【摘要】：研究背景胎兒生長受限(Fetal Growth Restriction,FGR)是指各種不良因素所致胎兒宮內(nèi)發(fā)育潛能不足,新生兒出生體重低于同孕齡平均出生體重的第十百分位數(shù)[1],嚴(yán)重威脅著圍產(chǎn)兒及新生兒的健康。FGR病因復(fù)雜,發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明,臨床上對于FGR的診斷手段相對單一,缺乏有效的早期預(yù)測、監(jiān)測指標(biāo)及有效的治療措施。已證實(shí),胰島素樣生長因子家族(Insulin Growth Factor System,IGFs)在FGR發(fā)病中有重要作用,并可以影響胎盤結(jié)構(gòu)發(fā)育和功能[2];胎盤作為妊娠期特有器官,其正常結(jié)構(gòu)和功能對胎兒發(fā)育具有關(guān)鍵作用,各種因素導(dǎo)致胎盤功能不足引起母胎間物質(zhì)交換障礙,可直接影響胎兒生長發(fā)育[3]。在早期胎盤植入和形成中,滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲子宮蛻膜及肌層、完成子宮螺旋動脈重鑄,對胎盤形成有重要作用,涉及多個重要蛋白及細(xì)胞因子參與,其中基質(zhì)金屬蛋白酶-2(MatrixMetalloproteinase-2,MMP2)是參與滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲的重要酶類之一,通過降解細(xì)胞外基質(zhì)、破壞基底膜、促進(jìn)血管表面生長因子生成等促進(jìn)滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲與胎盤血管重鑄[4]。已證實(shí),孕期營養(yǎng)不良是FGR的確切誘因,可能通過影響胎盤正常結(jié)構(gòu)及功能導(dǎo)致胎兒生長受限[5],但具體發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明。本研究通過營養(yǎng)限制構(gòu)建FGR大鼠模型,探討營養(yǎng)限制、胎盤IGF1表達(dá)與胎兒發(fā)育的關(guān)系;進(jìn)一步在細(xì)胞學(xué)水平初步探索IGF1對滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲力的影響。為FGR發(fā)病機(jī)制研究、早期臨床預(yù)測及監(jiān)測等提供理論及實(shí)驗(yàn)參考。第一部分 孕期營養(yǎng)限制誘導(dǎo)FGR大鼠模型中胎盤IGF1、IGFBP3 的改變[研究目的]通過孕期營養(yǎng)限制誘導(dǎo)FGR大鼠模型,探討營養(yǎng)限制對大鼠胎盤IGF1、IGFBP3表達(dá)的影響以及其與FGR發(fā)病之間的關(guān)系。[研究方法]1.首先,通過孕期蛋白飲食限制(8%蛋白)建立營養(yǎng)限制條件,構(gòu)建FGR大鼠模型,觀察營養(yǎng)限制對大鼠子代及胎盤發(fā)育的影響;2.HE染色病理學(xué)檢查觀察營養(yǎng)限制對胎盤發(fā)育與結(jié)構(gòu)的影響;3.進(jìn)一步,通過熒光定量PCR檢測胎盤IGF1、IGFBP3mRNA表達(dá)水平,免疫組化方法檢測胎盤IGF1、IGFBP3蛋白表達(dá)。[結(jié)果]1.孕期營養(yǎng)限制顯著抑制胎鼠及胎盤發(fā)育,和對照組相比,營養(yǎng)限制組子代GD19.5平均體重顯著下降,FGR率升高(P0.05);2.胎盤HE染色病理檢查發(fā)現(xiàn),營養(yǎng)限制組大鼠胎盤發(fā)育不良,迷路區(qū)變薄;3.熒光定量PCR結(jié)果顯示,和對照組相比,營養(yǎng)限制組胎盤IGF1、IGFBP3 mRNA表達(dá)顯著下降(P0.05);4.免疫組化結(jié)果顯示,大鼠胎盤部位IGF1及IGFBP3主要表達(dá)于基底層及迷路區(qū)滋養(yǎng)細(xì)胞胞漿內(nèi),和對照組相比,營養(yǎng)限制組胎盤IGF1及IGFBP3表達(dá)下調(diào)。[結(jié)論]孕期營養(yǎng)限制抑制胎鼠及胎盤正常生長發(fā)育,導(dǎo)致大鼠胎盤部位滋養(yǎng)細(xì)胞IGF1及IGFBP3表達(dá)下調(diào),可能影響胎盤正常結(jié)構(gòu)發(fā)育從而抑限制胎鼠生長。第二部分 血清限制對人滋養(yǎng)細(xì)胞株HTR-8/SVneo細(xì)胞IGF1表達(dá)及細(xì)胞侵襲力的影響[研究目的]通過胎牛血清(Fetal Calf Serum,FBS)限制干預(yù)HTR-8/SVneo細(xì)胞模擬整體實(shí)驗(yàn),探討FBS限制對HTR-8/SVneo細(xì)胞IGF1及細(xì)胞侵襲力表達(dá)的影響。[研究方法]1.分別予低濃度FBS、中等濃度FBS及高濃度FBS處理HTR-8/SVneo細(xì)胞,熒光定量PCR檢測細(xì)胞IGF1、IGFBP3mRNA表達(dá)水平,細(xì)胞免疫熒光檢測HTR-8/SVneo細(xì)胞IGF1、IGFBP3蛋白表達(dá),比較不同濃度FBS處理對HTR-8/SVneo 細(xì)胞 IGF1、IGFBP3 的影響;2.同前處理,檢測不同濃度FBS處理對HTR-8/SVneo細(xì)胞MMP2 mRNA及蛋白表達(dá)的影響;Transwell小室侵襲實(shí)驗(yàn)檢測不同濃度FBS對HTR-8/SVneo細(xì)胞侵襲力的影響;3.給予不同濃度rhIGF1處理HTR-8/SVneo細(xì)胞,CCK-8比色實(shí)驗(yàn)法檢測rhIGF1對細(xì)胞增殖的影響;4.給予rhIGF1處理HTR-8/SVneo細(xì)胞48小時后,熒光定量PCR檢測細(xì)胞MMP2 mRNA表達(dá)水平,細(xì)胞免疫熒光檢測細(xì)胞MMP2蛋白表達(dá),Transwell小室侵襲實(shí)驗(yàn)檢測rhIGF1對細(xì)胞侵襲力的影響。[結(jié)果]1.FBS限制導(dǎo)致HTR8/SVneo細(xì)胞IGF1表達(dá)下調(diào)(P0.05);2.低濃度FBS導(dǎo)致HTR8/SVneo細(xì)胞MMP2低表達(dá)(P0.05),細(xì)胞侵襲力下降(P0.05);3.rhIGF1能顯著上調(diào)HTR-8/SVneo細(xì)胞MMP2表達(dá)水平(P0.05),促進(jìn)HTR-8/SVneo細(xì)胞增殖及侵襲(P0.05)。[結(jié)論]FBS限制下調(diào)人滋養(yǎng)細(xì)胞株HTR-8/SVneo細(xì)胞IGF1表達(dá),可能通過介導(dǎo)細(xì)胞MMP2低表達(dá),從而抑制滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲能力;rhIGF1上調(diào)HTR-8/SVneo細(xì)胞MMP2表達(dá),促進(jìn)細(xì)胞侵襲力。
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圖片說明：圖１大鼠陰道細(xì)胞涂片生殖周期檢查逡逑Ｆｉｇ．邋１邋ｖａｇｉｎａｌ邋ｓｍｅａｒｓ邋ｏｆ邋ｒａｔ邋ｏｎ邋ｅｓｔｒｏｕｓ邋ｃｙｃｌｅ邋ｐｈａｓｅｓ逡逑２．２取材及標(biāo)本處理逡逑
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圖片說明： 圖３孕期營養(yǎng)限制導(dǎo)致大鼠胎盤發(fā)育不良逡逑相比，實(shí)驗(yàn)組胎盤重量（Ａ）、直徑（Ｂ）及厚度（Ｃ）減少，＊Ｐ＜０．０５；邋Ｅ像，，和對照組相比，營養(yǎng)限制組大鼠胎盤偏小。Ｆ：胎盤縱切面：ＭＧ．？區(qū)，ＢＺ：基底層區(qū)，ＬＺ：迷路區(qū)。Ｇ：大鼠及其胎盤大體圖像比較。逡逑Ｆｉｇ．３邋Ｇｅｓｔａｔｉｏｎａｌ邋ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ邋ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ邋ｌｅａｄｓ邋ｔｏ邋ｐｌａｃｅｎｔａｌ邋ｍａｌｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ邋ｏｆ邋ｒａｓｔａｔｉｏｎａｌ邋ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ邋ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ邋ｇｒｏｕｐ，邋ａｖｅｒａｇｅ邋ｐｌａｃｅｎｔａｌ邋ｗｅｉｇｈｔ邋（Ａ），邋ｄｉａｍｅｔｅ邋（Ｃ）邋ｄｅｃｒｅａｓｅｄ邋ｃｏｍｐａｒｅｄ邋ｔｏ邋ｔｈｅ邋ｃｏｎｔｒｏｌ邋ｇｒｏｕｐ．邋＊Ｐ＜０．０５．邋Ｅ：邋ｐｌａｃｅｎｔａｌ邋ｇｒｏｓｓ邋ａｐｐａｃｅ邋ｓｉｄｅ．邋Ｆ：邋ｇｒｏｓｓ邋ａｐｐｅａｒａｎｃｅ邋ｏｆ邋ｐｌａｃｅｎｔａｌ邋ｌｏｎｇｉｔｕｄｉｎａｌ邋ｓｅｃｔｉｏｎ：邋ＭＧ：邋ｍｅｔｒｉａｌ邋ｇｌｏｎｅ；邋ＢＺ：邋ｂａｓａｌ邋ｚｏｎｅ；邋ＬＺ：邋ｌａｂｙｒｉｎｔｈ邋ｚｏｎｅ．邋Ｇ：邋ｇｒｏｓｓ邋ａｐｐｅａｒａｎｃｅ邋ｏｆ邋ｒａｔｓ邋ａｎｄ邋ｔｈｅｉｒｒｅｓｅａｒｃｈ邋ｇｒｏｕｐ邋ａｎｄ邋ｔｈｅ邋ｃｏｎｔｒｏｌ邋ｇｒｏｕｐ．逡逑Ａ邋｜ｉ逡逑
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R714.5

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前4條

1 余艷紅,王志堅(jiān);胎兒生長受限胎盤病理改變與絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶9的表達(dá)關(guān)系[J];中華圍產(chǎn)醫(yī)學(xué)雜志;2003年04期

2 王雁玲;;胚胎植入障礙與先兆子癇[J];醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)雜志;2006年02期

3 羅曉芳;漆洪波;;胎兒生長受限的胎盤因素及其臨床診治[J];中國實(shí)用婦科與產(chǎn)科雜志;2016年04期

4 喬娟;漆洪波;;胎兒生長受限:更新的認(rèn)識[J];中華圍產(chǎn)醫(yī)學(xué)雜志;2015年06期

本文編號：2515392