【摘要】：目的：探討子宮內(nèi)膜異位癥（Endometriosis,EMT）患者在位和異位子宮內(nèi)膜細(xì)胞中miR-183的表達(dá)差異，探究miR-183可能的靶基因，篩選特定靶基因進(jìn)行初步驗(yàn)證，深入分析miR-183及其靶基因調(diào)控子宮內(nèi)膜細(xì)胞失巢凋亡的分子機(jī)制，以期進(jìn)一步揭示子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)病機(jī)理。 方法:①收集新鮮未經(jīng)治療的EMT患者在位子宮內(nèi)膜組織和異位病灶及無EMT患者的子宮內(nèi)膜作為對照組織標(biāo)本；②采用蘇木素-伊紅染色（HE染色）對實(shí)驗(yàn)組（31例EMT在位內(nèi)膜以和異位病灶）和對照組（32例無子宮內(nèi)膜異位癥患者的子宮內(nèi)膜）進(jìn)行形態(tài)學(xué)研究，TUNEL染色和線粒體活性氧檢測檢測組織標(biāo)本細(xì)胞凋亡情況，并比較分析組間凋亡指數(shù)（apoptosis index，AI）；③采用Real time PCR檢測兩組內(nèi)膜標(biāo)本中miR-183的表達(dá)情況，并分析組間表達(dá)差異；④利用生物信息學(xué)技術(shù)，聯(lián)合TargetScans，miRanda，PicTar三個數(shù)據(jù)庫預(yù)測miR-183的靶基因，選擇靶基因EGR1進(jìn)行初步驗(yàn)證，，采用Real time PCR法檢測兩組標(biāo)本中miR-183靶基因EGR1的表達(dá)情況。 結(jié)果:①TUNEL染色結(jié)果：EMT組異位病灶組織細(xì)胞AI低于在位子宮內(nèi)膜和對照組子宮內(nèi)膜，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p 0.05）；EMT組在位子宮內(nèi)膜組織細(xì)胞的AI與對照組子宮內(nèi)膜的AI差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p0.05）；②線粒體活性氧族檢測結(jié)果：EMT異位病灶組織線粒體的熒光強(qiáng)度達(dá)低于EMT在位內(nèi)膜和對照組內(nèi)膜，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)；③miR-183在EMT組的異位病灶的表達(dá)低于在位和對照組子宮內(nèi)膜，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p0.05）；miR-183在EMT患者在位子宮內(nèi)膜與對照組子宮內(nèi)膜的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p0.05）；④靶基因EGR1在EMT組異位病灶表達(dá)高于EMT組在位內(nèi)膜和對照組子宮內(nèi)膜，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p0.05）；靶基因EGR1在EMT組在位子宮內(nèi)膜與對照組子宮內(nèi)膜的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p0.05）。 結(jié)論：EMT患者異位病灶組織細(xì)胞的miR-183表達(dá)顯著下調(diào)，在位內(nèi)膜組織細(xì)胞miR-183的表達(dá)無顯著變化，并且異位病灶組織細(xì)胞的靶基因EGR1表達(dá)顯著上調(diào)，這說明失巢后的病灶組織細(xì)胞削弱了其對靶基因EGR1的負(fù)性調(diào)控作用，導(dǎo)致EGR1在EMT異位病灶組織細(xì)胞表達(dá)上調(diào)，進(jìn)而誘發(fā)失巢的子宮內(nèi)膜細(xì)胞產(chǎn)生抵抗失巢凋亡的能力，使子宮內(nèi)膜細(xì)胞在盆腔內(nèi)種植，并形成相應(yīng)病灶，引發(fā)一系列臨床癥狀。
[Abstract]:Objective: to investigate the difference of miR-183 expression between eutopic and ectopic endometrial cells in patients with endometriosis (Endometriosis,EMT), explore the possible target genes of miR-183, and screen specific target genes for preliminary verification. To analyze the molecular mechanism of miR-183 and its target gene regulating endometrial cell apoptosis in order to reveal the pathogenesis of endometriosis. Methods: 1 the eutopic endometrium and ectopic endometrium of EMT patients and the endometrium without EMT were collected as control tissues. 2Morphology was studied by hematoxylin eosin staining (HE staining) in the experimental group (31 patients with eutopic endometrium and ectopic lesions of EMT) and in the control group (32 patients without endometriosis). TUNEL staining and mitochondrial reactive oxygen species (Ros) were used to detect the apoptosis of tissue samples and to compare the apoptotic index (apoptosis index,AI) between the two groups. 3The expression of miR-183 was detected by Real time PCR, and the difference between the two groups was analyzed. 4 the target gene of miR-183 was predicted by bioinformatics combined with three databases of TargetScans,miRanda,PicTar, and the target gene EGR1 was selected for preliminary verification. The expression of miR-183 target gene EGR1 was detected by Real time PCR method in two groups of samples. Results: the results of 1TUNEL staining showed that the AI of ectopic focus tissue cells in EMT group was lower than that in eutopic endometrium and control group (p0.05). There was no significant difference in AI between EMT group and control group (p0.05). 2 the results of reactive oxygen species in mitochondria: the fluorescence intensity of mitochondria in the ectopic lesion of EMT was lower than that in the eutopic endometrium of EMT and that in the control group (p0.05). The expression of 3miR-183 in ectopic lesions in EMT group was significantly lower than that in eutopic endometrium and control group (p0. 05). There was no significant difference in the expression of miR-183 between the eutopic endometrium of EMT patients and the control group (p0.05). 4the expression of target gene EGR1 in ectopic focus of EMT group was higher than that in eutopic endometrium of EMT group and control group (p0.05). There was no significant difference in the expression of target gene EGR1 between the eutopic endometrium of EMT group and the control group (p0.05). Conclusion: the expression of miR-183 in ectopic tissue cells of EMT patients was significantly down-regulated, while the expression of miR-183 in eutopic endometrial tissues was not significantly changed, and the expression of target gene EGR1 was significantly up-regulated in ectopic lesion tissue cells. These results suggest that the negative regulation of target gene EGR1 is weakened by the loss of nesting tissue cells, which leads to the up-regulation of EGR1 expression in EMT ectopic tissue cells, which in turn induces the ability of endometrial cells losing their nests to resist apoptosis. The endometrial cells were implanted in the pelvis and the corresponding lesions were formed, causing a series of clinical symptoms.
【學(xué)位授予單位】：廣州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R711.71

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本文編號：2376763