【摘要】：背景妊娠肝內(nèi)膽汁淤積癥(intrahepatic cholestasis of pregnancy,ICP)是一種妊娠期相關(guān)的并發(fā)癥。該疾病有明顯的地域性,發(fā)病率從0.1%到15.6%不等。臨床表現(xiàn)為孕晚期出現(xiàn)輕度至重度瘙癢和肝功能異常,但疾病的癥狀和肝功能異常在分娩后一周內(nèi)迅速恢復(fù)。然而,該疾病卻對母親和胎兒產(chǎn)生嚴(yán)重的影響。對于母體的影響主要是頑固性瘙癢和易于產(chǎn)后出血而導(dǎo)致產(chǎn)婦死亡率增加。對胎兒的影響就更為嚴(yán)重,該疾病會增加胎兒自發(fā)性早產(chǎn)、胎兒宮內(nèi)窘迫和宮內(nèi)死亡的風(fēng)險。目前,ICP確切的致病原因尚不清楚,普遍認(rèn)為遺傳、激素、營養(yǎng)和環(huán)境因素與疾病的發(fā)病機(jī)制相關(guān)。ICP的診斷也沒有統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn),國內(nèi)臨床診斷主要依據(jù)瘙癢和排除其它疾病的肝功異常�？偰懼�(total bile acid,TBA)的增高被認(rèn)為是診斷ICP最重要的實驗室指標(biāo),然而某些ICP病例其TBA水平仍保持正常水平。因而選取更靈敏和特異的指標(biāo)對ICP患者盡早進(jìn)行診斷以及改善預(yù)后具有顯著的意義。循環(huán)micro RNA(mi RNA)廣泛存在于多種體液中,它的水平能反應(yīng)組織的特異損傷和表達(dá),含量穩(wěn)定并易于檢測。循環(huán)mi RNA可作為一種理想的無創(chuàng)性生物標(biāo)志物�；谝嘿|(zhì)聯(lián)用的非靶向代謝組學(xué)技術(shù)可對復(fù)雜生物體系的大量代謝物同時進(jìn)行分析,非常適用于生物標(biāo)志物的發(fā)現(xiàn)研究。目的針對目前臨床上尚無診斷ICP的靈敏、特異的生物標(biāo)志物且ICP的發(fā)病機(jī)制尚未明確的研究狀況,本研究以尿液為研究載體,利用多平臺篩選診斷ICP的標(biāo)志物。方法本研究選取ICP孕婦和正常孕婦尿樣各10例,用定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(quantitative reverse transcriptase polymerase chain reaction,q RT-PCR)方法對人360種成熟mi RNA進(jìn)行初篩。另選取ICP孕婦尿液樣本50例和正常孕婦尿樣本60例作為驗證組,對初篩的候選mi RNA采用q RT-PCR法驗證。用回歸模型獲得診斷ICP的最優(yōu)模式,尋找靈敏、特異的mi RNA標(biāo)志物并用受試者特征工作(receiver operating characteristic,ROC)曲線進(jìn)行評估。本研究同時從上述病例中選取了ICP孕婦和正常孕婦尿樣各30例,采用基于高效液相色譜-四級桿飛行時間質(zhì)譜(high performance liquid chromatography-quadrupole-time of flight mass spectrometry,HPLC-Q-TOF MS)的非靶向代謝組學(xué)方法考察ICP疾病發(fā)生時尿液代謝物的變化。采用有監(jiān)督和無監(jiān)督模型篩選代謝標(biāo)志物,對候選標(biāo)志物采用統(tǒng)計學(xué)方法、回歸原始數(shù)據(jù)篩選及構(gòu)建無信息模型驗證標(biāo)志物。用HMDB數(shù)據(jù)庫和同位素比對的方法鑒定標(biāo)志物并進(jìn)行代謝通路分析。用回歸模型獲得診斷ICP的最優(yōu)模式,尋找靈敏、特異的代謝標(biāo)志物,用ROC曲線進(jìn)行評估。1.與正常孕婦相比,ICP孕婦尿樣中23種mi RNA的表達(dá)水平有明顯差異,其中14種mi RNA上調(diào)(P0.05),9種mi RNA下調(diào)(P0.05)。這23種mi RNA的熱圖可以區(qū)分ICP組與正常孕婦組。2.經(jīng)驗證ICP孕婦與正常孕婦尿液的mi RNA表達(dá)水平相比hsa-mi R-151-3p,has-mi R-489,and hsa-mi R-300的表達(dá)明顯降低;hsa-mi R-16,hsa-mi R-671-3p,and hsa-mi R-369-5p的表達(dá)水平明顯增高。3.二元logistic回歸模型評估差異表達(dá)的6個mi RNA診斷ICP效率,顯示hsa-mi R-151-3p,hsa-mi R-671-3p,hsa-mi R-369-5p和hsa-mi R-300對ICP有顯著的診斷價值。聯(lián)合這4種mi RNA構(gòu)建的ROC曲線下面積為0.913,準(zhǔn)確度為82.9%,特異度為87.0%。4.優(yōu)化后的色譜條件下代謝物成分豐富,峰分布均勻。建立尿液非靶向代謝組學(xué)方法正離子模式下天內(nèi)保留時間變異小于1.9%,峰面積變異小于11.3%,天間保留時間變異小于4%,峰面積變異小于16.6%;負(fù)離子模式下天內(nèi)保留時間變異小于3%,峰面積變異小于12.5%,天間保留時間變異小于3.8%,峰面積變異小于14.1%。5.經(jīng)數(shù)據(jù)處理峰識別、峰過濾與峰對齊后正模式下獲得986個代謝物,負(fù)模式下獲得647個代謝物。構(gòu)建的正交偏最小二乘判別分析(orthogonal partial least square-discriminate analysis,OPLS-DA)模型可以區(qū)分ICP組與正常孕婦組;根據(jù)模型變量投影的重要性(variable importance in the projection,VIP)值大于1且t檢驗P值小于0.05篩選變量,正離子獲得109個,而負(fù)離子模式下獲得119個。6.正離子模式下鑒定出14種差異化合物;負(fù)離子模式下鑒定出結(jié)果18種差異化合物。這些化合的代謝多涉及膽汁酸的合成與代謝、激素代謝和脂代謝。7.二元logistic回歸模型評估發(fā)現(xiàn)代謝產(chǎn)物單酰基甘油(22:5)、溶血磷脂酰乙醇胺(22:5)、硫酸化半胱氨酸、甘氨膽酸和3-硫酸化鵝脫氧膽酸對ICP有顯著的診斷價值。這些代謝物作為聯(lián)合診斷指標(biāo)構(gòu)建的ROC曲線下面積為0.988,靈敏度為90%,特異性為93.3%。結(jié)論1.ICP孕婦尿液某些mi RNA與正常孕婦存在明顯差異。2.hsa-mi R-151-3p,hsa-mi R-671-3p,hsa-mi R-369-5p和hsa-mi R-300可聯(lián)合診斷ICP,有較高的靈敏度和特異性。3.ICP孕婦尿液與正常孕婦尿液的代謝譜存在明顯差異。這些代謝多涉及膽汁酸的合成與代謝、激素代謝和脂代謝,揭示ICP的發(fā)生可能與這些代謝物的紊亂有關(guān)。4.代謝產(chǎn)物單�；视�(22:5)、溶血磷脂酰乙醇胺(22:5)、硫酸化半胱氨酸、甘氨膽酸和3-硫酸化鵝脫氧膽酸是潛在診斷ICP的標(biāo)志物,聯(lián)合診斷ICP有高的特異性和靈敏度。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R714.255;R446.1

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本文編號：2404660