【摘要】：目的 通過檢測GRIM-19在稽留流產(chǎn)與正常早孕患者絨毛組織中的表達(dá)情況,探討GRIM-19表達(dá)差異與稽留流產(chǎn)發(fā)生的相關(guān)性。探究稽留流產(chǎn)患者絨毛組織中細(xì)胞凋亡情況與微血管密度變化,進(jìn)而通過體內(nèi)體外實(shí)驗(yàn)研究GRIM-19表達(dá)變化對線粒體膜電位和細(xì)胞凋亡以及血管生成的影響,進(jìn)一步研究GRIM-19的差異性表達(dá)引起稽留流產(chǎn)的機(jī)制。 方法 體內(nèi)實(shí)驗(yàn)：選擇胚胎停育患者50例為實(shí)驗(yàn)組,正常早孕患者50例為對照組。用免疫組化法對絨毛組織中GRIM-19進(jìn)行定位檢測；采用Western blot和Real-time PCR檢測絨毛組織中GRIM-19蛋白和mRNA水平。采用原位末端標(biāo)記技術(shù)(TUNEL)評估兩組絨毛組織中的細(xì)胞凋亡情況,通過比較CD34在兩組絨毛組織中的表達(dá)差異分析微血管密度(MVD)變化。同時(shí)檢測P53、STAT3、HIF-1α和VEGF在絨毛組織中的表達(dá)及定位,并用spearman相關(guān)性分析方法分析了稽留流產(chǎn)的絨毛組織中GRIM-19mRNA與它們的mRNA表達(dá)的相關(guān)性。體外實(shí)驗(yàn)：采用GRIM-19-siRNA轉(zhuǎn)染技術(shù)使HTR-8/SVneo細(xì)胞GRIM-19低表達(dá),應(yīng)用熒光探針JC-1測定轉(zhuǎn)染后細(xì)胞線粒體跨膜電位,AnnexinV/PI雙染法檢測細(xì)胞凋亡率,并用ELSA的方法測定轉(zhuǎn)染后HTR-8/SVneo細(xì)胞培養(yǎng)液中VEGF的表達(dá)變化。 結(jié)果 1. GRIM-19主要表達(dá)于絨毛細(xì)胞滋養(yǎng)層細(xì)胞、合體滋養(yǎng)層細(xì)胞和絨毛外細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞柱的細(xì)胞質(zhì)中。且與對照組相比稽留流產(chǎn)組絨毛中GRIM-19蛋白和mRNA的表達(dá)量降低(P0.01)。 2.原位末端標(biāo)記技術(shù)(TUNEL)方法顯示胚胎停育組絨毛組織中細(xì)胞凋亡數(shù)量顯著高于對照組。 3.P53主要表達(dá)于兩組絨毛細(xì)胞的細(xì)胞滋養(yǎng)層細(xì)胞、合體滋養(yǎng)層細(xì)胞和絨毛外細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞柱的細(xì)胞核中,但稽留流產(chǎn)組的合體滋養(yǎng)層細(xì)胞和絨毛外細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞柱的細(xì)胞的陽性表達(dá)率顯著高于對照組(P0.01),而細(xì)胞滋養(yǎng)層中無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p=0.458)�；袅鳟a(chǎn)組P53蛋白和mRNA的表達(dá)量較對照組顯著升高(P0.01)�；袅鳟a(chǎn)組絨毛組織中GRIM-19和P53的mRNA的表達(dá)量呈顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.37,p=0.028) 4. GRIM-19-siRNA轉(zhuǎn)染后HTR-8/SVneo細(xì)胞線粒體膜電位顯著下降,細(xì)胞凋亡率顯著增加。且兩者呈顯著的負(fù)相關(guān)性(r=-0.754,P0.01)。 5.稽留流產(chǎn)組微血管密度(MVD)顯著低于對照組(P0.01)。 6. STAT3、HIF-1α和VEGF均主要表達(dá)于絨毛細(xì)胞滋養(yǎng)層細(xì)胞、合體滋養(yǎng)層細(xì)胞和絨毛外細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞柱的細(xì)胞質(zhì)中；對照組中VEGF在細(xì)胞滋養(yǎng)層呈強(qiáng)表達(dá),而在稽留流產(chǎn)組的細(xì)胞滋養(yǎng)層細(xì)胞中的表達(dá)顯著降低。STAT3與HIF-1α的蛋白和mRNA的表達(dá)量稽留流產(chǎn)組較對照組顯著升高(P0.01,P0.05),而VEGF稽留流產(chǎn)組較對照組顯著降低(P0.05)�；袅鳟a(chǎn)組GRIM-19和STAT3的mRNA的表達(dá)量呈顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.21,P=0.009),和HIF-1α也顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.49,P=0.003),而與VEGF呈顯著正相關(guān)(r=0.56,P=0.01)。 7. GRIM-19轉(zhuǎn)染HTR-8/SVneo細(xì)胞后48小時(shí)的細(xì)胞培養(yǎng)液中VEGF的分泌量減少(P0.05),轉(zhuǎn)染后72小時(shí)顯著減少(P0.01)。 結(jié)論 GRIM-19在早期妊娠中起重要作用,而GRIM-19的低表達(dá)可能通過線粒體介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡和減少新生血管生成導(dǎo)致的稽留流產(chǎn)的發(fā)生。
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【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R714.21

【參考文獻(xiàn)】

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1 龔龍波;羅學(xué)來;劉雙又;陶德定;龔建平;胡俊波;;GRIM-19及其靶基因產(chǎn)物STAT3與結(jié)直腸癌惡性程度的關(guān)系[J];癌癥;2007年07期

2 劉瑜;陳曉蘭;葉丹捷;陳小蔓;黃蓉;江洪濤;吳文苑;鄭黛霓;;精子成熟障礙對孕早期自發(fā)性流產(chǎn)與胚胎停育的影響[J];生殖與避孕;2011年08期

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本文編號(hào)：2379226