月經(jīng)血源性子宮內(nèi)膜干細(xì)胞移植治療重度宮腔粘連的臨床前期研究
[Abstract]:Recent studies suggest that the occurrence of intrauterine adhesions (IUA) may be related to the decrease, deletion or dysfunction of endometrial stem cells, so stem cell transplantation is proposed to treat IUA. In addition to the advantages of bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs), BMSCs have the ability to proliferate faster, differentiate into three embryonic layers and express matrix metalloproteins (MMPs), which may be related to the expression of embryonic stem cell (ESCs) antigen OCT-4 and some characteristics of ESCs. The ultimate goal of this preclinical study is to restore endometrial fertility in patients with IUA. The first part is to isolate, culture and identify endometrial stem cells from menstrual blood to provide cell sources for stem cell transplantation for the treatment of intrauterine adhesions. The second part is to induce MenSCs into endometrial fineness in vitro. Cell differentiation provides a theoretical basis for stem cell therapy of intrauterine adhesions; part three: MenSCs transplanted into NOD-SCID mice renal capsule or subcutaneous, after estrogen treatment confirmed that MenSCs can reconstruct endometrial tissue in vivo; part four: investigation of hysteroscopic diagnosis of severe intrauterine adhesions of menstrual blood and endometrial tissue stem and thin Results: 1) MenSCs grew clonally in low-glucose DMEM medium containing 10% fetal bovine serum, showing the growth characteristics of stem cells. Flow cytometry was used to study the effect of stem cell transplantation on the growth of IUA. The percentage of OCT-4 positive cells, CD45 0.93%+0.42%, STRO-1 1 1.80%+0.92% and HLA-DR 1.00%+0.35% in cultured blood-derived stem cells were 95.13%+0.81%, CD45 0.93%+0.42%, 1.80%+0.92% and 1.00%+0.35% respectively, indicating that the cultured cells were basically OCT-4* stem cells with low immunogenicity, and the chromosome karyotype of the cells doubled 24 times remained normal.2) Conditioned medium and estradiol 17 beta-valerate could induce endometrial cells to differentiate in vitro. The cytokeratin CK and vimentin VIM of human endometrial epithelial cells were detected by immunocytochemistry. The positive rates of CK and vimentin VIM were significantly higher after induction than before induction. The mRNA levels and protein surface of CK and VIM were also detected. The amount of MenSCs was significantly higher than that before induction (p0.05), indicating that MenSCs could be induced to differentiate into endometrial cells in vitro. 3. The cultured MenSCs were transplanted into the axillary subcutaneously of ovariectomized female NOD/SCID mice. After estrogen treatment, histopathological examination and immunohistochemical examination of CK, VIM, PR, ER and CD31 were performed. HE staining was found to be visible. Glandular structure, immunohistochemical detection of CK, VIM and PR were expressed, ER and CD31 were not expressed, confirming that MenSCs can reconstruct endometrial tissue in vivo. CD31 does not show that the blood supply of endometrial tissue in the process of reconstruction may come from the host. 4) Hysteroscopy diagnosis of intrauterine adhesions is more fertile than normal uterine cavity M. The colony formation rate of enSCs cultured in vitro was significantly lower than that of normal uterine cavity ((0.74 65507 The percentage of OCT-4 positive cells in the normal uterine cavity was significantly lower than that in the normal uterine cavity (0.1% vs 2%). The percentage of CD146 positive cells in the normal uterine cavity (0.5% vs 1%) was significantly lower than that in the normal uterine cavity (0.1% vs 2%). Basal layer 1%: EpCAM expression was 0.1% in the endometrium of both intrauterine adhesives and normal subjects. CONCLUSION: Pre-clinical studies have shown that MenSCs can be cultured and amplified to obtain enough cells to meet the needs of cell therapy; MenSCs can differentiate in vitro under conditioned medium and appropriate estrogen. Endometrial cells; MenSCs treated with estrogen can reconstruct endometrial tissue in NOD/SCID mice; MenSCs and EnSCs in hysteroscopically diagnosed intrauterine adhesions were significantly less than those in normal uterine cavity.
【學(xué)位授予單位】:安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:博士
【學(xué)位授予年份】:2015
【分類號(hào)】:R711.74
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,本文編號(hào):2219756
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