【摘要】：目的 通過檢測GRIM-19在稽留流產與正常早孕患者絨毛組織中的表達情況,探討GRIM-19表達差異與稽留流產發(fā)生的相關性。探究稽留流產患者絨毛組織中細胞凋亡情況與微血管密度變化,進而通過體內體外實驗研究GRIM-19表達變化對線粒體膜電位和細胞凋亡以及血管生成的影響,進一步研究GRIM-19的差異性表達引起稽留流產的機制。 方法 體內實驗：選擇胚胎停育患者50例為實驗組,正常早孕患者50例為對照組。用免疫組化法對絨毛組織中GRIM-19進行定位檢測；采用Western blot和Real-time PCR檢測絨毛組織中GRIM-19蛋白和mRNA水平。采用原位末端標記技術(TUNEL)評估兩組絨毛組織中的細胞凋亡情況,通過比較CD34在兩組絨毛組織中的表達差異分析微血管密度(MVD)變化。同時檢測P53、STAT3、HIF-1α和VEGF在絨毛組織中的表達及定位,并用spearman相關性分析方法分析了稽留流產的絨毛組織中GRIM-19mRNA與它們的mRNA表達的相關性。體外實驗：采用GRIM-19-siRNA轉染技術使HTR-8/SVneo細胞GRIM-19低表達,應用熒光探針JC-1測定轉染后細胞線粒體跨膜電位,AnnexinV/PI雙染法檢測細胞凋亡率,并用ELSA的方法測定轉染后HTR-8/SVneo細胞培養(yǎng)液中VEGF的表達變化。 結果 1. GRIM-19主要表達于絨毛細胞滋養(yǎng)層細胞、合體滋養(yǎng)層細胞和絨毛外細胞滋養(yǎng)細胞柱的細胞質中。且與對照組相比稽留流產組絨毛中GRIM-19蛋白和mRNA的表達量降低(P0.01)。 2.原位末端標記技術(TUNEL)方法顯示胚胎停育組絨毛組織中細胞凋亡數(shù)量顯著高于對照組。 3.P53主要表達于兩組絨毛細胞的細胞滋養(yǎng)層細胞、合體滋養(yǎng)層細胞和絨毛外細胞滋養(yǎng)細胞柱的細胞核中,但稽留流產組的合體滋養(yǎng)層細胞和絨毛外細胞滋養(yǎng)細胞柱的細胞的陽性表達率顯著高于對照組(P0.01),而細胞滋養(yǎng)層中無統(tǒng)計學差異(p=0.458)。稽留流產組P53蛋白和mRNA的表達量較對照組顯著升高(P0.01)�；袅鳟a組絨毛組織中GRIM-19和P53的mRNA的表達量呈顯著負相關(r=-0.37,p=0.028) 4. GRIM-19-siRNA轉染后HTR-8/SVneo細胞線粒體膜電位顯著下降,細胞凋亡率顯著增加。且兩者呈顯著的負相關性(r=-0.754,P0.01)。 5.稽留流產組微血管密度(MVD)顯著低于對照組(P0.01)。 6. STAT3、HIF-1α和VEGF均主要表達于絨毛細胞滋養(yǎng)層細胞、合體滋養(yǎng)層細胞和絨毛外細胞滋養(yǎng)細胞柱的細胞質中；對照組中VEGF在細胞滋養(yǎng)層呈強表達,而在稽留流產組的細胞滋養(yǎng)層細胞中的表達顯著降低。STAT3與HIF-1α的蛋白和mRNA的表達量稽留流產組較對照組顯著升高(P0.01,P0.05),而VEGF稽留流產組較對照組顯著降低(P0.05)�；袅鳟a組GRIM-19和STAT3的mRNA的表達量呈顯著負相關(r=-0.21,P=0.009),和HIF-1α也顯著負相關(r=-0.49,P=0.003),而與VEGF呈顯著正相關(r=0.56,P=0.01)。 7. GRIM-19轉染HTR-8/SVneo細胞后48小時的細胞培養(yǎng)液中VEGF的分泌量減少(P0.05),轉染后72小時顯著減少(P0.01)。 結論 GRIM-19在早期妊娠中起重要作用,而GRIM-19的低表達可能通過線粒體介導的細胞凋亡和減少新生血管生成導致的稽留流產的發(fā)生。
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【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R714.21

【參考文獻】

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1 龔龍波;羅學來;劉雙又;陶德定;龔建平;胡俊波;;GRIM-19及其靶基因產物STAT3與結直腸癌惡性程度的關系[J];癌癥;2007年07期

2 劉瑜;陳曉蘭;葉丹捷;陳小蔓;黃蓉;江洪濤;吳文苑;鄭黛霓;;精子成熟障礙對孕早期自發(fā)性流產與胚胎停育的影響[J];生殖與避孕;2011年08期

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