【摘要】：目的 卵巢上皮性癌是常見的女性惡性腫瘤之一，在女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤中，其死亡率也是最高的。卵巢癌患者的早期癥狀不典型，目前尚無有效的早期篩查和特異性診斷方法，超過70%的患者已是中晚期。目前標(biāo)準(zhǔn)治療方案為理想的腫瘤減滅術(shù)和以鉑類為基礎(chǔ)的化療，但近年來卵巢癌患者五年生存率僅為30%-40%左右[42]。尋找卵巢癌有效的基因治療的分子靶點是卵巢癌目前亟待解決的臨床問題。 鈣周期蛋白(Calcyclin，Cacy)屬于S100蛋白家族。文獻報道，Calcyclin在胰腺癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、肝癌、結(jié)直腸癌等多種類型的惡性腫瘤中均出現(xiàn)表達明顯增加[3,27-32]。有研究證實Calcyclin與上皮性癌發(fā)生發(fā)展相關(guān)[36,37]。還有研究表明Calcyclin高表達與胰腺癌、骨肉瘤、胃癌、肺腺癌、黑色素瘤等多種惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移和不良預(yù)后相關(guān)[28,38-40]。這些研究均提示，Calcyclin可能是腫瘤基因治療的良好候選靶點。 目前Calcyclin蛋白在卵巢上皮性癌中的表達及其臨床意義尚不清楚。本研究旨在從組織水平、血清水平統(tǒng)計分析Calcyclin蛋白表達與卵巢癌的相關(guān)性，并初步探討Calcyclin作為腫瘤基因治療的可行性。 方法 （1）本研究首先用免疫組化技術(shù)檢測60例卵巢癌病理組織標(biāo)本中Calcyclin的蛋白表達情況，統(tǒng)計分析Calcyclin與卵巢癌的發(fā)生發(fā)展的關(guān)系，探討Calcyclin與卵巢上皮性癌臨床病理因素之間的相關(guān)性； （2）用ELISA法檢測正常血清、良性卵巢腫瘤和卵巢癌患者Calcyclin血清濃度，統(tǒng)計分析Calcyclin血清濃度與卵巢癌的相關(guān)性，初步驗證Calcyclin作為檢測卵巢癌病情發(fā)展的分子標(biāo)志物的可行性； （3）我們利用RNA干擾技術(shù)特異性降低Calcyclin表達水平后，觀察卵巢癌細胞細胞周期、侵襲能力、順鉑敏感性等生物學(xué)行為的變化，探討Calcyclin作為卵巢癌靶向治療候選基因的可行性。 結(jié)果 （1）免疫組化檢測卵巢癌組織中Calcyclin表達情況，結(jié)果表明低分化的卵巢癌患者中Calcyclin高表達比例（55.0%）顯著高于高分化的卵巢癌患者中Calcyclin高表達比例（15.4%），有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)。Calcyclin表達水平與手術(shù)分期有關(guān)，隨著手術(shù)分期的增加，Calcyclin表達水平也隨之明顯上升，有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)。在出現(xiàn)腹水和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的卵巢癌患者中，Calcyclin高表達的比例明顯增加，有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.001)。 （2）ELISA法檢測Calcyclin血清濃度，結(jié)果表明卵巢癌患者Calcyclin血清平均濃度為1242.47+178.17pg/ml，顯著高于正常血清（489.73+37.86pg/ml）和良性卵巢腫瘤（700.75+43.14pg/ml），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.01）。然后我們統(tǒng)計分析了不同手術(shù)分期和細胞學(xué)分級的卵巢癌患者Calcyclin血清濃度。結(jié)果顯示Ⅲ期、Ⅳ期卵巢癌患者Calcyclin血清濃度分別為644.79+67.89pg/ml和1087.44+104.66pg/ml，顯著高于Ⅰ期、Ⅱ期卵巢癌患者（359.35+37.82pg/ml和499.44+42.56pg/ml），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.001）。同時我們還發(fā)現(xiàn)低分化的卵巢癌患者Calcyclin血清濃度顯著升高，為1320.08+102.59pg/ml，與高分化（573.58+37.28pg/ml）和中分化（832.91+75.62pg/ml）相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）。 （3）利用RNA干擾技術(shù)特異性降低Calcyclin表達水平后，細胞周期檢測結(jié)果表明，Calcyclin表達降低后A2780細胞出現(xiàn)了G0/G1期比例升高，，S期比例降低。轉(zhuǎn)染6.25、12.5nmol/LCalcyclinsiRNA后A2780細胞增殖指數(shù)分別為39.4和31.0，較空白對照組和陰性對照siRNA組顯著降低。 （4）Transwell試驗結(jié)果表明，CalcyclinsiRNA分別轉(zhuǎn)染A2780細胞后穿膜細胞數(shù)目顯著減少，有統(tǒng)計學(xué)意義（p＜0.05）。這一結(jié)果提示隨著Calcyclin表達降低，A2780細胞侵襲能力也隨之明顯降低。 （5）MTT法檢測CalcyclinsiRNA轉(zhuǎn)染后A2780細胞對順鉑敏感性的影響，結(jié)果顯示CalcyclinsiRNA引起順鉑對A2780細胞的抑制率增加，即一定程度提高了A2780細胞對順鉑的敏感性。對順鉑半數(shù)致死劑量（IC50）的計算結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染6.25、12.5nmol/LCalcyclinsiRNA的A2780細胞對順鉑IC50值分別為13.42μM和11.32μM，和陰性對照siRNA組IC50值（18.12μM）均顯著降低。 結(jié)論 （1）免疫組化結(jié)果顯示Calcyclin表達水平與卵巢癌細胞分化程度、手術(shù)分期、腹水和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，提示Calcyclin表達和與卵巢癌的發(fā)生發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移和不良預(yù)后密切相關(guān)，有可能成為臨床評價病情進展和隨訪的參考指標(biāo)。 （2）Calcyclin的血清濃度在卵巢癌患者中顯著升高，并與手術(shù)分期和細胞學(xué)分級相關(guān)，提示Calcyclin的血清濃度與卵巢癌病情發(fā)展相關(guān)。但本研究由于時間有限，病例樣本量較小，Calcyclin能否成為監(jiān)測腫瘤病情發(fā)展的分子標(biāo)志物還需要進一步大樣本研究驗證。 （3）CalcyclinsiRNA轉(zhuǎn)染卵巢癌A2780細胞后，引起A2780細胞G0/G1期阻滯，侵襲能力降低，同時對順鉑的敏感性有所增強。Calcyclin蛋白高表達對卵巢癌A2780細胞的惡性生物學(xué)行為有促進作用，有可能成為卵巢癌靶向治療的新候選靶標(biāo)。
[Abstract]:objective
Ovarian epithelial carcinoma is one of the most common malignant tumors in women, and its mortality rate is the highest among the malignant tumors of the female reproductive system. The early symptoms of ovarian cancer patients are atypical, there is no effective early screening and specific diagnosis method, more than 70% of the patients are in the middle and advanced stage. In recent years, the 5-year survival rate of ovarian cancer patients is only about 30%-40%[42]. It is an urgent clinical problem to find effective gene therapy for ovarian cancer.
Calcyclin (Cacy) belongs to the S100 protein family. The expression of Calcyclin in pancreatic cancer, lung cancer, breast cancer, ovarian cancer, liver cancer, colorectal cancer and other types of malignant tumors was significantly increased [3,27-32]. Overexpression is associated with metastasis and poor prognosis in pancreatic cancer, osteosarcoma, gastric cancer, lung adenocarcinoma, melanoma and other malignant tumors [28,38-40].
At present, the expression of Calcyclin protein in ovarian epithelial carcinoma and its clinical significance are still unclear. The purpose of this study is to analyze the correlation between the expression of Calcyclin protein and ovarian cancer at tissue level and serum level, and to explore the feasibility of Calcyclin as a gene therapy for ovarian cancer.
Method
(1) Immunohistochemical technique was used to detect the expression of Calcyclin in 60 ovarian cancer specimens. The relationship between Calcyclin and the development of ovarian cancer was analyzed statistically.
(2) Serum Calcyclin levels in normal serum, benign ovarian tumors and ovarian cancer patients were detected by ELISA, and the correlation between serum Calcyclin levels and ovarian cancer was statistically analyzed.
(3) After specific reduction of Calcyclin expression by RNA interference, we observed the changes of cell cycle, invasiveness and cisplatin sensitivity of ovarian cancer cells, and explored the feasibility of Calcyclin as a candidate gene for targeted therapy of ovarian cancer.
Result
(1) The expression of Calcyclin in ovarian cancer tissues was detected by immunohistochemistry. The results showed that the expression of Calcyclin in poorly differentiated ovarian cancer patients (55.0%) was significantly higher than that in well differentiated ovarian cancer patients (15.4%). The expression of Calcyclin was related to the stage of operation (P < 0.05). The expression of Calcyclin increased significantly with the increase of lymph node metastasis and ascites (P < 0.05). In ovarian cancer patients with ascites and lymph node metastasis, the expression of Calcyclin increased significantly (P < 0.001).
(2) Calcyclin serum concentration was detected by ELISA. The results showed that the average serum concentration of Calcyclin in ovarian cancer patients was 1242.47+178.17 pg/ml, which was significantly higher than that in normal serum (489.73+37.86 pg/ml) and benign ovarian tumor (700.75+43.14 pg/ml), and the difference was statistically significant (P 0.01). The results showed that the serum concentration of Calcyclin in patients with stage III and stage IV ovarian cancer was 644.79+67.89pg/ml and 1087.44+104.66 pg/ml, respectively, which was significantly higher than that in patients with stage I and stage II ovarian cancer (359.35+37.82 pg/ml and 499.44+42.56 pg/ml), and the difference was statistically significant (P 0.001). The serum concentration of Calcyclin in cancer patients was 1320.08+102.59 pg/ml, which was significantly higher than that in well-differentiated (573.58+37.28 pg/ml) and moderately differentiated (832.91+75.62 pg/ml) patients (P 0.05).
(3) Cell cycle analysis showed that the proportion of G0/G1 phase in A2780 cells increased and that of S phase decreased after specific reduction of Calcyclin expression by RNA interference technique. Group decreased significantly.
(4) Transwell assay showed that the number of transfected A2780 cells significantly decreased (p < 0.05). The results suggested that the invasive ability of A2780 cells decreased with the decrease of Calcyclin expression.
(5) MTT assay showed that the inhibition rate of cisplatin on A2780 cells was increased after transfection of CalcyclinsiRNA, that is to say, the sensitivity of A2780 cells to cisplatin was increased to a certain extent. The IC50 values of 2780 cells to cisplatin were 13.42 and 11.32 mu M, respectively. The IC50 values (18.12 mu M) of the negative control siRNA group were significantly decreased.
conclusion
(1) Immunohistochemistry showed that the expression of Calcyclin was correlated with the differentiation of ovarian cancer cells, surgical stage, ascites and lymph node metastasis, suggesting that the expression of Calcyclin was closely related to the occurrence and development of ovarian cancer, invasion and metastasis and poor prognosis, which might be a reference index for clinical evaluation of disease progression and follow-up.
(2) The serum concentration of Calcyclin was significantly increased in ovarian cancer patients and correlated with surgical stage and cytological grade, suggesting that the serum concentration of Calcyclin was associated with the development of ovarian cancer. Validation of large sample studies.
(3) After transfection of CalcyclinsiRNA into ovarian cancer A2780 cells, the G0/G1 phase arrest of A2780 cells was induced, and the invasiveness of A2780 cells was decreased, and the sensitivity to cisplatin was enhanced. The high expression of Calcyclin protein could promote the malignant biological behavior of ovarian cancer A2780 cells and might be a new candidate target for targeted therapy of ovarian cancer.
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R737.31

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 王桂芳,侍慶;卵巢上皮性癌142例治療與預(yù)后因素分析[J];實用婦產(chǎn)科雜志;2000年03期

2 王純雁,李聯(lián)昆,祁秀峪,鄒俊芝,侯進忠;卵巢正常大小的原發(fā)性卵巢上皮性癌綜合征的臨床特點與預(yù)后影響因素[J];中華婦產(chǎn)科雜志;2000年07期

3 張玲玲,夏艷,顧曉琴;晚期卵巢上皮性癌19例手術(shù)治療體會[J];江蘇臨床醫(yī)學(xué)雜志;2001年01期

4 武紅利 ,趙芙蓉;60例卵巢上皮性癌治療效果觀察[J];中國煤炭工業(yè)醫(yī)學(xué)雜志;2001年10期

5 石一復(fù);卵巢上皮性癌化療的有關(guān)問題[J];實用腫瘤雜志;2002年01期

6 黃嘯,蔡樹模,范建玄,李子庭;晚期卵巢上皮性癌的綜合治療和預(yù)后分析[J];中華婦產(chǎn)科雜志;2002年05期

7 劉朝霞,鄒向紅;手術(shù)結(jié)合化療治療卵巢上皮性癌的療效觀察[J];贛南醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2002年03期

8 田建平,張瑞蘭;卵巢上皮性癌134例治療與預(yù)后因素分析[J];河北醫(yī)藥;2002年07期

9 郄明蓉,張崇淑,楊小蕓,鄭艾;10年間卵巢上皮性癌的治療及預(yù)后因素分析[J];華西醫(yī)學(xué);2002年03期

10 呂衛(wèi)國,葉大風(fēng),謝幸,陳懷增,傅云峰;轉(zhuǎn)化生長因子β_1、白細胞介素2、7與卵巢上皮性癌患者腹腔局部免疫功能的關(guān)系[J];現(xiàn)代婦產(chǎn)科進展;2002年05期

相關(guān)會議論文 前10條

1 胡蓉;惠寧;歐俊;吳冬;;三種化療方案對晚期卵巢上皮性癌的療效比較[A];第四屆長三角婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)論壇暨浙江省2009年婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2009年

2 陳蘭芳;;中晚期卵巢上皮性癌的治療與預(yù)后影響因素[A];中國抗癌協(xié)會婦科腫瘤專業(yè)委員會第六次全國學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2001年

3 溫宏武;姚曉玲;邵愛玲;;晚期卵巢上皮性癌近20年預(yù)后變化[A];中國抗癌協(xié)會婦科腫瘤專業(yè)委員會第七次全國學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2003年

4 薛金玲;;晚期卵巢上皮性癌生存率20年變化研究[A];第八次全國婦產(chǎn)科學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2004年

5 何成章;浦紅;呂蓓;董若凡;邱旭軍;;復(fù)發(fā)性/難治性卵巢上皮性癌45例臨床分析[A];江蘇省抗癌協(xié)會婦科腫瘤專業(yè)委員會第四次腫瘤學(xué)術(shù)研討會暨無錫市婦產(chǎn)科年會論文匯編[C];2005年

6 陳亦樂;劉艷瓊;唐迪紅;褚超男;;晚期卵巢上皮性癌不同化療途徑臨床對比研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第九次全國婦科腫瘤學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2006年

7 王莉英;;35歲以下卵巢上皮性癌患者29例臨床分析[A];中華醫(yī)學(xué)會第九次全國婦科腫瘤學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2006年

8 彭澎;沈鏗;楊佳欣;吳鳴;黃惠芳;潘凌亞;郎景和;;吉西他濱聯(lián)合化療在卵巢上皮性癌治療中的效應(yīng)研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第九次全國婦科腫瘤學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2006年

9 余冬青;李力;;卵巢上皮性癌腹膜后淋巴結(jié)清掃的臨床價值[A];中華醫(yī)學(xué)會第九次全國婦科腫瘤學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2006年

10 余冬青;李力;;卵巢上皮性癌腹膜后淋巴結(jié)清掃的臨床價值[A];中華醫(yī)學(xué)會第九次全國婦科腫瘤學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2006年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 楊波;循環(huán)無細胞DNA對卵巢上皮性癌患者的診斷、療效評價和病情監(jiān)測的價值[D];河北醫(yī)科大學(xué);2008年

2 姚洪文;新的卵巢上皮性癌蛋白標(biāo)志物的初步研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2009年

3 楊建華;水通道蛋白在卵巢上皮性癌中的作用及其調(diào)節(jié)機制研究[D];浙江大學(xué);2006年

4 趙素芬;破壁靈芝孢子粉提取物抑制人卵巢上皮性癌細胞生長、轉(zhuǎn)移及逆轉(zhuǎn)順鉑耐藥的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2010年

5 余立群;不良心理應(yīng)激對人卵巢上皮性癌發(fā)生、發(fā)展影響的實驗和臨床研究[D];南昌大學(xué);2008年

6 呂訥男;Septin-9和Clusterin在卵巢上皮性癌患者外周血和腫瘤組織中的蛋白水平及其臨床意義[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2011年

7 楊潔;HIF-1α與卵巢上皮性癌血管生成及生物學(xué)行為的關(guān)系[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2012年

8 閆曉娟;IGFBP-2及IGFBP-3對卵巢上皮性癌患者體內(nèi)IGF-Ⅱ的生物學(xué)功能調(diào)節(jié)及體外化療耐藥相關(guān)研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2009年

9 劉國艷;卵巢上皮性癌順鉑化療耐藥機制及逆轉(zhuǎn)策略的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2004年

10 程文俊;HOXA10基因及MPA在卵巢上皮性癌發(fā)生中作用的研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2010年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 陳鳳;微衛(wèi)星不穩(wěn)定與卵巢上皮性癌易感性的臨床病例分析[D];吉林大學(xué);2009年

2 江瑜;卵巢上皮性癌93例臨床分析[D];福建醫(yī)科大學(xué);2010年

3 王佩;卵巢上皮性癌患者術(shù)后生活質(zhì)量影響因素的調(diào)查分析[D];河北醫(yī)科大學(xué);2010年

4 湯偉偉;miR-135a及17-β雌二醇在卵巢上皮性癌中作用的研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2011年

5 謝華;多藥耐藥基因及谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶-π表達與卵巢上皮性癌化療敏感性關(guān)系的研究[D];延邊大學(xué);2004年

6 史麗;溶血磷脂酸對卵巢上皮性癌診斷及病情監(jiān)測價值的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2007年

7 汪麗;卵巢上皮性癌化療新進展[D];蘭州大學(xué);2013年

8 袁彩霞;乙酰肝素酶在卵巢上皮性癌中的表達及促腫瘤轉(zhuǎn)移機制的實驗研究[D];山東大學(xué);2008年

9 顧雙;卵巢上皮性癌組織中激肽釋放酶7及14的表達及臨床意義[D];山東大學(xué);2008年

10 何衛(wèi)華;粘著斑激酶及肝癌缺失基因-1在卵巢上皮性癌組織中的表達及其意義[D];鄭州大學(xué);2010年

本文編號：2243054