【摘要】：目的 :觀察Ras同源性基因(Ras homology,Rho)-Rho相關(guān)卷曲螺旋形成蛋白激酶(Rho-associated coiledcoil-forming protein kinase,ROCK)信號通路抑制劑RKI-1447對卵巢癌CAOV-3細胞遷移及侵襲能力的影響,并探討其可能的作用機制。方法:體外培養(yǎng)CAOV-3細胞,以不同濃度的RKI-1447(1、10、20、30、40和50μmol/L)處理CAOV-3細胞12 h后,采用CCK-8法檢測RKI-1447對CAOV-3細胞增殖抑制率的影響,同時設(shè)未用任何藥物處理的CAOV-3細胞為空白對照組。劃痕實驗以及Transwell小室侵襲實驗檢測RKI-1447(1和10μmol/L)對CAOV-3細胞遷移和侵襲能力的影響;分別采用實時熒光定量PCR法和蛋白質(zhì)印跡法檢測RKI-1447對CAOV-3細胞中Rho C m RNA及其蛋白表達的影響;同時采用蛋白質(zhì)印跡法檢測對RKI-1447肌球蛋白輕鏈2(myosin light chain 2,MLC-2)蛋白及其磷酸化蛋白表達的影響。結(jié)果:采用不同濃度的RKI-1447作用于CAOV-3細胞12 h后,細胞的增殖被明顯抑制,抑制率呈劑量依賴性,半數(shù)抑制濃度(half inhibition concentration,IC50)約為20μmol/L。RKI-1447濃度為1和10μmol/L處理細胞12 h后,CAOV-3細胞的遷移及侵襲能力被顯著抑制(P值均0.05);Rho C m RNA及蛋白的表達被明顯下調(diào)(P值均0.05),磷酸化MLC-2蛋白的表達水平也被明顯下調(diào)(P0.05)。結(jié)論 :RKI-1447對卵巢癌CAOV-3細胞的增殖、遷移及侵襲能力具有抑制作用,這可能與其調(diào)控Rho-ROCK信號通路中Rho C的表達以及MLC-2蛋白的磷酸化水平相關(guān)。
[Abstract]:Aim: to investigate the effects of RKI-1447, a signal pathway inhibitor of Ras homologous gene (Ras homology,Rho)-Rho associated crimp forming protein kinase (Rho-associated coiledcoil-forming protein kinase,ROCK), on the migration and invasion of ovarian cancer CAOV-3 cells. The possible mechanism of its action is also discussed. Methods: CAOV-3 cells were cultured in vitro. CAOV-3 cells were treated with different concentrations of RKI-1447 for 12 h. The effect of RKI-1447 on the proliferation inhibition rate of CAOV-3 cells was detected by CCK-8 assay. At the same time, the CAOV-3 cells which were not treated with any drugs were used as the blank control group. The effects of RKI-1447 (1 渭 mol/L and 10 渭 mol/L) on the migration and invasion of CAOV-3 cells were detected by scratch test and Transwell chamber invasion assay. The effect of RKI-1447 on the expression of Rho C m RNA and its protein in CAOV-3 cells was detected by real-time fluorescence quantitative PCR and Western blotting respectively. At the same time, the expression of RKI-1447 myosin light chain 2 (myosin light chain 2 MLC-2 protein and its phosphorylated protein were detected by Western blotting. Results: the proliferation of CAOV-3 cells was significantly inhibited after 12 h treatment with different concentrations of RKI-1447, and the inhibition rate was dose-dependent. The half inhibitory concentration of (half inhibition concentration, was found to be in a dose-dependent manner. The migration and invasion of CAOV-3 cells were significantly inhibited after 12 h treatment with IC50 (20 渭 mol/L.RKI-1447) and 10 渭 mol/L (P < 0. 05). The expression of Rho C m RNA and protein was significantly down-regulated (P < 0. 05), and the expression of phosphorylated MLC-2 protein was also down-regulated (P0.05). Conclusion: RKI-1447 can inhibit the proliferation, migration and invasion of ovarian cancer CAOV-3 cells, which may be related to the regulation of Rho C expression in Rho-ROCK signaling pathway and the phosphorylation of MLC-2 protein.
【作者單位】： 貴州醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院病理科;貴州省腫瘤醫(yī)院病理科;
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項目(編號:81460482)~~
【分類號】：R737.31

【參考文獻】

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本文編號：2407170