【摘要】：細(xì)胞自噬是真核生物中一種進(jìn)化保守的、溶酶體依賴的降解細(xì)胞內(nèi)受損細(xì)胞器和長(zhǎng)壽蛋白的分解代謝過(guò)程,是維持細(xì)胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)和應(yīng)對(duì)環(huán)境應(yīng)激刺激的重要途徑。細(xì)胞自噬通路的異常與機(jī)體多種疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),如：腫瘤、感染性疾病、神經(jīng)退行性疾病、心血管疾病等。目前,在抗腫瘤藥物研發(fā)領(lǐng)域,靶向自噬通路被認(rèn)為是一項(xiàng)非常有潛力的新策略。 本研究中,利用穩(wěn)定表達(dá)GFP-LC3B的SKOV3細(xì)胞株,我們對(duì)華北制藥集團(tuán)有限公司(NCPC)微生物來(lái)源的純化合物庫(kù)進(jìn)行了系統(tǒng)篩選,發(fā)現(xiàn)并鑒定Elaiophylin是一種新的自噬抑制劑。Elaiophylin雖然促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)自噬體的累積,但是最終通過(guò)減弱溶酶體組織蛋白酶的活性而阻斷自噬流,導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)SQSTM1/p62蛋白水平的增高。此外,elaiophylin誘導(dǎo)溶酶體失穩(wěn),具體表現(xiàn)為細(xì)胞LysoTracker Red溶酶體染色減弱,以及組織蛋白酶B/組織蛋白酶D從溶酶體釋放至細(xì)胞漿。Elaiophylin最終會(huì)降低細(xì)胞存活率,尤其是當(dāng)它與順鉑聯(lián)用或者當(dāng)細(xì)胞處于低氧環(huán)境中時(shí)。而且,在卵巢癌原位移植的小鼠模型中,給予低劑量(2mg/kg)的elaiophylin單藥治療即可獲得顯著地抗腫瘤活性,并且沒(méi)有毒副作用；但是,高劑量(8mg/kg)的elaiophylin會(huì)導(dǎo)致小腸潘氏細(xì)胞功能障礙,而這一點(diǎn)與ATG16L1敲除小鼠的小腸表型非常相似�？偟膩�(lái)說(shuō),這些結(jié)果對(duì)該藥物的潛在臨床應(yīng)用提供了一個(gè)安全的治療窗。我們的研究結(jié)論首次表明elaiophylin是一種新的自噬抑制劑,單藥或者與其他藥物聯(lián)用均可在卵巢癌細(xì)胞中發(fā)揮顯著的抗腫瘤活性,為該藥物應(yīng)用于卵巢癌的治療提供了潛在的可能性。
[Abstract]:Autophagy is an evolutionarily conserved, lysosomal dependent catabolism process of damaged organelles and long-lived proteins in eukaryotes, which is an important way to maintain homeostasis and respond to environmental stress. The abnormal autophagy pathway is closely related to the occurrence and development of many diseases, such as tumor, infectious diseases, neurodegenerative diseases, cardiovascular diseases and so on. At present, targeted autophagy pathway is regarded as a potential new strategy in the field of antitumor drug development. In this study, using SKOV3 cell lines expressing GFP-LC3B stably, we systematically screened the pure compound library from (NCPC) microorganism of Huabei Pharmaceutical Group Co., Ltd. It was found and identified that Elaiophylin is a new autophagy inhibitor. Elaiophylin promoted the accumulation of autophagy, but finally blocked the autophagy flow by decreasing the activity of lysosomal cathepsin, which resulted in the increase of intracellular SQSTM1/p62 protein level. In addition, elaiophylin induced the instability of lysosome, which was manifested by the decrease of LysoTracker Red lysosome staining, and the release of cathepsin B / cathepsin D from lysosome to cytoplasm. Elaiophylin eventually reduced the cell survival rate. Especially when it is used in combination with cisplatin or when cells are exposed to hypoxia. Moreover, in a mouse model of orthotopic transplantation of ovarian cancer, low-dose (2mg/kg) elaiophylin monotherapy resulted in significant anti-tumor activity and no side effects; however, high-dose (8mg/kg) elaiophylin resulted in small intestinal Panzon cell dysfunction. This is very similar to the small intestine phenotype of ATG16L1 knockout mice. Overall, these results provide a safe therapeutic window for potential clinical applications of the drug. Our results suggest for the first time that elaiophylin is a new autophagy inhibitor, which can play a significant antitumor activity in ovarian cancer cells either alone or in combination with other drugs, providing a potential for the use of the drug in the treatment of ovarian cancer.
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.31

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本文編號(hào)：2187224