發(fā)布時(shí)間：2018-09-19 17:06

【摘要】：目的 子宮內(nèi)膜癌是女性生殖系統(tǒng)常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率逐年升高，嚴(yán)重威脅著女性的生命健康。流行病學(xué)統(tǒng)計(jì)顯示子宮內(nèi)膜癌高危人群多為肥胖，患有糖尿病，高血壓等代謝異常疾病的婦女，而糖代謝與子宮內(nèi)膜癌的關(guān)系也日益得到重視。大多數(shù)腫瘤細(xì)胞利用糖酵解代謝途徑產(chǎn)生的ATP，作為其能量提供的主要方式。靶向針對糖酵解途徑抑制腫瘤生長，日益成為治療腫瘤的新策略。Galloflavin (GF)作為新一代乳酸脫氫酶抑制劑，目前還沒有此藥物干預(yù)子宮內(nèi)膜癌的基礎(chǔ)研究。因此，本研究通過分析GF對人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株的影響，探討其作用的可能機(jī)制。 方法 MTT法觀察終濃度為0μmol/L、0.01μmol/L、0.1μmol/L、10μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、250μmol/L、500μmol/L GF分別作用于ECC-1、Ishikawa子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株72h后，檢測其對細(xì)胞增殖的抑制作用。以乳酸脫氫酶試劑盒檢測GF干預(yù)后乳酸脫氫酶的活性的變化；以乳酸定量試劑盒檢測GF干預(yù)后乳酸生成量變化；以ATP定量試劑盒檢測GF干預(yù)后ATP生成量的變化；以2-NBDG檢測GF干預(yù)后葡萄糖攝取量的變化；以DCFH-DA檢測GF干預(yù)后細(xì)胞內(nèi)活性氧物質(zhì)產(chǎn)生量(ROS)的變化；以流式細(xì)胞儀、AnnexinV/FITC標(biāo)記法檢測細(xì)胞凋亡；以蛋白印跡法分析GF對BCL-2、MCL-1,Cleaved Caspase3蛋白表達(dá)的影響。同時(shí)行Annexin V-PI染色、流式細(xì)胞儀檢測草氨酸鹽對其凋亡的影響。 結(jié)果 GF抑制Ishikawa，ECC-1細(xì)胞的增殖并且隨GF濃度增加，增殖抑制增加，呈劑量依賴性。GF處理細(xì)胞后乳酸脫氫酶的活性顯著下降，乳酸產(chǎn)生量下降，ATP產(chǎn)生量下降，葡萄糖攝取量下降�；钚匝跷镔|(zhì)產(chǎn)生量增加，Annexin V-PI染色、流式細(xì)胞儀檢測均表現(xiàn)細(xì)胞凋亡比例逐漸增高，證實(shí)了GF具有誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用；GF蛋白印跡檢測表明GF可使Cleaved Caspase3表達(dá)升高, BCL-2和MCL-1表達(dá)下降,GF對人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株的增殖有顯著的抑制作用。 結(jié)論 GF導(dǎo)致ATP的耗竭，，伴隨著細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激產(chǎn)物的增加導(dǎo)致線粒體內(nèi)凋亡機(jī)制的啟動(dòng)，最終導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞增殖受抑制。靶向針對乳酸脫氫酶治療子宮內(nèi)膜癌前景廣闊。
[Abstract]:Objective endometrial carcinoma is one of the most common malignant tumors in female reproductive system. Epidemiological statistics show that the high risk population of endometrial cancer is mostly obese, suffering from diabetes, hypertension and other metabolic disorders, and the relationship between glucose metabolism and endometrial carcinoma has been paid more and more attention. Most tumor cells use ATP, produced by glycolysis metabolic pathway as the main way of energy supply. Galloflavin (GF), as a new generation of lactate dehydrogenase inhibitor, has become a new strategy for the treatment of endometrial carcinoma, which is targeted at glycolysis pathway, and there is no basic research on the intervention of Galloflavin (GF) in endometrial carcinoma. In this study, we analyzed the effect of GF on human endometrial cancer cell line and explored its possible mechanism. Methods the inhibitory effects of 0 渭 mol/L,0.01 渭 mol/L,0.1 渭 mol/L,10 渭 mol/L,50 渭 mol/L,100 渭 mol/L,250 渭 mol/L,500 渭 mol/L GF on ECC-1,Ishikawa endometrial carcinoma cell line were observed by MTT assay. Lactate dehydrogenase activity after GF intervention was detected by lactate dehydrogenase kit, lactic acid production after GF intervention was detected by lactic acid quantitative kit, ATP production after GF intervention was detected by ATP quantitative kit. The changes of glucose uptake after GF intervention were detected by 2-NBDG, the changes of reactive oxygen species (ROS) production by GF were detected by DCFH-DA, apoptosis was detected by flow cytometry (FCM) Annexin V / FITC labeling method. The effect of GF on the expression of BCL-2,MCL-1,Cleaved Caspase3 protein was analyzed by Western blot. At the same time, Annexin V-PI staining and flow cytometry were used to detect the effect of oxalate on apoptosis. Results GF inhibited the proliferation of Ishikawa,ECC-1 cells and increased with the increase of GF concentration. In a dose-dependent manner, the activity of lactate dehydrogenase and the production of lactic acid decreased in a dose-dependent manner. Glucose intake decreased. The production of reactive oxygen species increased with Annexin V-PI staining. Flow cytometry showed that the proportion of apoptosis increased gradually, which confirmed that GF could induce apoptosis. GF Western blot analysis showed that GF increased the expression of Cleaved Caspase3 and decreased the expression of BCL-2 and MCL-1. The expression of BCL-2 and MCL-1 decreased significantly and the proliferation of human endometrial cancer cell line was inhibited significantly. Conclusion GF leads to ATP depletion, accompanied by the increase of intracellular oxidative stress products, which leads to the initiation of apoptosis mechanism in mitochondria, and ultimately leads to the inhibition of tumor cell proliferation. Targeted lactate dehydrogenase treatment of endometrial carcinoma has broad prospects.
【學(xué)位授予單位】：濟(jì)南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R737.33

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2250769