【摘要】：研究背景： 卵母細胞形態(tài)學評分，是通過光鏡下觀察卵母細胞的形態(tài)并沒有損害卵母細胞和胚胎的生物活性，不會影響其發(fā)育潛能，故很適合應用于輔助生殖等生物技術領域。透明帶也是我們日常評價胚胎和卵母細胞質量和發(fā)育潛能的指標之一。已有研究報道，透明帶蛋白組成、厚度、顏色或者形態(tài)異常均可以影響受精、胚胎發(fā)育潛能和種植率。暗色透明帶在透明帶異常中發(fā)生率較高，且受精率和胚胎發(fā)育潛能低下。為了更進一步了解暗色透明帶的患者IVF-ET結局的差異，本研究從另一角度即卵子本身的質量來探究這一問題。 研究目的： 分析暗色透明帶（Dark Zona Pellucida, DZP）卵母細胞來源的胚胎對妊娠結局的影響，并從細胞的超微結構和分子水平去深入研究DZP卵母細胞質量下降、受精率低及胚胎發(fā)育潛能差的原因。為分析和評估卵母細胞質量和胚胎發(fā)育潛能，提供了新的標準和理論依據。 研究對象和方法： 1.收集安徽醫(yī)科大學附屬省立醫(yī)院生殖中心2010年11月～2012年6月共268名接受IVF或ICSI治療的不孕癥患者。在一次促排周期中出現(xiàn)DZP卵子的患者為研究組，其中研究組A共47例（33例IVF,14ICSI周期），為取出的卵母細胞中部分卵母細胞的透明帶正常，部分卵母細胞為DZP的患者，研究組B共22例（8例IVF,14ICSI周期），為全部卵母細胞均是DZP的患者；同期全部卵母細胞帶正常透明帶（Zona Pellucida，ZP）的患者206例（143例IVF,63ICSI周期）的為對照組。三組患者的年齡均小于等于36歲，不孕原因均為輸卵管因素和/或男方因素(弱精子癥、梗阻性無精子癥等)等，并排除染色體異常、卵巢低反應等疾病。比較三組間的患者一般情況及妊娠結局。統(tǒng)計學方法采用單因素ANOVA檢驗和χ2檢驗。 2.收集我院生殖中心行IVF-ET新鮮周期未受精的卵母細胞共23枚，其中帶有DZP卵母細胞11枚，正常卵母細胞12枚。在透射電子顯微鏡下觀察暗色透明帶的卵母細胞和正常卵母細胞，對透明帶，卵母細胞卵周隙，卵母細胞細胞器等超微結構進行分析。 3.分別收集DZP卵母細胞和正常卵母細胞的顆粒細胞，利用實時定量熒光PCR和Western-Blot對顆粒細胞中Cx43、Cx37mRNA和Cx43、Cx37蛋白的表達量進行測定。 結果: 1.三組患者的IVF臨床數(shù)據：三組患者年齡，，不孕年限，基礎激素，卵巢刺激用藥天數(shù)，Gn用藥總量，注射HCG日內膜厚度及E2值和移植周期數(shù)間的差異無統(tǒng)計學意義。研究組A與正常對照組在受精率、優(yōu)質胚胎率和妊娠結局上并未見明顯差異。而研究組B的2PN受精率（59.4%vs.76.3，IVF受精；67.7%vs.82.3%，ICSI受精）、優(yōu)質胚胎率（51.7%vs.66.0%）、胚胎種植率（18.6vs.34.5%）、臨床妊娠率（25.0%vs.53.3%）均明顯低于對照組，差異顯著（P0.05）。 2.透射顯微鏡下觀察DZP卵母細胞和正常組卵母細胞發(fā)現(xiàn)卵周隙，細胞胞質中皮質顆粒、高爾基體，粗面內質網和核糖體等細胞器與對照組相比未發(fā)現(xiàn)明顯異常。但DZP卵母細胞中ZP內電子致密物明顯增多，胞質中異常線粒體比例增高、液泡明顯增多。 3.利用熒光定量PCR擴增檢測Cx43、Cx37mRNA在顆粒細胞中的表達，發(fā)現(xiàn)在DZP卵母細胞的顆粒細胞中表達水平顯著低于正常組（P0.05）。選取DZP顆粒細胞及正常顆粒細胞，利用Western blot法檢測細胞中Cx43、Cx37蛋白含量。結果顯示，DZP卵母細胞的顆粒細胞中Cx43、Cx37蛋白表達水平明顯降低。 結論： 研究組B的2PN受精率、優(yōu)質胚胎率、種植率和臨床妊娠率較正常對照組均顯著降低，有統(tǒng)計學差異。另外透射電鏡結果顯示DZP卵母細胞ZP內電子致密物增多、胞質中線粒體受損，液泡明顯增多；DZP卵母細胞的顆粒細胞中Cx43、Cx37mRNA和蛋白表達量明顯降低。這些結果表明DZP卵母細胞中可能存在胞質發(fā)育不成熟，卵母細胞和顆粒細胞間隙連接受損，從而導致DZP卵母細胞質量下降、胚胎發(fā)育潛能低、妊娠結局較差。
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【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R714.8

【參考文獻】

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1 吳建力;胡承閱;;著床生物學進展[J];安徽醫(yī)學;2006年04期

2 孫艷蘭;程玲慧;曹云霞;;體外受精-胚胎移植治療后早期自然流產相關因素分析[J];安徽醫(yī)學;2012年01期

3 孫瑩璞,徐瑜,蘇迎春,朱桂金,郭藝紅;人胚胎透明帶厚度及其變量與體外受精-胚胎移植妊娠結局的關系[J];生殖醫(yī)學雜志;2004年06期

4 劉曉妍;張守信;郝翠芳;單英華;沈肖方;黃鑫;陳麗麗;張玉花;;透明帶形態(tài)異常卵母細胞在IVF完全受精失敗后行補救ICSI的臨床結局[J];生殖與避孕;2012年11期

5 成俊萍;黃莉;何冰;薛林濤;王世凱;譚毅;;透明帶與卵母細胞及胚胎質量相關性的研究進展[J];中國臨床新醫(yī)學;2011年07期

本文編號：2239689