【摘要】：背景、目的：卵巢癌因早期臨床表現(xiàn)不明顯,缺乏有效的早期篩查的方法,當(dāng)診斷時多已發(fā)展至晚期。盡管卵巢癌的腫瘤減滅術(shù)及以鉑類、紫杉醇的聯(lián)合化療有效的提高了卵巢癌的預(yù)后,仍有約70%的患者在2年內(nèi)復(fù)發(fā),而這些Ⅲ/Ⅳ期復(fù)發(fā)的患者5年生存率僅為23%。因此,新的、有效的治療卵巢癌的方法十分急需。本研究為明確內(nèi)源性血管生成抑制因子vasohibin-1對人卵巢癌SKOV-3細(xì)胞體外增殖和凋亡能力的影響,以期為卵巢癌的治療提供新的思路。 方法：細(xì)胞培養(yǎng),SKOV-3細(xì)胞用含10%胎牛血清、100U/ml青霉素和100U/ml鏈霉素的RPMI-1640培養(yǎng)液培養(yǎng),培養(yǎng)瓶置于37℃、5%C02培養(yǎng)箱中,細(xì)胞呈單層貼壁生長,選用對數(shù)生長期細(xì)胞進(jìn)行實驗。(1)以不同的病毒感染復(fù)數(shù)(multiplicity of infection,MOI),即MOI=25、50、75、100,用重組腺病毒vasohibin-1(Ad-vasohibin-1)感染SKOV-3細(xì)胞,于熒光顯微鏡下觀察綠色熒光蛋白表達(dá)情況及細(xì)胞形態(tài),綠色熒光消失的時間,計算感染率,確定病毒最佳MOI；(2)當(dāng)MOI=50、75、100,用Ad-vasohibin-1感染SKOV-3細(xì)胞,分別于感染后24h及48h,熒光顯微鏡下觀察綠色熒光蛋白表達(dá)情況并拍照。(3)按所確定的最佳MOI,MOI=75,用Ad-vasohibin-1感染SKOV-3細(xì)胞,采用蛋白質(zhì)印跡法(Western Blot)檢測SKOV-3細(xì)胞內(nèi)vasohibin-1蛋白的表達(dá)水平；(4)利用Cell Count Kit-8(CCK-8)檢測Ad-vasohibin-1對SKOV-3細(xì)胞增殖的影響,取不同的MOI,即MOI=25、50、100、200,分別培養(yǎng)24h、48h和72h。(5)利用Hoechst33258檢測Ad-vasohibin-1對SKOV-3細(xì)胞凋亡的影響。 結(jié)果：(1)MOI=25、50、75、100,病毒感染SKOV-3細(xì)胞24h,可以觀察到綠色熒光；48h熒光達(dá)到最亮,且隨著MOI值增大綠色熒光增強(qiáng),MOI=100時,部分細(xì)胞出現(xiàn)較明顯的死亡；熒光持續(xù)10天消失；(2)MOI=50、75、100,病毒感染SKOV-3細(xì)胞,見綠色熒光強(qiáng)度隨感染時間延長和MOI增大而增強(qiáng)；(3)經(jīng)腺病毒感染48h后,SKOV-3細(xì)胞中vasohibin-1蛋白表達(dá)量與對照組相比,顯著性增加(P0.05)；(4)CCK-8檢測發(fā)現(xiàn)vasohibin-1重組腺病毒對SKOV-3細(xì)胞增殖具有抑制作用,MOI=25時vasohibin-1重組腺病毒感染SKOV-3細(xì)胞24h,與對照組相比,沒有統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.065)；余各組間相比均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),且抑制能力隨MOI增大而增加(P0.05),隨時間的延長而增加(P0.05)。(5)Hoechst33258染色觀察到Ad組的SKOV-3細(xì)胞較NC組及BC組細(xì)胞核體積縮小,染色質(zhì)濃染,亮度明顯增強(qiáng),核碎裂,呈致密的顆粒狀或塊狀,出現(xiàn)較多的核固縮和碎裂。 結(jié)論：Vasohibin-1可以在SKOV-3細(xì)胞中過表達(dá),其過表達(dá)能夠抑制SKOV-3細(xì)胞的增殖能力,并具有濃度和時間依賴性,同時能誘導(dǎo)SKOV-3細(xì)胞的凋亡,可為卵巢癌的治療提供新思路。
[Abstract]:Background, objective: because the early clinical manifestation is not obvious, the ovarian cancer lacks the effective early screening method, when the diagnosis has developed to the late stage. In spite of tumor reduction and platinum chemotherapy, paclitaxel can effectively improve the prognosis of ovarian cancer. About 70% of the patients recurred within 2 years, while the 5-year survival rate of these patients with stage 鈪，

本文編號：2121550