【摘要】：目的:初步探討內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)的凋亡耐受在甲氨蝶呤耐藥絨癌發(fā)生機(jī)制中的作用。方法:以人絨毛膜上皮癌JEG-3細(xì)胞及本課題組前期構(gòu)建的甲氨蝶呤耐藥絨癌細(xì)胞(JEG-3/MTXR)為研究對(duì)象。采用WST法評(píng)估甲氨蝶呤處理后JEG-3/MTXR和JEG-3親本細(xì)胞的細(xì)胞活力,Western blot法測(cè)定兩種細(xì)胞中caspase-9激活、GRP78和GADD153蛋白的表達(dá)。RNA干擾法沉默JEG/MTXR細(xì)胞中GADD153基因,Western blot法測(cè)定caspase-9蛋白激活的情況。結(jié)果:不同濃度梯度的甲氨蝶呤誘導(dǎo)后,JEG-3親本細(xì)胞系的細(xì)胞生存率顯著降低。相同濃度甲氨蝶呤作用后,JEG-3/MTXR細(xì)胞內(nèi)切割caspase-9無增加,JEG-3親本細(xì)胞內(nèi)caspase-9激活并切割。JEG-3/MTXR和JEG-3細(xì)胞中GRP78表達(dá)水平呈時(shí)間依賴性上調(diào);JEG-3/MTXR細(xì)胞中GADD153蛋白水平無顯著上調(diào),而JEG-3親本細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)顯著上調(diào)。沉默GADD153基因可抑制MTX引起的切割caspase-9蛋白水平上調(diào)。結(jié)論:內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)的凋亡耐受可能參與甲氨蝶呤耐藥絨癌發(fā)生機(jī)制。
[Abstract]:Aim: to investigate the role of endoplasmic reticulum stress-mediated apoptosis tolerance in methotrexate resistant choriocarcinoma. Methods: human choriocarcinoma JEG-3 cells and methotrexate resistant choriocarcinoma cells (JEG-3/MTXR) were studied. The cell viability of JEG-3/MTXR and JEG-3 parental cells after methotrexate treatment was evaluated by WST method. The activation of caspase-9 and the expression of GRP78 and GADD153 protein were measured by, Western blot method. GADD153 gene was silenced by RNA interference method in JEG/MTXR cells. The activation of caspase-9 protein was measured by Western blot method. Results: the cell survival rate of JEG-3 parental cell line decreased significantly after different concentration gradient methotrexate induction. After the same concentration of methotrexate, caspase-9 cleavage in JEG-3/MTXR cells was not increased, but caspase-9 was activated and dissected in JEG-3 parent cells. GRP78 expression in JEG-3/MTXR and JEG-3 cells was up-regulated in a time-dependent manner. The level of GADD153 protein in JEG-3/MTXR cells was not significantly up-regulated, but that in JEG-3 parent cells was significantly up-regulated. Silencing GADD153 gene can inhibit the up-regulation of caspase-9 cleavage protein level induced by MTX. Conclusion: endoplasmic reticulum stress-mediated apoptosis tolerance may be involved in the pathogenesis of methotrexate resistant choriocarcinoma.
【作者單位】： 中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)院婦產(chǎn)科;國(guó)家人口計(jì)生委科學(xué)技術(shù)研究所生殖健康與計(jì)劃生育服務(wù)中心;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助(No:81272890)
【分類號(hào)】：R737.33

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本文編號(hào)：2389657