【摘要】：目的提出一種可快速檢測宮頸癌標(biāo)志物P16INK4A的方法。方法構(gòu)建重組質(zhì)粒P16INK4A-pET28a,在大腸埃希菌中表達(dá)P16INK4A,利用親和層析純化,Western blot法驗(yàn)證。以純化的重組蛋白作靶標(biāo),利用指數(shù)級富集配體的系統(tǒng)進(jìn)化技術(shù)(SELEX)篩選其特異性適配體,通過分析其親和力最終選出一條高親和力、高特異性的適配體。枸櫞酸鈉還原法制備13nm納米金顆粒并表征。建立基于免標(biāo)記納米金和適配體的分析方法,并對其進(jìn)行方法學(xué)的考察。結(jié)果成功表達(dá)并純化了P16INK4A蛋白,篩選出一條抗重組P16INK4A的高親和力、高特異性的適配體,利用該適配體和免標(biāo)記的納米金建立了一種可快速檢測宮頸癌標(biāo)志物P16INK4A的分析方法。結(jié)論該方法具有較好的準(zhǔn)確度和精密度,有望顯著提高早期宮頸癌的檢出率。
[Abstract]:Objective to develop a method for rapid detection of cervical cancer marker P16INK4A. Methods Recombinant plasmid P16INK4A-pET28awas constructed and expressed in Escherichia coli. The recombinant plasmid P16INK4A was purified by affinity chromatography (, Western blot). The purified recombinant protein was used as the target, and its specific aptamer was screened by the systematic evolution technique of exponential enrichment ligand (SELEX), and a high affinity and high specificity aptamer was selected by analyzing its affinity. 13nm nanoparticles were prepared by sodium citrate reduction method and characterized. An analysis method based on non-labeled nano-gold and aptamer was established and investigated. Results P16INK4A protein was successfully expressed and purified, and a high affinity and specificity aptamer of anti-recombinant P16INK4A was screened out. A rapid detection method for cervical cancer marker P16INK4A was established by using this aptamer and non-labeled nano-gold. Conclusion this method has good accuracy and precision, and can improve the detection rate of early cervical cancer.
【作者單位】： 武漢市醫(yī)療救治中心;華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)系;
【基金】：湖北省科技廳資助項(xiàng)目(No.2011GIA051)
【分類號】：R737.33

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本文編號：2331088