【摘要】：宮頸癌是世界上女性最常見的三大惡性腫瘤之一，發(fā)展中國家女性第二大死亡原因。全球范圍內(nèi)每年大約有53萬的新發(fā)病例及27.5萬的死亡病例。我國每年有約13.7萬左右新發(fā)病例，約占世界宮頸癌發(fā)病率的1/5。復發(fā)病例約占35%，復發(fā)于首次發(fā)病3年內(nèi)的占90%。近年來發(fā)病率不斷上升，且呈現(xiàn)年輕化趨勢。目前認為，高危型人乳頭瘤樣病毒是宮頸癌發(fā)生的最主要因素。 近幾十年由于宮頸癌篩查的廣泛開展，使許多宮頸癌得以早期發(fā)現(xiàn)和及時治療，治療方法有手術、放療、化療等綜合治療方案。早期宮頸癌的5年生存率約90%以上，但晚期和復發(fā)性宮頸癌的5年生存率僅為3.2%-13%，中國每年約2-3萬婦女死于宮頸癌。晚期和復發(fā)患者生存率低的原因在于宮頸癌的常規(guī)治療手段雖能殺滅大部分腫瘤細胞，但卻無法根除耐藥的腫瘤干細胞，而成為腫瘤復發(fā)的根源。 腫瘤組織中的腫瘤細胞是一個異質(zhì)性的群體。其中腫瘤干細胞是腫瘤組織中少量具有自我更新、分化潛能、侵襲、轉(zhuǎn)移能力的干細胞樣細胞。腫瘤干細胞往往在藥物治療時處于休眠狀態(tài)，在藥物治療后繼續(xù)產(chǎn)生新的腫瘤細胞，導致癌癥復發(fā)。因而，如何通過特異性標志物來鑒定腫瘤干細胞具有重要科學意義。 LGR5是近年新發(fā)現(xiàn)的腫瘤干細胞標志物，LGR5信號能抑制腫瘤細胞凋亡、促進細胞增殖，與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有密切關系。LGR5一度被認為是孤兒受體，新近發(fā)現(xiàn)，R-spondin可作為配體與之結(jié)合，進而激活Wnt信號通路，調(diào)節(jié)干細胞分化發(fā)育和腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程。 本文通過組織芯片和免疫組化法檢測LGR5在宮頸癌組織中的表達，進而檢測LGR5在宮頸癌細胞系中的表達，并以LGR5+SiHa細胞株為模型，探討了R-spondin1/LGR5信號對SiHa細胞增殖、細胞周期、細胞因子產(chǎn)生以及裸鼠體內(nèi)成瘤的影響，闡述了LGR5分子在宮頸癌組織中的表達規(guī)律以及對宮頸癌腫瘤細胞生物學行為的影響，這有助于靶向腫瘤干細胞進行宮頸癌的診斷和治療。 一、LGR5分子在宮頸癌組織中的表達情況 【目的】檢測人宮頸癌組織及癌旁組織中LGR5分子的表達，分析其表達與宮頸癌臨床病理因素的關系。 【方法】采用組織芯片和免疫組化法，對宮頸癌、癌旁鱗狀上皮組織中LGR5表達進行檢測評分和統(tǒng)計學分析，，探討LGR5在宮頸癌中表達規(guī)律及臨床意義。 【結(jié)果】LGR5的表達在宮頸癌、癌旁組織中鱗狀上皮有顯著性差異，在宮頸癌中呈高表達且隨著病理級別的增加表達逐漸增強，與病理分級密切相關。 【結(jié)論】LGR5在宮頸鱗狀上皮癌組織中異常高表達，與腫瘤的惡性程度密切相關。有望為宮頸癌的檢測和治療提供新思路。 二、R-spondin1/LGR5信號對宮頸癌細胞株SiHa生物學行為的影響 【目的】研究R-spondin1/LGR5信號對宮頸癌細胞株SiHa體外增殖、細胞因子產(chǎn)生和裸鼠體內(nèi)成瘤等生物學行為的影響。 【方法】采用FCM檢測SiHa細胞膜LGR5的表達；采用細胞計數(shù)和FCM法檢測R-spondin1/LGR5信號對SiHa細胞增殖和細胞周期的影響；ICC法檢測SiHa細胞內(nèi)IL-6、TGF-β的產(chǎn)生；采用裸鼠成瘤實驗驗證R-spondin1/LGR5信號對SiHa細胞裸鼠體內(nèi)成瘤及腫瘤生長的影響。 【結(jié)果】①FCM顯示SiHa細胞高表達LGR5分子。②細胞增殖實驗結(jié)果證實R-spondin1/LGR5信號能促進SiHa細胞體外增殖。③細胞周期檢測結(jié)果提示R-spondin1/LGR5信號刺激可增加SiHa細胞S期細胞比例，減少G1/G0期細胞比例。④細胞內(nèi)染色結(jié)果顯示R-spondin1/LGR5信號能刺激促進SiHa細胞IL-6產(chǎn)生，效應呈劑量依賴性，但不影響SiHa細胞TGF-β合成。⑤裸鼠體內(nèi)成瘤實驗顯示：與對照組相比，R-spondin1處理組宮頸癌細胞株SiHa在裸鼠體內(nèi)成瘤時間短、成瘤數(shù)量多、腫瘤生長速度快。 【結(jié)論】宮頸癌細胞株SiHa高表達LGR5分子。這提示了腫瘤干細胞表面標記分子LGR5及其信號能促進宮頸癌細胞SiHa體外增殖、IL-6產(chǎn)生和裸鼠體內(nèi)腫瘤形成等惡性生物學行為，這為靶向?qū)m頸癌干細胞生物治療提供了潛在靶點。
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【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R737.33

【共引文獻】

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本文編號：2268357