤的高雌激素水平。對于正常和異常子宮內(nèi)膜的研究,已有結(jié)果證實(shí),芳香化酶的表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),并且只有間質(zhì)表達(dá)的芳香化酶與患者的不良預(yù)后呈正相關(guān)。有學(xué)者用子宮內(nèi)膜癌的上皮-間質(zhì)細(xì)胞共培養(yǎng)模型,證明了腫瘤和間質(zhì)的相互作用促進(jìn)了芳香化酶活性的上調(diào)。但是針對于腫瘤-間質(zhì)的治療方案有待于確定具體的橋梁因子,迄今為止,在子宮內(nèi)膜癌微環(huán)境中具體的作用因子還未見報(bào)道。Interleukin 6(IL-6)是一種在多種生理和病理過程中扮演重要角色的多功能細(xì)胞因子。已有研究證實(shí)IL-6的產(chǎn)生與多種惡性腫瘤包括子宮內(nèi)膜癌密切相關(guān)。IL-6在乳腺癌、宮頸癌和非小細(xì)胞肺癌中都可以誘導(dǎo)芳香化酶的表達(dá)。但I(xiàn)L-6在子宮內(nèi)膜癌中是否誘導(dǎo)芳香化酶的表達(dá)還未知曉。我們在前期工作中發(fā)現(xiàn)在子宮內(nèi)膜癌中,雌激素可以通過GPR30通路誘導(dǎo)IL-6的表達(dá),同時也有證據(jù)顯示雌二醇(17β-estradiol,E2)可以通過雌激素受體(estrogen receptorα,ERα)下調(diào)IL-6的產(chǎn)生,說明IL-6是雌激素的一個重要調(diào)節(jié)靶基因�；谝陨系难芯拷Y(jié)果,本課題中我們探討了子宮內(nèi)膜癌中,存在于E2,IL-6和芳香化酶之間的一個正向反饋環(huán)路,即E2誘導(dǎo)了子宮內(nèi)膜癌上皮細(xì)胞IL-6的產(chǎn)生,IL-6通過旁分泌的作用刺激了間質(zhì)細(xì)胞內(nèi)芳香化酶的表達(dá),從而促進(jìn)了腫瘤局部雌激素的合成。這個環(huán)路中同時包含了ERα和核因子-kappa B(NF-κB)的參與。il-6受體(il-6receptor,il-6r)的單克隆抗體(anti-il-6receptorantibody,il-6rab)可以阻斷il-6的信號通路,從而作為一種實(shí)驗(yàn)性的治療方法。我們在細(xì)胞共培養(yǎng)和子宮內(nèi)膜癌原位移植的模型中,證實(shí)了這一環(huán)路的存在和il-6rab的治療作用。這一研究為子宮內(nèi)膜癌局部雌激素合成闡明了新的機(jī)制,同時針對這一機(jī)制提出了新的治療方案。本課題共分三個部分:(1)子宮內(nèi)膜組織中il-6和芳香化酶的表達(dá)檢測;(2)子宮內(nèi)膜癌上皮及間質(zhì)細(xì)胞中il-6和芳香化酶表達(dá)的調(diào)節(jié);(3)細(xì)胞共培養(yǎng)和裸鼠原位移植模型中雌激素原位合成的正向反饋環(huán)路。第一部分子宮內(nèi)膜組織中il-6和芳香化酶的表達(dá)檢測目的檢測il-6和芳香化酶在正常子宮內(nèi)膜和子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá),探討兩者之間的相關(guān)性及其與子宮內(nèi)膜癌的關(guān)系。方法應(yīng)用免疫組織化學(xué)和免疫熒光的方法,檢測il-6和芳香化酶在正常子宮內(nèi)膜和子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)及定位。結(jié)果子宮內(nèi)膜癌組織中,il-6和芳香化酶的表達(dá)明顯高于正常的子宮內(nèi)膜組織(p0.01)。而且只有間質(zhì)內(nèi)芳香化酶的表達(dá)與上皮內(nèi)il-6的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.459,p0.001)。上皮內(nèi)芳香化酶的表達(dá)與il-6無明顯相關(guān)性(r=0.039,p=0.732)。免疫熒光顯示,子宮內(nèi)膜癌組織中上皮內(nèi)il-6與間質(zhì)內(nèi)芳香化酶存在共定位。結(jié)論il-6和芳香化酶在子宮內(nèi)膜癌組織中過度表達(dá),且只有間質(zhì)內(nèi)芳香化酶的表達(dá)與上皮內(nèi)il-6的表達(dá)呈正相關(guān)。提示兩者通過腫瘤局部微環(huán)境的相互作用,對子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展起到了一定的促進(jìn)作用。第二部分子宮內(nèi)膜癌上皮及間質(zhì)細(xì)胞中il-6和芳香化酶表達(dá)的調(diào)節(jié)目的檢測子宮內(nèi)膜癌上皮細(xì)胞中e2對il-6和間質(zhì)細(xì)胞中il-6對芳香化酶表達(dá)的調(diào)節(jié),并探討其中的具體機(jī)制。方法原代提取子宮內(nèi)膜癌的間質(zhì)細(xì)胞,應(yīng)用real-timert-pcr,westernblot,elisa,芳香化酶活性分析,雌激素濃度放射免疫測定,免疫熒光,免疫共沉淀等方法,檢測IL-6和芳香化酶的表達(dá)變化并探討其中機(jī)制。結(jié)果用E2刺激Ishikawa,RL95-2和HEC-1B三種子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株,發(fā)現(xiàn)E2通過轉(zhuǎn)錄因子ERα和NF-κB的協(xié)同作用促進(jìn)了IL-6的表達(dá)(P0.01)。用IL-6刺激子宮內(nèi)膜癌的間質(zhì)細(xì)胞,間質(zhì)細(xì)胞內(nèi)芳香化酶的表達(dá)及活性均明顯上調(diào)(P0.01),且IL-6R Ab可以阻斷這一表達(dá)上調(diào)。結(jié)論通過細(xì)胞體外實(shí)驗(yàn),提示在子宮內(nèi)膜癌局部可能存在著一種正向反饋環(huán)路,即E2誘導(dǎo)了子宮內(nèi)膜癌上皮IL-6的產(chǎn)生,IL-6通過旁分泌的作用刺激了間質(zhì)細(xì)胞內(nèi)芳香化酶的表達(dá),從而促進(jìn)了腫瘤局部雌激素的合成。第三部分細(xì)胞共培養(yǎng)和裸鼠原位移植模型中雌激素原位合成的正向反饋環(huán)路目的通過兩種細(xì)胞共培養(yǎng)和裸鼠原位移植模型,進(jìn)一步證實(shí)由IL-6和芳香化酶參與的正向反饋環(huán)路的存在。方法通過子宮內(nèi)膜癌上皮細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞接觸和非接觸性共培養(yǎng)的方法,檢測芳香化酶的表達(dá)和雌激素的合成情況。應(yīng)用裸鼠原位移植模型,檢測IL-6R Ab對于腫瘤局部雌激素合成及其生長的影響。結(jié)果用E2刺激過的子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株與間質(zhì)細(xì)胞共培養(yǎng)后,間質(zhì)細(xì)胞內(nèi)芳香化酶表達(dá)明顯上調(diào),同時培養(yǎng)基內(nèi)E2濃度升高(P0.01)。而用IL-6R Ab可以阻斷這一正反饋環(huán)路。成功建立裸鼠子宮內(nèi)膜癌原位移植模型,E2刺激組裸鼠腫瘤體積明顯要大于對照組,用IL-6R Ab治療后,腫瘤體積明顯減小(P0.01)。結(jié)論通過體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí),IL-6和芳香化酶參與了腫瘤局部微環(huán)境中雌激素的合成,且IL-6R Ab對于子宮內(nèi)膜癌具有一定的治療作用。
【圖文】：

圖 2. 子宮內(nèi)膜組織中 IL-6 的表達(dá)水平Fig 2. IL-6 expression in human endometrial tissues上圖：免疫組化染色顯示 IL-6 分別在正常子宮內(nèi)膜（Normal）和子宮內(nèi)膜癌（Ca）組織中的表達(dá)，，放大倍數(shù) ×200；下圖：使用半定量免疫組化評分后，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析（**P < 0.01）。

圖 3. 子宮內(nèi)膜組織中芳香化酶的表達(dá)水平Fig 3. Aromatase expression in human endometrial tissues：免疫組化染色顯示芳香化酶分別在正常子宮內(nèi)膜（Normal）和子宮內(nèi)膜癌（Ca的表達(dá)，其中在在子宮內(nèi)膜癌組織中，芳香化酶的表達(dá)定位分為三種情況：B)上皮
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.33

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本文編號：2521873