【摘要】：背景與目的 子癇前期屬于妊娠期高血壓（Hypertensive Disorders ComplicatingPregnancy）疾病的范疇，是一種妊娠期特發(fā)性疾病，以孕期出現(xiàn)高血壓和蛋白尿?yàn)橹饕R床表現(xiàn)的多器官損害疾病，該病對(duì)母胎影響極大，我國(guó)發(fā)病率9.4%，國(guó)外報(bào)道7%~12%，且近年發(fā)病率呈增高趨勢(shì)[1]。迄今為止，其病因和發(fā)病機(jī)制尚不明朗，類似盲人摸象，只是提出了很多假說(shuō)，包括免疫假說(shuō)、遺傳假說(shuō)、血管內(nèi)皮損害和功能障礙、血管活性物質(zhì)失衡、凝血和纖溶失調(diào)等，但多數(shù)學(xué)者傾向于遺傳易感性。隨分子生物學(xué)技術(shù)的日新月異發(fā)展，子癇前期的遺傳學(xué)研究取得了較大進(jìn)展，已證實(shí)多種基因的單核苷酸多態(tài)性(Single nucleotialpolymorph-isms，SNPs)密切影響子癇前期的發(fā)病及遺傳易感性，如血管緊張素原（AGT）、血管緊張素轉(zhuǎn)換酶（ACE）、腎素受體、VLeiden因子、凝血酶原（Prothrombin）、亞甲基四氫葉酸還原酶（MTHFR）、內(nèi)皮型一氧化氮合酶（eNOS）和腫瘤壞死因子α（TNF-α）的基因及Survivin基因[2]。 Klotho基因是日本學(xué)者Kuro等在1997年研究鹽敏性高血壓時(shí)發(fā)現(xiàn)的一種抗衰老基因，它編碼的蛋白不僅具有抑制細(xì)胞衰老的作用，還具有增強(qiáng)細(xì)胞抗氧化應(yīng)激的能力[3]。近幾年已發(fā)現(xiàn)，部分子癇前期患者的胎盤(pán)里Klotho蛋白及mRNA的表達(dá)明顯低于同孕周、同時(shí)期產(chǎn)婦,而且重度子癇前期患者低于輕度子癇前期的患者[4]。引起這種現(xiàn)象的原因可能是Klotho基因多態(tài)性影響Klotho蛋白表達(dá)水平，Klotho蛋白表達(dá)下降就會(huì)減弱其抗衰老及抗氧化應(yīng)激的作用，從而胎盤(pán)滋養(yǎng)細(xì)胞過(guò)度衰老及血管內(nèi)皮細(xì)胞重度損傷，引起其浸潤(rùn)能力不足，導(dǎo)致胎盤(pán)淺著床、胎盤(pán)的供血與供氧功能極度下降，進(jìn)而引起子癇前期的一系列癥狀[5]。本課題設(shè)計(jì)為子癇前期組與對(duì)照組、重度子癇前期組與輕度子癇前期組兩組，采用等位基因特異性多聚酶鏈反應(yīng)(Allele-specific polymerase chainreaction AS—PCR)技術(shù)分別檢測(cè)此兩組中klotho基因G395A和F352V基因型頻率和等位基因頻率的分布情況，分析klotho基因G395A和F352V多態(tài)性與子癇前期發(fā)病的相關(guān)性。 實(shí)驗(yàn)材料和方法 1研究對(duì)象 依據(jù)樂(lè)杰主編的第7版《婦產(chǎn)科學(xué)》教材的診斷標(biāo)準(zhǔn)，選取從2011年7月到2013年3月期間在鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院剖宮產(chǎn)分娩的子癇前期患者和正常妊娠婦女共382例，分組如下。 子癇前期組共182例包含輕度子癇前期98例和重度子癇前期84例，年齡范圍為22歲～38歲，平均年齡（33.10±6.35）歲；孕周為24周～40周，平均孕周為（35.39±3.14）周。 對(duì)照組200例，為正常妊娠婦女，因產(chǎn)道或胎位異常、社會(huì)因素行剖宮產(chǎn)術(shù)者，年齡范圍為18歲～38歲，平均年齡為（30.8±5.06）歲；孕周為33周～40周，平均孕周為（38.93±1.47）周。 研究對(duì)象的篩選條件為：1、所有研究對(duì)象第一次單胎妊娠且沒(méi)有使用輔助生殖技術(shù)，剖宮產(chǎn)前均未進(jìn)入產(chǎn)程；2、所有研究對(duì)象在近幾代無(wú)任何血緣關(guān)系，夫婦雙方均為漢族人群，長(zhǎng)期在河南地區(qū)生活，無(wú)其他妊娠合并癥及并發(fā)癥；3、無(wú)長(zhǎng)期吸煙、飲酒及孕期大量服藥史，無(wú)孕期外傷史與感染史，無(wú)輸血及免疫治療史。 2研究方法 （1）首先，抽取研究對(duì)象的外周血并用鹽析的方法提取其DNA，然后運(yùn)用等位基因特異性多聚酶鏈反應(yīng)(Allele-specific polymerase chain reactionAS—PCR)技術(shù)，檢測(cè)klotho基因G-395A與F352V兩個(gè)位點(diǎn)的基因型頻率和等位基因頻率在本課題設(shè)計(jì)的兩組中的分布情況。 （2）其次，檢驗(yàn)所得數(shù)據(jù)是否符合哈迪-溫伯格（Hardy-Weinbergequilibrium，HWE）遺傳平衡定律。 （3）再次，試驗(yàn)數(shù)據(jù)通過(guò)軟件SPSS17.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用RxC表卡方檢驗(yàn)比較基因型和等位基因頻率；同時(shí)運(yùn)用非條件邏輯回歸分析基因型與子癇前期的關(guān)聯(lián)程度，，并用比值比(odds ratio, OR)和95%置信區(qū)間(confi-dente interval，CI)表示。所得數(shù)據(jù)經(jīng)分析后均以α=0.05、P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果 1臨床資料的分析比較 經(jīng)數(shù)據(jù)分析體重、孕周、產(chǎn)前體重指數(shù)（Body Mass Index, BMI）在對(duì)照組與子癇前期組，輕子癇前期組度與重度子癇前期組的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）；而年齡、身高在此兩組研究對(duì)象的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05）。 2. Klotho基因G-395A和F352V兩個(gè)位點(diǎn)基因型分布頻率進(jìn)行擬合有度卡方檢驗(yàn) （1）在382例研究對(duì)象即子癇前期與正常對(duì)照組存在GG、GA、 AA三種基因型，分別為GG型91例（23.8%），GA型204例（53.4%），AA型87例（22.8%），A等位基因頻率為49.5%, G等位基因?yàn)?0.5%，符合Hardy-Wein berg平衡（2=1.776，P=0.183）。 （2）在382例研究對(duì)象即子癇前期組與正常對(duì)照組存在FF、FV、VV三種基因型，分別為FF型273例（71.5%），F(xiàn)V型99例（25.9%），VV型10例（2.6%），F(xiàn)等位基因頻率為84.4%, V等位基因?yàn)?5.6%，符合Hardy-Wein berg平衡（2=0.081，P=0.776）。 3.1. Klotho基因G-395A位點(diǎn)多態(tài)性與子癇前期相關(guān)性分析 （1）子癇前期組等位基因A的基因頻率高于對(duì)照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（2=4.664，P0.05）。用SPSS17.0分析該基因G-395A位點(diǎn)與子癇前期的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，結(jié)果表示A/G的相對(duì)危險(xiǎn)度OR值為1.368，95%的置信區(qū)間CI為（1.029~1.819）。 （2）子癇前期組等位基因A的基因頻率高于對(duì)照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（2=11.378，P0.05）。用SPSS17.0分析該基因G-395A位點(diǎn)與子癇前期發(fā)病程度的風(fēng)險(xiǎn)，結(jié)果表示A/G的相對(duì)危險(xiǎn)度OR值為2.055，95%的置信區(qū)間CI為（1.349~3.132）。 3.2. Klotho基因F352V位點(diǎn)多態(tài)性與子癇前期相關(guān)性分析 (1)子癇前期組與對(duì)照組的基因型FF的基因頻率無(wú)明顯差異（P0.05），子癇前期組等位基因的F基因頻率與對(duì)照組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（2=1.295，P=0.255）。(2)重度子癇前期組與輕度子癇前期組的基因型FF的頻率無(wú)明顯差異（P0.05），重度子癇前期組等位基因的F基因頻率與輕度子癇前期組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（2=0.402，P=0.526）。 結(jié)論 1. Klotho基因G-395A位點(diǎn)多態(tài)性可能與河南漢族婦女子癇前期的發(fā)病有關(guān)，AA基因型易發(fā)生子癇前期，A等位基因可能是河南漢族婦女發(fā)生子癇前期的危險(xiǎn)因素，并與子癇前期的嚴(yán)重程度有關(guān)。 2. Klotho基因F352V位點(diǎn)的多態(tài)性可能與河南漢族婦女子癇前期的發(fā)病無(wú)相關(guān)性。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R714.244

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2453738