【摘要】：目的:探討滋養(yǎng)細(xì)胞體外缺氧不同處理方法模擬子癇前期模型的優(yōu)化研究。方法:HTR8/SVneo滋養(yǎng)細(xì)胞分別在1%O2(缺氧環(huán)境)和21%O2(常氧環(huán)境)培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1 h(記為H1、N1)或2 h(記為H2、N2),缺氧1 h后復(fù)氧1 h(記為H1R1)和缺氧2 h后復(fù)氧2 h(記為H2R2),H1R1后再缺氧1 h(記為H1R1H1),H2R2后再缺氧2 h(記為H2R2H2),H1R12個(gè)循環(huán)(記為H1R1H1R1)和H2R22個(gè)循環(huán)(記為H2R2H2R2),缺氧2 h后復(fù)氧6 h(記為H2R6),持續(xù)缺氧24 h,以及持續(xù)常氧4 h(記為N4)、8 h(記為N8)和24 h(記為Normoxia),然后提取蛋白以Western blot檢測(cè)腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)磷酸化水平,以驗(yàn)證各組處理對(duì)于誘導(dǎo)滋養(yǎng)細(xì)胞能量應(yīng)激的效果;HTR8/SVneo滋養(yǎng)細(xì)胞在常氧或者缺氧環(huán)境培養(yǎng)24 h后經(jīng)氣相質(zhì)譜技術(shù)(gas chromatography mass spectrum,GS-MS)進(jìn)行細(xì)胞代謝組學(xué)分析,以驗(yàn)證AMPK磷酸化水平上調(diào)是否與滋養(yǎng)細(xì)胞代謝組變化具有一致性。結(jié)果:缺氧組AMPK的活性(1.615±0.111)明顯高于常氧組(1.000±0.107)和缺氧復(fù)氧組(1.277±0.113);缺氧時(shí)顯著增加的代謝物有4-甲基-2-戊酮酸(log22.597為1.377)、水合乙醛酸(log22.483為1.312)、組氨酸(log21.188為0.248)、苯丙氨酸(log21.262為0.335)、纈氨酸(log21.518為0.602)、正亮氨酸(log21.519為0.603)、乙酰絲氨酸(log21.691為0.758)、絲氨酸(log21.783為0.834)、半胱氨酸(log21.851為0.889)、蛋氨酸(log22.072為1.051)、鳥氨酸(log22.251為1.170)等;而棕櫚反油酸(log20.127為-2.983)、11,14,17-廿碳三烯酸(log20.334為-1.583)、二十四單烯酸(log20.600為-0.738)、共軛亞油酸(log20.680為-0.557)、順式十八碳烯酸(log20.711為-0.492)、9-十七碳烯酸(log20.782為-0.355)、二十二碳六烯酸(log20.829為-0.271)、二十碳五烯酸(log20.841為-0.250)、芥酸(log20.844為-0.244)、二十二碳五烯酸(log20.898為-0.156)、檸檬酸(log20.279為-1.842)、蘋果酸(log20.208為-2.264)、琥珀酸(log20.254為-1.980)、順烏頭酸(log20.260為-1.946)、β-檸檬酸-左旋谷氨酸(log20.093為-3.430)、β-丙氨酸(log20.139為-2.851)、胱硫醚(log20.267為-1.904)、順式-4-羥脯氨酸(log20.500為-1.000)等在缺氧時(shí)顯著降低。代謝途徑結(jié)果分析顯示缺氧時(shí)滋養(yǎng)細(xì)胞中核苷酸代謝[log2(1.811、1.149)分別為0.857、0.201]、能量代謝[log2(1.510、1.173、1.149)分別為0.595、0.230、0.201]、維生素代謝[log2(1.045、1.052、1.125)分別為0.064、0.073、0.170]、氨基酸代謝[log2(1.245、1.020、1.027、1.123、1.127、1.076)分別為0.316、0.028、0.039、0.167、0.173、0.106]、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)(log21.046為0.065)、蛋白翻譯(log21.026為0.037)等途徑被激活,而碳水化合物[log2(0.857、0.857、0.799)分別為-0.222、-0.222、-0.323]、脂肪酸[log2(0.944、0.912、0.826)分別為-0.083、-0.133、-0.276]、內(nèi)分泌代謝[log2(0.885、0.799、0.799)分別為-0.176、-0.323、-0.323]和其他第二代謝物生物合成[log2(0.947、0.871、0.743)分別為-0.079、-0.199、-0.428]等代謝途徑顯著受到抑制。結(jié)論:單純?nèi)毖跄Ｐ透m合用于子癇前期病理生理機(jī)制的體外研究。
[Abstract]:Objective: to study the optimization of hypoxia-induced preeclampsia model with different treatments of trophoblastic cells in vitro. Methods: HTR8/SVneo trophoblast cells were cultured in 1%O2 (hypoxic environment) and 21%O2 (normoxic environment) incubators for 1 h (H _ 1N _ 1) or 2 h (H _ 2N _ 2), respectively. One hour after hypoxia (H1R1), 2 hours after hypoxia (H2R2), 1 hour after H1R1 (H1R1H1), 2 hours after H2R2 (H2R2H2), H1R12 (H1R1H1R1) and H2R22 (H2R2H2R2). Reoxygenation 6 h (H2R6) after 2 h hypoxia, 24 h continuous hypoxia, 4 h normoxic (N4), 8 h (N8) and 24 h (Normoxia),) Then Western blot was used to detect the phosphorylation of adenylate activated protein kinase (AMP-activated protein kinase,AMPK) in order to verify the effect of each group on the induction of trophoblastic energy stress. HTR8/SVneo trophoblastic cells were cultured in normoxic or anoxic environment for 24 hours, and then were analyzed by GC-MS (gas chromatography mass spectrum,GS-MS). To verify whether the up-regulation of AMPK phosphorylation is consistent with the changes of trophoblast metabolism. Results: the activity of AMPK in hypoxia group (1.615 鹵0.111) was significantly higher than that in normoxic group (1.000 鹵0.107) and hypoxia reoxygenation group (1.277 鹵0.113). The metabolites increased significantly during hypoxia were 4-methyl-2-pentanoic acid (log22.597 1.377), hydrated glyoxylic acid (log22.483 1.312), histidine (log21.188 0.248), phenylalanine (log21.262 0.335). Valine (log21.518 = 0.602), L-leucine (log21.519 = 0.603), acetylserine (log21.691 = 0.758), serine (log21.783 = 0.834), cysteine (log21.851 = 0.889), valine (log21.518 = 0.602), L-leucine (log21.519), acetylserine (log21.691), serine (log21.783), cysteine (log21.851), Methionine (log22.072 1.051), ornithine (log22.251 1.170), etc. However, log20.127 was-2.983, log20.334 was-1.583, log20.600 was-0.738, conjugated linoleic acid was-0.557, and palmitoic acid was-2.983, log20.334 was-1.583, log20.600 was-0.738, conjugated linoleic acid was-0.557, and palmitoic acid was-2.983, log20.334 was-1.583, log20.600 was-0.738, conjugated linoleic acid was-0.557. Cis-octadecenoic acid (log20.711 = -0.492), 9-heptadecenoic acid (log20.782 = -0.355), 22 carbohexaenoic acid (log20.829 = -0.271), eicosapentaenoic acid (log20.841 = -0.250), Erucic acid (log20.844 =-0.244), 22 carbapentaenoic acid (log20.898 = -0.156), citric acid (log20.279 = -1.842), malic acid (log20.208 = -2.264), succinic acid (log20.254 = -1.980), Cis aconitic acid (log20.260 =-1.946), 尾 -citrate-L-glutamic acid (log20.093), 尾 -alanine (log20.139 = -2.851), cystathione (log20.267 = -1.904), 尾 -citrate-L-glutamic acid (log20.093), 尾 -alanine (-2.851), cystathion (-1.904). Cis-4-hydroxyproline (log20.500 =-1.000) decreased significantly during hypoxia. Metabolic pathway analysis showed that nucleotide metabolism [log2 (1.8111.149) was 0.857U 0.201] and energy metabolism (log2 (1.510U 1.173U 1.149) was 0.5950.2300.201, respectively) in trophoblastic cells under hypoxia. Vitamin metabolism [log2 (1.045 ~ 1.052 ~ 1.125) = 0.064 ~ 0.073 ~ 0.170] and amino acid metabolism [log2 (1.245 ~ 1.020 ~ 1.027 ~ 1.127 ~ 1.127 ~ 1.076) = 0.316 ~ 0.028 ~ 0.039 ~ 0.1670.1730.106], respectively. Signal transduction (log21.046 = 0.065) and protein translation (log21.026 = 0.037) were activated, while carbohydrate [log2 (0.857N) 0.857U 0.799) was -0.222kg-0.222kg-0.323]. Fatty acids [log2 (0.944 ~ 0.912 ~ (0.826) were -0.083 ~ (-0.133) ~ 0.276] and endocrine metabolism [log2 _ (0.885) ~ (0.799) ~ (0.799) were -0.176 ~ (-0.323), respectively. The metabolic pathways such as-0.323 and other secondary metabolites biosynthesis [log2 (0. 947 0. 871%) were-0. 079-0. 199-0. 428] were significantly inhibited. Conclusion: hypoxia model alone is more suitable for in vitro study of preeclampsia pathophysiology.
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院婦產(chǎn)科重慶醫(yī)科大學(xué)"中國(guó)-加拿大-新西蘭"聯(lián)合母胎醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金面上資助項(xiàng)目(編號(hào):81671488) 重慶市教育委員會(huì)資助項(xiàng)目(編號(hào):KJ1500223) 重慶醫(yī)科大學(xué)資助項(xiàng)目(編號(hào):CYYQ201507)
【分類號(hào)】：R714.244

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本文編號(hào)：2387962