發(fā)布時(shí)間：2018-12-15 00:18

【摘要】：目的構(gòu)建人2型大麻素受體(h CB2R)基因真核表達(dá)載體,探討h CB2R在細(xì)胞中的表達(dá)、定位以及h CB2R對宮頸癌Caski細(xì)胞的生長的影響及機(jī)制。方法構(gòu)建GV230-h CB2R質(zhì)粒,經(jīng)雙酶切、測序鑒定后,轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞和Caski細(xì)胞,Western blot法及免疫熒光細(xì)胞化學(xué)染色聯(lián)合激光掃描共聚焦顯微鏡技術(shù)檢測CB2R表達(dá)及細(xì)胞定位;流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡率,Western blot法及實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測h CB2R、Bcl-2、Bax、Bad的表達(dá)。結(jié)果雙酶切獲得1128 bp的目的片段,測序結(jié)果與h CB2R基因注冊序列(NM_001841.2)的同源性為99%;轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞后,可表達(dá)相對分子質(zhì)量(Mr)40 000的h CB2R蛋白,HEK293細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)中均有CB2R表達(dá);過表達(dá)的CB2R,可上調(diào)Bax、Bad的表達(dá),抑制Bcl-2的表達(dá),促進(jìn)宮頸癌Caski細(xì)胞凋亡。結(jié)論上調(diào)Caski細(xì)胞h CB2R表達(dá)可增強(qiáng)Bax、Bad表達(dá),抑制Bcl-2表達(dá),誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。
[Abstract]:Objective to construct the eukaryotic expression vector of human type 2 cannabinoid receptor (h CB2R) gene and to investigate the expression and localization of h CB2R and the effect of h CB2R on the growth of cervical cancer Caski cells and its mechanism. Methods GV230-h CB2R plasmids were constructed and identified by double enzyme digestion and sequencing. The expression and location of CB2R were detected by, Western blot method and immunofluorescence cytochemical staining combined with laser scanning confocal microscopy (LSCM) in HEK293 cells and Caski cells. The expression of h CB2R,Bcl-2,Bax,Bad was detected by flow cytometry (FCM) and real time fluorescence quantitative PCR (PCR). Results the target fragment of 1128 bp was obtained by double enzyme digestion. The homology of the sequence with NM_001841.2 of h CB2R gene was 99%. After transfection of HEK293 cells, h CB2R protein with relative molecular weight of (Mr) 40 000 was expressed, and CB2R was expressed in both cell membrane and cytoplasm of HEK293. Overexpression of CB2R, could up-regulate the expression of Bax,Bad, inhibit the expression of Bcl-2 and promote the apoptosis of Caski cells. Conclusion upregulation of h CB2R expression in Caski cells can enhance the expression of Bax,Bad, inhibit the expression of Bcl-2 and induce apoptosis.
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心;重慶三峽醫(yī)藥高等�？茖W(xué)校;
【基金】：重慶市教委自然科學(xué)基金(KJ111802) 重慶市衛(wèi)生局醫(yī)學(xué)科研項(xiàng)目(2012-1-096) 重慶市高等教育教學(xué)改革研究重點(diǎn)項(xiàng)目(132128,133309) 重慶萬州區(qū)科技計(jì)劃項(xiàng)目(201203055)
【分類號】：R737.33

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【二級參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2379583