【摘要】：子宮平滑肌瘤（uterine leiomyoma）是婦產(chǎn)科發(fā)病率最高的良性腫瘤，在育齡期婦女中發(fā)病率約為50%，是行子宮切除術(shù)的首要病因，可嚴(yán)重影響女性生殖健康，并且給家庭和社會(huì)帶來(lái)沉重的負(fù)擔(dān)。其發(fā)病機(jī)制尚不完全清楚，基礎(chǔ)臨床研究和流行病學(xué)調(diào)查均表明其發(fā)生發(fā)展與孕激素有關(guān)。孕激素參與人體多種生理過(guò)程，如卵泡生長(zhǎng)、排卵、受精卵種植及維持妊娠等。主要的作用途徑為孕激素首先自由擴(kuò)散進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)與核孕激素受體（nuclear progesterone receptor，nPR）結(jié)合，進(jìn)而受體與熱休克蛋白解離并形成二聚體，結(jié)合啟動(dòng)子，調(diào)節(jié)下游基因表達(dá)，稱為孕激素的基因組作用（genomic action）。參與基因組作用的nPR主要為孕激素受體B（progesterone receptor B，PR-B）和孕激素受體A（progesteronereceptor A，PR-A），該作用途徑因涉及基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯而進(jìn)行得十分緩慢，大約需要數(shù)分鐘甚至數(shù)小時(shí)的時(shí)間。然而，孕激素的一些快速反應(yīng)如參與乳腺癌細(xì)胞凋亡、調(diào)控卵母細(xì)胞成熟、加速精子頂體反應(yīng)、保護(hù)神經(jīng)系統(tǒng)功能和調(diào)節(jié)細(xì)胞鈣離子水平等數(shù)秒鐘即可完成，這些均不能用基因組作用解釋，因此把這類快速發(fā)生且不依賴蛋白質(zhì)合成的效應(yīng)途徑稱為孕激素非基因組作用（nongenomic action）。 孕激素M受體（mitochondrial progesterone receptor，PR-M）是一種新型的截短孕激素受體，最早從人主動(dòng)脈細(xì)胞和脂肪組織cDNA文庫(kù)克隆得到，含有314個(gè)氨基酸，cDNA約為2230bp。PR-M是目前已知的唯一直接參與孕激素非基因組效應(yīng)的類固醇激素受體亞型，已經(jīng)有研究證實(shí)其定位于線粒體外膜。分別以永生化的子宮平滑肌和原代培養(yǎng)的子宮平滑肌細(xì)胞株為研究對(duì)象，發(fā)現(xiàn)孕激素可通過(guò)PR-M使子宮平滑肌細(xì)胞線粒體膜電位（mitochondrial membrane potential，MMP）增加，此過(guò)程不依賴蛋白質(zhì)合成，提示孕激素可以通過(guò)PR-M發(fā)揮非基因組效應(yīng)增加細(xì)胞呼吸，加強(qiáng)能量代謝，從而抑制瘤細(xì)胞凋亡。已有學(xué)者通過(guò)較小的樣本量（5例）對(duì)行子宮切除術(shù)的患者肌瘤組織和肌瘤旁肌層組織中PR-M的表達(dá)分別檢測(cè)，結(jié)果顯示PR-M在肌瘤組織中表達(dá)高于正常子宮肌層。通過(guò)對(duì)多種人體正常組織中PR-M的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)發(fā)現(xiàn)其在組織的分布和線粒體有密切聯(lián)系，在心室和子宮肌層中含量較高。 Porin也稱為電壓依賴性離子通道（voltage dependent anion channels，VDAC），它參與組成線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔道（mitochondrial permeablity transitionpore，，mPTP）。ATP、ADP、丙酮酸鹽、嘌呤核苷酸等代謝產(chǎn)物均需要通過(guò)porin進(jìn)出線粒體膜。Porin功能的異常經(jīng)常會(huì)引起線粒體功能紊亂，導(dǎo)致細(xì)胞總ATP水平降低、跨膜電位下降和細(xì)胞色素c釋放，啟動(dòng)線粒體途徑的凋亡程序。線粒體途徑為內(nèi)源性凋亡途徑，線粒體內(nèi)外膜的通透性和膜電位為調(diào)節(jié)內(nèi)源性凋亡途徑的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。 目的 本研究對(duì)子宮平滑肌瘤與其鄰近正常肌層組織中PR-M和porin的表達(dá)進(jìn)行定量分析，同時(shí)檢測(cè)相應(yīng)標(biāo)本組織中PR-B和PR-A的表達(dá)情況，分析porin與三種PR的相關(guān)性。希望進(jìn)一步探討孕激素參與子宮平滑肌瘤發(fā)生發(fā)展的機(jī)理，為深入研究其發(fā)病原因提供理論依據(jù)。 材料與方法 1實(shí)驗(yàn)材料 隨機(jī)選取2012年12月-2013年2月于我院因子宮平滑肌瘤行子宮全切術(shù)的患者22例，年齡38～50歲，平均（45.11±4.28）歲。術(shù)中無(wú)菌條件下取瘤核組織作為研究組，以相應(yīng)的肌瘤旁平滑肌組織為對(duì)照組。研究對(duì)象符合下列條件：（1）術(shù)前至少半年內(nèi)未服用任何類固醇激素制劑及中藥；（2）通過(guò)末次月經(jīng)時(shí)間和病理結(jié)果證實(shí)所有患者子宮內(nèi)膜均處于增殖期；（3）標(biāo)本經(jīng)病理檢查證實(shí)為子宮平滑肌瘤；（4）無(wú)其他合并癥；（5）標(biāo)本的獲得經(jīng)患者及家屬知情同意。 2研究方法 采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（reverse transcription polymerase chain reaction，RT-PCR）和Western blotting檢測(cè)22例子宮肌瘤組織和相應(yīng)瘤旁平滑肌組織中PR-M、porin、PR-B和PR-A的表達(dá)，分析porin與PRs之間表達(dá)的關(guān)系。 3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS17.0建立數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行分析，子宮肌瘤和平滑肌組織中孕激素受體與porin表達(dá)資料以x s表示，兩組間的比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)。孕激素受體與porin之間表達(dá)水平的關(guān)系采用Pearson積差相關(guān)分析，α=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。 結(jié)果 1RT-PCR檢測(cè)結(jié)果 肌瘤組織中PR-M mRNA表達(dá)量為0.351±0.043，porin mRNA表達(dá)量為0.748±0.129，PR-B mRNA表達(dá)量為0.594±0.110，PR-A mRNA表達(dá)量為0.492±0.052。子宮肌層中相應(yīng)mRNA的表達(dá)量分別為0.117±0.019、0.378±0.054、0.405±0.049和0.353±0.059。四種mRNA在肌瘤組織中表達(dá)均高于正常子宮肌層組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。 2Western blotting檢測(cè)結(jié)果 PR-M和porin蛋白在子宮平滑肌瘤組織中的表達(dá)量分別為0.130±0.014和0.537±0.081，PR-B和PR-A蛋白在肌瘤組織中的表達(dá)量分別為0.470±0.049和0.438±0.052。肌層組織中相應(yīng)蛋白的表達(dá)量分別為0.087±0.008、0.207±0.037、0.272±0.029和0.233±0.032。四種蛋白在肌瘤組織中表達(dá)均高于正常子宮肌層組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。 3Pearson相關(guān)分析 從基因和蛋白兩種水平上分析，研究組中PR-M的表達(dá)與porin呈正相關(guān)（P＜0.05），PR-B、PR-A的表達(dá)均與porin無(wú)相關(guān)性，對(duì)照組中三種孕激素受體的表達(dá)與porin均無(wú)相關(guān)性（P＞0.05）。 結(jié)論 1子宮平滑肌瘤組織中PR-M、porin、PR-B和PR-A高表達(dá)，表明子宮平滑肌瘤的發(fā)生和發(fā)展可能與其組織中PR-M、porin、PR-B和PR-A表達(dá)的升高有關(guān)。 2孕激素可能通過(guò)其核外受體PR-M增強(qiáng)子宮平滑肌瘤細(xì)胞內(nèi)線粒體功能，加強(qiáng)細(xì)胞能量代謝，抑制線粒體途徑的細(xì)胞凋亡，從而促進(jìn)子宮平滑肌瘤異常增殖。 3孕激素可能通過(guò)非基因組和基因組兩種作用途徑參與子宮平滑肌瘤的形成與生長(zhǎng)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R737.33

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2476861