HCG對人子宮內(nèi)膜細胞VEGF表達調(diào)控的初步研究
本文選題:人子宮內(nèi)膜細胞 + HCG ; 參考:《現(xiàn)代婦產(chǎn)科進展》2015年12期
【摘要】:目的:探討人子宮內(nèi)膜細胞體外培養(yǎng)模型中,HCG對VEGF表達的調(diào)控作用和機制。方法:采用機械分離加梯度離心法分別獲得腺上皮與基質(zhì)細胞進行體外原代細胞混合培養(yǎng);實驗設(shè)對照組、HCG組(對照組使用常規(guī)DF/12培養(yǎng)液提取總蛋白;HCG組在DF/12培養(yǎng)液中加終濃度為20U/ml HCG)。采用Q-PCR測定子宮內(nèi)膜細胞中VEGF mRNA表達水平。免疫組化或熒光法進行LH-R和VEGF蛋白質(zhì)定位表達,Western blot法測定蛋白半定量表達。結(jié)果:子宮內(nèi)膜腺上皮與基質(zhì)細胞均存在LH/HCG-R和VEGF蛋白表達。HCG對子宮內(nèi)膜細胞VEGF蛋白的峰值作用時間點為24h。與對照組相比,20IU/ml HCG體外干預24h后,子宮內(nèi)膜細胞VEGF mRNA和蛋白質(zhì)水平均顯著上調(diào)(Q-PCR:1 vs 2.0132±0.6024;WB:0.4069±0.1897 vs 0.7781±0.1651)(P均0.05)。結(jié)論:成功建立了人子宮內(nèi)膜細的體外培養(yǎng)模型,并完成HCG的干預實驗。HCG與HCG/LH-R結(jié)合后上調(diào)子宮內(nèi)膜細胞VEGF的基因和蛋白質(zhì)水平表達。
[Abstract]:Aim: to investigate the regulation and mechanism of HCG on VEGF expression in human endometrial cells in vitro. Methods: the glandular epithelium and stromal cells were obtained by mechanical separation and gradient centrifugation respectively. The control group was established as HCG group (the control group used the conventional DF- / 12 medium to extract total protein HCG and the final concentration of HCG was 20U / ml HCG in DF- / 12 medium). The expression of VEGF mRNA in endometrial cells was measured by Q-PCR. The expression of LH-R and VEGF protein was detected by immunohistochemistry or fluorescence method. Western blot method was used to detect the semi-quantitative expression of LH-R and VEGF protein. Results: the expression of LH / HCG-R and VEGF protein in endometrial glandular epithelium and stromal cells. Compared with the control group, the mRNA and protein levels of VEGF in endometrial cells were significantly up-regulated (Q-PCR: 1 vs 2.0132 鹵0.6024 WB: 0.4069 鹵0.1897 vs 0.7781 鹵0.1651) after intervention with 20IUU / ml HCG for 24 hours in vitro. Conclusion: the model of human endometrial fine culture in vitro was successfully established, and the HCG intervention experiment. HCG combined with HCG / LH-R upregulated the expression of VEGF gene and protein in endometrial cells.
【作者單位】: 中山大學附屬第一醫(yī)院生殖中心;湖北醫(yī)藥學院附屬人民醫(yī)院生殖中心;
【基金】:國家自然科學基金資助項目(No:2008-30,872,762)
【分類號】:R714
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,本文編號:2086303
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