發(fā)布時(shí)間：2019-01-01 13:10

【摘要】：研究背景妊娠是由精卵著床到胎兒分娩的全過程,前期受精卵做為同種異體抗原成分刺激母體胎盤乃至全部機(jī)體發(fā)生免疫應(yīng)答。早期,母體產(chǎn)生免疫耐受以保證胎兒的正常發(fā)育,該過程的建立涉及機(jī)體多種免疫細(xì)胞和免疫分子的應(yīng)答反應(yīng),需要各反應(yīng)間相互協(xié)調(diào)、相互平衡。整個(gè)妊娠期免疫耐受的建立機(jī)制目前尚不完全清楚。國(guó)內(nèi)外的研究大多聚集在胎盤作用,如局部固有免疫作用和適應(yīng)性免疫作用。CD4+T細(xì)胞是機(jī)體發(fā)揮適應(yīng)性免疫應(yīng)答的重要細(xì)胞,研究者發(fā)現(xiàn)有一群新的T細(xì)胞,它可以通過產(chǎn)生負(fù)性細(xì)胞因子白介素-10(interleukin-10,IL-10)發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用。IL-10可以調(diào)節(jié)輔助性T細(xì)胞1(Th1)、Th2和Th17間的平衡。本課題組成員前期研究顯示受孕婦女血漿IL-10含量明顯增高,且在妊娠晚期下降,結(jié)合妊娠期人絨毛膜促性腺激素hCG升高,我們進(jìn)一步分析hCG與IL-10的相關(guān)性,分析調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例變化是否受到孕期類固醇激素的影響,并在體外條件下驗(yàn)證hCG對(duì)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞分化的影響。本研究一方面有助于了解妊娠免疫耐受形成的機(jī)制,另一方面可為妊娠期免疫耐受不良引起的流產(chǎn)、胎兒發(fā)育不良等疾病提供理論依據(jù)。同時(shí)研究IL-10與免疫耐受的關(guān)系,也為誘導(dǎo)免疫耐受維持新移植器官生存等提供重要的免疫靶點(diǎn)。研究目的本實(shí)驗(yàn)旨在分析不同妊娠期外周血hCG、IL-10的含量變化,并分析兩者相關(guān)性,在體外條件下驗(yàn)證hCG促進(jìn)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞分化的作用,闡述妊娠免疫耐受形成的機(jī)制,另一方面可為妊娠期免疫耐受不良引起的流產(chǎn)、胎兒發(fā)育不良等疾病提供理論依據(jù)。同時(shí)研究IL-10與免疫耐受的關(guān)系,也為誘導(dǎo)免疫耐受維持新移植器官生存等提供重要的免疫靶點(diǎn)。研究方法1.研究對(duì)象:按照人衛(wèi)教材《婦產(chǎn)科學(xué)》標(biāo)準(zhǔn),選擇本醫(yī)院婦科或產(chǎn)科受孕婦女,實(shí)驗(yàn)組納入妊娠早、中、晚三期對(duì)象,對(duì)照組為健康未妊娠婦女。2.標(biāo)本采集與前處理:采用肝素鈉抗凝管抽取實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組婦女外周靜脈血10ml,離心取上清凍存,采用梯度密度離心法分離單個(gè)核細(xì)胞,以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。3.利用西門子2000生化儀,通過化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)血漿標(biāo)本hCG含量。4.IL-10的檢測(cè):采用人IL-10 ELISA檢測(cè)試劑盒檢測(cè)不同妊娠期血漿IL-10含量。在有或無hCG條件下,采用佛波酯(PMA)刺激健康人PBMC,檢測(cè)培養(yǎng)上清IL-10含量。5.PBMC IL-10 mRNA檢測(cè):在有或無hCG條件下,采用PMA刺激健康人PBMC,提取刺激后細(xì)胞RNA,將其逆轉(zhuǎn)錄為cDNA,然后采用RT-PCR檢測(cè)IL-10 m RNA的相對(duì)表達(dá)量。6.CD4+CD25+IL-10+Treg細(xì)胞比例檢測(cè):在有或無hCG條件下,采用PMA刺激健康人PBMC,流式細(xì)胞技術(shù)分析刺激后細(xì)胞中Treg細(xì)胞百分比。研究結(jié)果1.化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)結(jié)果顯示hCG在妊娠早期、中期和晚期含量分別為(51304.3±27601.1)IU/L、(14310.2±17719.3)IU/L和(13257.4±7031.5)IU/L,均高于未孕婦女外周血血漿hCG的含量(2.8±3.3)IU/L,統(tǒng)計(jì)學(xué)有顯著差異。2.早、中期妊娠期婦女外周血血漿IL-10含量分別為(326.8±117.0)pg/ml和(213.8±99.1)pg/ml,明顯高于未受孕婦女(91.3±11.1)pg/ml,且均有P0.001。晚期妊娠組婦女外周血血漿IL-10的含量為(150.9±18.8)pg/ml,略高于未妊娠組(P0.05)。IL-10與hCG呈現(xiàn)高度正相關(guān)性(R2=0.719,P0.001)。3.hCG刺激健康未孕婦女外周血PBMC分泌IL-10:有hCG存在的情況下,培養(yǎng)上清IL-10含量為(24.2±9.4)pg/ml,PBMC中IL-10 mRNA相對(duì)表達(dá)量為(2522.3±784.3);無hCG時(shí),培養(yǎng)上清IL-10含量為(13.8±3.4)pg/ml,PBMC中IL-10 mRNA相對(duì)表達(dá)量為(1359.8±311.0),前者顯著高于后者且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。4.hCG刺激CD4+CD25+IL-10+Treg增殖:有hCG存在時(shí),CD4+CD25+IL-10+Treg比例為(7.8±2.1)%,無hCG存在時(shí),CD4+CD25+IL-10+Treg比例為(4.5±1.8)%,前者明顯高于后者且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)論1.妊娠期外周血血漿IL-10含量和hCG含量呈高度正相關(guān),均在早期增高達(dá)到峰值,而后開始下降,至妊娠末期接近未受孕婦女。2.體外條件下,hCG可刺激CD4+CD25+IL-10+Treg細(xì)胞增殖,后者分泌更多IL-10進(jìn)而參與母體妊娠期免疫耐受的過程,為胎兒正常生長(zhǎng)發(fā)育提供必要條件。
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【學(xué)位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R714

【參考文獻(xiàn)】

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1 岳蘭;譚繼英;李少紅;;妊娠免疫耐受機(jī)制的研究進(jìn)展[J];中國(guó)婦幼保健;2012年05期

2 金妍;林其德;汪希鵬;肖云山;呂彩君;丁傳偉;;蛻膜巨噬細(xì)胞TSP-1 IL-10及IFN-γ的表達(dá)及其相互關(guān)系探討[J];中國(guó)實(shí)用婦科與產(chǎn)科雜志;2007年08期

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本文編號(hào)：2397614