【摘要】：目的： 1、分析腎虛肝郁型DOR患者的生命質(zhì)量現(xiàn)狀及其影響因素,為腎虛肝郁DOR的預(yù)防保健提供科學(xué)依據(jù),為腎虛肝郁DOR的治療提供新的思路和方法。 2、確定CTX致大鼠卵巢功能損害模型建模成功。 3、觀察加減歸腎丸對環(huán)磷酰胺所致卵巢功能減退大鼠卵巢功能的影響。 方法： 1、選擇2012年10月——2013年10月,于廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院婦科門診、廣東省第二中醫(yī)院婦科門診就診,符合納入標(biāo)準(zhǔn)者50例作為觀察組。選擇同期來我院體檢的月經(jīng)正常的,年齡在18-40歲之間的健康婦女50例作為健康對照組。觀察組及健康對照組均采用統(tǒng)一信息登記表,專人面對面詳細詢問病史,并填寫《健康測量量表SF-36))。以分析腎虛肝郁型DOR患者的生命質(zhì)量現(xiàn)狀及其影響因素。 2、預(yù)試驗 (1)參照劉惠芬等造模方法予CTX75mg/kg腹腔單次注射,確定照模成功。 (2)將48只SD雌性大鼠隨機分為空白對照組、模型組、中藥組,每組均于用藥后1、2、3、4周每日觀察大鼠動情周期,每周每組處死4只大鼠,稱取卵巢重量、進行卵巢組織形態(tài)學(xué)觀察及卵泡計數(shù)、測定血清E2、FSH,評估卵巢儲備功能,觀察大鼠卵巢功能恢復(fù)情況。 3、加減歸腎丸對環(huán)磷酰胺所致卵巢功能減退大鼠卵巢功能的影響 (1)參照劉惠芬等造模方法予CTX75mg/kg腹腔單次注射造模。 (2)大鼠造模1周后眼眶靜脈叢取血分離血清測定E2、FSH水平,取造模成功大鼠40只隨機分為5組,分別為空白對照組、模型組、中藥高、中、低劑量組、西藥對照組,每組8只。中藥各劑量組及西藥對照組大鼠按劑量灌胃給藥,l0ml/kg,每天1次,連續(xù)4周,空白對照組、模型組大鼠給予等體積蒸餾水。 (3)各組大鼠均于用藥4周內(nèi)每日觀察大鼠動情周期,給藥4周結(jié)束后各組大鼠取血測定血清E2、FSH、LH、AMH、INHB,稱取卵巢重量,進行卵巢組織形態(tài)學(xué)觀察及卵泡計數(shù),免疫組化測定VEGF、GDF-9表達,評估卵巢儲備功能,觀察大鼠卵巢功能恢復(fù)情況。 結(jié)果： 1、腎虛肝郁型DOR患者的生命質(zhì)量及影響因素分析 (1)兩組婦女身高、體重、BMI比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 (2)熬夜、吸煙、飲酒的人數(shù)在觀察組中明顯高于健康對照組,經(jīng)常鍛煉的人數(shù)在觀察組中明顯低于健康對照組,經(jīng)統(tǒng)計學(xué)比較有顯著性差異(P0.05)；精神緊張、長期抑郁、遭受重大刺激、易生氣的人數(shù)在觀察組中明顯高于健康對照組,經(jīng)統(tǒng)計學(xué)比較有顯著性差異(P0.05)；感覺壓力大、經(jīng)常出差、大專以上的人數(shù)在觀察組中明顯高于健康對照組,與同事關(guān)系融洽的人數(shù)在觀察組中明顯低于健康對照組,經(jīng)統(tǒng)計學(xué)比較有顯著性差異(P0.05)。 (3)兩組婦女生存質(zhì)量狀況比較：SF-36總體健康評分在觀察組為711.41±18.91分,在健康對照組為1068.57±30.77分,經(jīng)統(tǒng)計學(xué)比較有顯著性差異(P0.05)；生理健康評分、心理健康評分在觀察組婦女明顯低于健康對照組婦女,經(jīng)統(tǒng)計學(xué)比較,有顯著性差異(P0.05)；PF、RP、BP、GH、VT、SF、RE、MH在觀察組婦女明顯低于健康對照組婦女,經(jīng)統(tǒng)計學(xué)比較,有顯著性差異(P0.05)。 2、預(yù)試驗 (1)大鼠一般情況 空白對照組大鼠外觀體征、行為活動、精神狀態(tài)、攝食、飲水、被毛、呼吸、口、眼、鼻、耳、大小便形狀顏色等均正常。模型組大鼠被毛疏松,活動減少,精神不振,四肢無力。中藥組大鼠外觀體征、行為活動、精神狀態(tài)、攝食、飲水等于空白對照組大鼠無明顯異常,被毛、呼吸、口、眼、鼻、耳、大小便形狀顏色等均屬正常。 (2)對動情周期的影響 空白對照組所有的大鼠陰道涂片均有規(guī)則的動情周期變化,周期為4-6d,中位數(shù)為5d。模型組大鼠在CTX注射后第1、2周陰道涂片顯示動情周期發(fā)生改變,規(guī)則的動情周期變化消失,延長為8-17d,中位數(shù)為1ld。陰道涂片顯示分泌物少,有較多散在的白細胞,少量上皮細胞,部分有少量的角化細胞和有核細胞,動情間期時間為5-7d。中藥組大鼠在CTX注射后第1、2周陰道涂片顯示動情周期也發(fā)生改變,規(guī)則的動情周期變化延長,為6-12d,中位數(shù)為9d。陰道涂片顯示有少量散在白細胞,少量上皮細胞,少量的角化細胞和有核細胞,動情間期時間為2-4d。 (3)對卵巢功能減退大鼠血清中E2、FSH水平的影響 血清E2水平在模型組大鼠于2w、3w、4w時顯著降低,與空白對照組比較有顯著性差異(P0.05或P0.01)。在中藥組大鼠于3w、4w時顯著升高,與模型組比較有顯著性差異(P0.05)。血清FSH水平在模型組大鼠于1w、2w、3w、4w時顯著升高,與空白對照組比較有顯著性差異(P0.05或P0.01)。在中藥組大鼠于1w、2w、3w、4w時均顯著降低,與模型組比較有顯著性差異(P0.05)。 (4)對卵巢功能減退大鼠卵巢指數(shù)的影響 卵巢指數(shù)在模型組大鼠于2w、3w、4w時顯著減小(P0.05或P0.01),與空白對照組比較有顯著性差異。卵巢指數(shù)在中藥組大鼠于1w、2w、3w、4w時均有一定程度升高,與模型組比較無顯著性差異(P0.05)。 (5)對卵巢功能減退大鼠卵泡數(shù)目的影響 原始卵泡數(shù)在模型組大鼠于1w、2w、3w、4w時均顯著減少,與空白對照組比較有顯著性差異(P0.01)；在中藥組大鼠于1w、2w、3w、4w時均明顯增多,與模型組比較有顯著性差異(P0.01)。初級卵泡、次級卵泡、成熟卵泡、閉鎖卵泡數(shù)在模型組大鼠于1w、2w、3w、4w時均顯著增多,與空白對照組比較有顯著性差異(P0.01)；在中藥組大鼠于1w、2w、3w時均明顯減少,與模型組比較有顯著性差異(P0.05)。 (6)對卵巢功能減退大鼠卵巢組織形態(tài)學(xué)的影響 空白對照組大鼠(n=4)卵巢鏡下觀察各受檢卵巢(1w、2w、3w、4w)可清楚的分為皮質(zhì)和髓質(zhì)兩部分,皮質(zhì)部有較多大小不一、染色較深的原始卵泡、初級卵泡、次級卵泡、成熟卵泡和閉鎖卵泡、黃體及白體,間質(zhì)腺少見,血管豐富,細胞與纖維組織構(gòu)成皮質(zhì)的基質(zhì),未發(fā)現(xiàn)間質(zhì)出血、水腫、變性、壞死、纖維化等病變；髓質(zhì)含豐富的神經(jīng)、淋巴管和較多的血管,未見充血、變性壞死等異常改變。模型組大鼠(n=4)卵巢鏡下觀察各受檢卵巢(1w、2w、3w、4w)髓質(zhì)部分萎縮,皮質(zhì)增生明顯,有纖維化樣變,閉鎖卵泡顯著加。中藥組大鼠(n=4)卵巢鏡下觀察各受檢卵巢(1w、2w、3w、4w)髓質(zhì)基本正常,無明顯萎縮,皮質(zhì)增生較少,各級卵泡、黃體等基本同空白對照組,未見明顯變性、纖維化等病變。 3、加減歸腎丸對環(huán)磷酰胺所致卵巢功能減退大鼠卵巢功能的影響 (1)對卵巢功能減退大鼠體重的影響 大鼠腹腔注射CTX后1周,大鼠體重在模型組及各給藥組與空白對照組比較顯著下降(P0.05)。給藥4周后,大鼠體重在模型組與空白對照組比較顯著下降(P0.05)；在中藥各劑量組與西藥對照組與模型組比較顯著增加(P0.01),與空白對照組比較無顯著性差異(P0.05)。 (2)大鼠動情周期的改變 通過陰道涂片觀察所得,各組大鼠造模前動情周期變化規(guī)律,周期約4~5d。除空白對照組外,其余各組大鼠腹腔注射CTX后大鼠出現(xiàn)動情周期改變,停止于動情間期；空白對照組仍有規(guī)律的動情周期。模型組造模后4周內(nèi)動情周期紊亂；中藥高、中劑量組給藥后14~15d出現(xiàn)完整的動情周期；中藥低劑量組給藥后19-20d左右開始出現(xiàn)動情前期,持續(xù)8~10d,至給藥4周結(jié)束前出現(xiàn)動情期；西藥對照組給藥后15~17d出現(xiàn)動情周期,周期時間延長。 (3)對卵巢功能減退大鼠血清E2、FSH的影響 大鼠腹腔注射CTX后1周后,血清E2水平在模型組及各給藥組大鼠與空白對照組比較顯著下降(P0.01)。給藥4周后,E2在中藥各劑量組與西藥對照組較給藥前顯著上升(P0.05),與模型組比較顯著增加(P0.01)；在模型組大鼠與空白對照組比較仍明顯降低(P0.01)。 大鼠腹腔注射CTX后1周后,血清FSH水平在模型組及各給藥組大鼠與空白對照組比較顯著升高(P0.01)。給藥4周后,FSH在中藥各劑量組與西藥對照組較給藥前顯著下降(P0.05),與模型組比較顯著降低(P0.01),在模型組大鼠與空白對照組比較仍顯著增高(P0.01)。 (4)對卵巢功能減退大鼠大鼠血清AMH、INHB的影響 大鼠腹腔注射CTX后1周后,AMH、INHB在模型組及各給藥組大鼠與空白對照組比較顯著下降(P0.05)。給藥4周后,AMH、INHB在模型組大鼠與空白對照組比較顯著下降(P0.01)；在中藥各劑量組及西藥對照組與模型組比較顯著增加(P0.01),與空白對照組比較無顯著性差異(P0.05)。 (5)對卵巢功能減退大鼠大鼠卵巢指數(shù)的影響 大鼠給藥4周后,卵巢指數(shù)在模型組大鼠與空白對照組比較明顯下降(P0.01)；在中藥各劑量組與西藥對照組與模型組比較顯著增加(P0.01),與空白對照組比較無顯著性差異(P0.05)。 (6)對卵巢功能減退大鼠卵泡數(shù)目的影響 給藥4周后,原始卵泡計數(shù)在模型組大鼠與空白對照組比較明顯減少(P0.01)。 原始卵泡計數(shù)在中藥高、中劑量組與模型組比較顯著增加(P0.01及P0.05)；在中藥高劑量組與空白對照組比較無統(tǒng)計學(xué)差異(PO.05)。 初級卵泡計數(shù)、生長卵泡計數(shù)、成熟卵泡計數(shù)在模型組與空白對照組比較有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)；在中藥各劑量組與模型組比較顯著減少(P0.05),與空白對照組比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。 (7)對大鼠卵巢結(jié)構(gòu)形態(tài)學(xué)的影響 從卵巢組織病理切片鏡下觀察可知,空白對照組卵巢皮質(zhì)結(jié)構(gòu)正常,可見各級卵泡及黃體分布,形態(tài)正常,成熟卵泡體積較大,卵泡液較多。模型組卵巢有萎縮,生長卵泡減少,閉鎖卵泡較多。中藥高、中劑量組生長卵泡較模型組增多,出現(xiàn)較大直徑的卵泡,閉鎖卵泡減少。中藥低劑量組生長卵泡仍較少,原始卵泡可見。西藥對照組初級卵泡、生長卵泡增多,成熟卵泡可見。 (8)對大鼠卵巢組織VEGF、GDF-9表達的影響 應(yīng)用免疫組化SP法對大鼠卵巢進行VEGF蛋白表達,以卵泡顆粒細胞棕黃色或褐色染色為陽性表達,并進行積分光密度測定。VEGF蛋白在模型組大鼠卵巢卵泡顆粒的表達與空白對照組比較顯著減弱(P0.01),在中藥各劑量組表達較模型組顯著增強(P0.01),在中藥高劑量組較空白對照組陽性表達增強(P0.01),在中藥中劑量組與空白對照組比較無顯著性差異(P0.05)。 應(yīng)用免疫組化SP法對大鼠卵巢進行GDF-9蛋白表達,以初級及更大卵泡卵母細胞膜出現(xiàn)棕黃色或褐色染色為陽性表達,并進行積分光密度測定。GDF-9蛋白在模型組大鼠卵巢卵母細胞膜的表達減弱(P0.01),在中藥各劑量組及西藥對照組表達較模型組強(P0.01),在中藥高、中劑量組與空白對照組比較無顯著性差異(P0.05) 結(jié)論： 1、腎虛肝郁型DOR患者生命質(zhì)量明顯下降,具體表現(xiàn)在社會功能、精神健康及總體健康3個維度受到損害,DOR患者心理健康下降程度遠大于軀體健康。其發(fā)病與社會、心理因素,生活習(xí)慣、文化程度等有關(guān)。 2、CTX單次腹腔注射可致SD大鼠卵泡發(fā)育障礙,性激素分泌紊亂,卵巢功能減退。給藥后中藥組FSH水平降低,E2水平升高,激素水平與空白對照組無顯著性差異,說明加減歸腎丸可恢復(fù)DOR大鼠動情周期,促進DOR大鼠卵泡的發(fā)育及排卵功能,改善DOR大鼠血清高促性腺激素低雌激素狀態(tài),從而恢復(fù)卵巢功能。 3、加減歸腎丸可通過多種途徑提高卵巢儲備功能,具體表現(xiàn)在以下幾方面：對下丘腦-垂體-卵巢軸的降調(diào)節(jié),減少促性腺激素的分泌；提高DOR大鼠AMH水平；上調(diào)DOR大鼠顆粒細胞VEGF水平,通過旁分泌的形式刺激卵泡膜內(nèi)皮細胞增生,促進卵巢血管生成；可上調(diào)DOR大鼠GDF-9蛋白的表達,以此促進始基卵泡募集,促進卵泡發(fā)育,抑制卵泡閉鎖,以達到排卵的目的。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R711.75

【參考文獻】

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本文編號：2446744