【摘要】：自然狀態(tài)(非人為目的)發(fā)生的流產(chǎn)稱為自然流產(chǎn)。在所有臨床確認(rèn)的妊娠中,自然流產(chǎn)的發(fā)生率大約為15%。早期流產(chǎn)是指發(fā)生在12周以前的流產(chǎn),而妊娠12周至不足28周的流產(chǎn)定義為晚期流產(chǎn)。microRNAs (miRNAs)是一種內(nèi)源性非編碼小RNA,以完全或非完全互補(bǔ)的方式與其靶mRNA相結(jié)合,通過影響靶基因轉(zhuǎn)錄或翻譯來調(diào)控細(xì)胞發(fā)育、分化、增殖、凋亡及疾病的發(fā)生發(fā)展等。研究表明,在正常妊娠胎盤、絨毛和正常子宮內(nèi)膜中,一些miRNA差異表達(dá),并與相關(guān)基因存在一定的靶向作用,提示自然流產(chǎn)的發(fā)生可能與miRNA的表達(dá)有一定的關(guān)系。但以往研究檢測的miRNA數(shù)量有限,有關(guān)miRNA在人自然流產(chǎn)和早孕蛻膜中具體表達(dá)豐度報道較少。因此深入研究miRN A在自然流產(chǎn)和早孕蛻膜中的表達(dá)和功能,可以為研究自然流產(chǎn)的發(fā)病機(jī)理提供新的線索。研究目的：1.分析miRNA在自然流產(chǎn)和早孕蛻膜中的表達(dá)差異,篩選并驗證表達(dá)差異顯著的1niRNA,進(jìn)一步預(yù)測候選miRNA對應(yīng)的靶基因：2.檢測候選靶基因在流產(chǎn)及早孕蛻膜中的表達(dá)及意義；3.體外驗證miRNA-199b-5p 和 SGK1在維持妊娠中的靶向關(guān)系和作用；4.動物實驗評價miRNA-199b-5p在妊娠維持中可能的調(diào)控作用,探討mi] RNA在自然流產(chǎn)中的作用。研究方法：1.運(yùn)用miRNAs測序技術(shù),篩選在自然流產(chǎn)和早孕蛻膜中的差異表達(dá)miRNA,發(fā)現(xiàn)流產(chǎn)蛻膜中一系列上調(diào)和下調(diào)的miRNA。2. microRNA檢測和鑒定：選取10 個 miRNA,利用實時熒光定量RT-PCR (Real-time PCR)驗證miRNA在流產(chǎn)蛻膜(流產(chǎn)組)及早期妊娠蛻膜(早孕組)中的表達(dá)水平。3.結(jié)合以往研究中與早期妊娠維持關(guān)系密切的基因,利用預(yù)測軟件對實驗中出現(xiàn)明顯差異表達(dá)的microRNA進(jìn)行靶基因預(yù)測,并在體內(nèi)檢測靶基因的表達(dá)。4. microRNA的功能鑒定：在體外水平過表達(dá)或敲減1niR-199b-5p,檢測靶基因表達(dá)變化,制備過表達(dá)miR-199b-5p的轉(zhuǎn)基因小鼠模型,利用RT-PCR與免疫印跡(Western blot)技術(shù)驗證靶基因的表達(dá)水平。研究結(jié)果：1.測序比較了1921條已知miRNA并發(fā)現(xiàn)123條新miRNA,與正常早孕蛻膜相比,流產(chǎn)蛻膜有37個差異表達(dá)的miRNA,其中20個miRNA在流產(chǎn)蛻膜組織中表達(dá)升高,17個miRNA表達(dá)下降。在流產(chǎn)蛻膜三個表達(dá)量最高的miRNA 是 miR-let-7a-5p、miR-let-7f-5p和miR-let-7b-5p,分別占全部miRNA的25.63%、21.99%和17.82%。2.選取表達(dá)量前10個差異miRNA,應(yīng)用RT-PCR在流產(chǎn)蛻膜與正常早孕蛻膜中進(jìn)行驗證,其中7個miRNA與測序結(jié)果相符：1et-7a-5p、 let-7f-5p、let-7g-5p、let-7e-5p、let-7d-5p 和 miR-98-5p在流產(chǎn)蛻膜中表達(dá)下降(P0.05)。miR-199b-5p在流產(chǎn)蛻膜中表達(dá)升高(P0.05)。3.用生物信息學(xué)方法對差異miRNA進(jìn)行分析,預(yù)測出108787個靶基因。通過靶基因評分以及靶基因功能注釋,選擇miRNAs可能對應(yīng)的蛻膜化相關(guān)的靶基因進(jìn)行功能性分析。根據(jù)靶基因預(yù)測結(jié)果,選取血清和糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)蛋白激酶1(Serum-and-glucocorticoid-regulated kinase-1, SGK-1)、胰島素樣生長因子-Ⅱ受體(Ⅰnsulin growth factor 2 receptor, IGF2R)、基質(zhì)金屬蛋白酶10(Matrix metalloproteinase 10, MMP10)和瘦素受體(Leptin Receptor, LEPR)和作為候選靶基因,利用RT-PCR和免疫組化技術(shù)驗證其在流產(chǎn)蛻膜和正常早期妊娠蛻膜中的表達(dá)。SGK1、 MMP10和LEPR在流產(chǎn)蛻膜表達(dá)減低,IGF2R在流產(chǎn)蛻膜表達(dá)增加。4.將miR-199b-5p模擬物轉(zhuǎn)染293T和Ishikawa細(xì)胞,RT-PCR和Western blot結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染后SGK1 mRN A和蛋白水平降低(P0.05)。在293T和Ishikawa細(xì)胞中轉(zhuǎn)染miR-199b-5p抑制劑后SGK1 mRNA和蛋白水平增加(P0.05),在hESC (human endometrial stromal cells)中轉(zhuǎn)染miR-199b-5p'慢病毒抑制載體后同樣發(fā)現(xiàn)SGK1 mRNA和蛋白表達(dá)升高。5.在過表達(dá)miR-199b-5p轉(zhuǎn)基因小鼠子宮組織中,SGK1 mRNA和蛋白水平降低(P0.05)。結(jié)論1.早孕蛻膜中特異表達(dá)的miRNA可能參與了子宮內(nèi)膜蛻膜化以及早期妊娠的維持。自然流產(chǎn)蛻膜組織中存在一些表達(dá)失衡的miRNA,這些異常表達(dá)的miRNA可能與自然流產(chǎn)的發(fā)生有關(guān)。2.通過對差異miRNA的GO和KEGG分析,捕獲了大量蛻膜化相關(guān)的靶基因,并分析出可能與之相關(guān)聯(lián)的細(xì)胞信號通路,有望通過靶基因的研究揭示差異miRNA的調(diào)控機(jī)制。3.體內(nèi)外實驗結(jié)果顯示niR-199b-5p與SGK1的表達(dá)有反向調(diào)控關(guān)系,miR-199b-5p有可能通過調(diào)控SGK1影響早期妊娠維持。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R714.21

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 高玲;劉延;喇端端;;米非司酮對人絨毛和蛻膜內(nèi)纖維粘連蛋白表達(dá)的影響[J];上海交通大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2009年06期

2 劉江波;;卵巢漿膜下組織蛻膜樣變1例[J];首都醫(yī)學(xué)院學(xué)報;1990年01期

3 蔡春友;高乃莊;;蛻膜NK細(xì)胞與滋養(yǎng)層細(xì)胞[J];國外醫(yī)學(xué).婦產(chǎn)科學(xué)分冊;1992年01期

4 張煈,劉楠,聞良珍;巨細(xì)胞病毒感染對人早孕絨毛及蛻膜組織的內(nèi)分泌影響[J];中國婦幼保健;2005年08期

5 劉芳;于俊榮;樊瑞芹;劉效群;齊惠敏;;利洛司酮對人早孕絨毛蛻膜分泌功能的影響[J];中國計劃生育學(xué)雜志;2006年03期

6 陳倩;譚彬;王應(yīng)雄;黎剛;胡建剛;余秋波;;自然流產(chǎn)患者蛻膜組織疾病特異蛋白的初步篩選與鑒定[J];重慶醫(yī)學(xué);2010年21期

7 王琳,史常旭,俞熾陽;白血病抑制因子在早孕蛻膜組織中的表達(dá)[J];中華婦產(chǎn)科雜志;2000年04期

8 王越,屈野,毛立群,陳曉;Th1型/Th2型細(xì)胞因子對人孕早期蛻膜的免疫調(diào)節(jié)作用[J];現(xiàn)代婦產(chǎn)科進(jìn)展;2003年01期

9 鄒冰玉,謝蘭,陳廉,楊年;血管內(nèi)皮生長因子在妊娠高血壓綜合征患者胎盤和蛻膜組織中的表達(dá)[J];四川醫(yī)學(xué);2004年08期

10 杜冀暉;許欣宜;;原因不明復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者蛻膜NK細(xì)胞亞群特征研究[J];國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志;2012年23期

相關(guān)會議論文 前10條

1 侯倩;曾耀英;王自能;;非孕與早孕婦女外周血、宮內(nèi)膜和蛻膜組織自然殺傷細(xì)胞亞群的變化[A];第一屆中華醫(yī)學(xué)會生殖醫(yī)學(xué)分會、中國動物學(xué)會生殖生物學(xué)分會聯(lián)合年會論文匯編[C];2007年

2 黃薇;李國華;夏慶杰;楊開選;劉堯芳;朱慧莉;;子宮自然殺傷細(xì)胞在人類再孕蛻膜血管生成中作用研究[A];第一屆中華醫(yī)學(xué)會生殖醫(yī)學(xué)分會、中國動物學(xué)會生殖生物學(xué)分會聯(lián)合年會論文匯編[C];2007年

3 肖云山;孫麗洲;林其德;;MACS法分選早孕期外周血和蛻膜組織單核巨噬細(xì)胞[A];第三屆長三角圍產(chǎn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)論壇暨2006年浙江省圍產(chǎn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2006年

4 張鈺;李俊霞;顧艷;李奕;;米非司酮對早孕絨毛和蛻膜組織趨化因子表達(dá)的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會第八次全國計劃生育學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2012年

5 劉紋琰;劉延;劉曉璦;;早孕藥物流產(chǎn)絨毛和蛻膜組織的TGF-β表達(dá)[A];首屆滬浙婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)論壇暨2006年浙江省婦產(chǎn)科學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2006年

6 王群華;凌斌;趙衛(wèi)東;祝懷平;陳綱;陳柯;胡文;朱園園;陳敏;;人蛻膜與臍血單個核細(xì)胞聯(lián)合移植建立NOD-SCID鼠EM模型[A];第八次全國婦產(chǎn)科學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2004年

7 樊偉;李尚為;;轉(zhuǎn)錄因子FoxO1在正常月經(jīng)周期子宮內(nèi)膜及早孕蛻膜中的表達(dá)[A];第二屆全國不育癥研討會論文匯編[C];2007年

8 王群華;凌斌;趙衛(wèi)東;祝懷平;陳綱;陳柯;胡文;朱園園;陳敏;;人蛻膜與臍血單個核細(xì)胞聯(lián)合移植建立NOD-SCID鼠EM模型[A];第八次全國婦產(chǎn)科學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2004年

9 侯磊;李大金;朱穎;王明雁;;子癇前期患者蛻膜免疫細(xì)胞組成及其趨化因子受體表達(dá)[A];中國免疫學(xué)會第五屆全國代表大會暨學(xué)術(shù)會議論文摘要[C];2006年

10 李仁良;陳育梅;吳余敏;夏淑琦;;白血病抑制因子在米非司酮流產(chǎn)婦女蛻膜組織中的表達(dá)研究[A];2012年浙江省婦產(chǎn)科學(xué)及圍產(chǎn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會暨《婦產(chǎn)科常見疾病規(guī)范化治療新進(jìn)展》及《圍產(chǎn)醫(yī)學(xué)熱點追蹤》學(xué)習(xí)班論文集[C];2012年

相關(guān)重要報紙文章 前1條

1 主任醫(yī)師 周蓓蓓;藥流后為何流血不止[N];保健時報;2006年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前7條

1 姚強(qiáng);妊娠肝內(nèi)膽汁淤積癥患者蛻膜功能的初步研究[D];四川大學(xué);2004年

2 余秋波;早期自然流產(chǎn)蛻膜組織基因表達(dá)譜和蛋白質(zhì)組研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2007年

3 樊偉;轉(zhuǎn)錄因子FoxO1在正常月經(jīng)周期子宮內(nèi)膜及早孕蛻膜中的表達(dá)，，及其調(diào)節(jié)機(jī)制的研究[D];四川大學(xué);2007年

4 王煜;microRNA在流產(chǎn)及早孕蛻膜組織中的表達(dá)及miR-199的功能鑒定[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2015年

5 傅斌清;NK細(xì)胞發(fā)育及蛻膜NK細(xì)胞在胚胎耐受中的功能[D];中國科學(xué)技術(shù)大學(xué);2011年

6 黃煜;趨化因子CXCL16/CXCR6在人早孕期母—胎界面的表達(dá)及調(diào)控作用[D];復(fù)旦大學(xué);2006年

7 班艷麗;妊娠早期母胎界面IDO表達(dá)對蛻膜NK細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞的影響[D];山東大學(xué);2008年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 賀笑茜;妊娠高血壓綜合征患者外周血及蛻膜組織細(xì)胞粘附分子表達(dá)的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2004年

2 劉文萃;妊娠高血壓綜合征患者外周血及蛻膜局部誘生細(xì)胞因子活性變化的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2004年

3 郭麗娜;妊娠高血壓綜合征患者蛻膜粘附分子表達(dá)的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2003年

4 石永云;人類蛻膜NK細(xì)胞特性研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2007年

5 張寧寧;正常孕期蛻膜NK樣細(xì)胞特征性分化抗原及殺傷功能變化的動態(tài)研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2010年

6 徐向榮;胰島素樣生長因子-Ⅱ在人早孕期絨毛和蛻膜中的表達(dá)[D];浙江大學(xué);2001年

7 陳成;WNT4/WNT5A在子癇前期患者蛻膜中的表達(dá)及功能研究[D];山東師范大學(xué);2015年

8 李紅梅;妊娠早期絨毛和蛻膜組織差異蛋白質(zhì)組分析[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2007年

9 董楓;妊娠早期不明原因自然流產(chǎn)患者絨毛及蛻膜組織血管增殖及細(xì)胞凋亡的研究[D];河北聯(lián)合大學(xué);2011年

10 肖敏;妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥患者蛻膜及外周血中NK細(xì)胞生物學(xué)特性的研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2008年

本文編號：2296589