本文選題：豚鼠 + 卵巢　； 參考：《南京農(nóng)業(yè)大學(xué)》2015年博士論文

【摘要】：多囊卵巢綜合癥(PCOS)是育齡婦女最為常見的內(nèi)分泌紊亂疾病,是急待解決的臨床問題之一。當(dāng)前認(rèn)為卵巢才是PCOS病理機(jī)制改變的原發(fā)部位。PCOS的主要特征是高雄激素癥,高雄激素抑制了卵巢發(fā)育卵泡的成熟,并最終導(dǎo)致了卵巢囊狀表現(xiàn)的出現(xiàn)。PCOS病因和病理機(jī)制至今尚未完全闡明,因此,動物模型對于進(jìn)一步揭示PCOS的發(fā)情機(jī)制以及評估PCOS的治療手段都顯得極其重要。已有多種處理方法被用于介導(dǎo)PCOS嚙齒類動物模型,如雄激素處理、雌激素處理、芳香化酶抑制劑處理、抗孕酮劑(如米非司酮)、持續(xù)光照或基因改造等。目前多種不同的實(shí)驗(yàn)動物已被用模擬人類PCOS繁殖和代謝癥狀,這其中包括非人類靈長類動物、大鼠、小鼠和綿羊。嚙齒類動物卵巢激素分泌情況與人類不盡相同,而獼猴和綿羊等作為實(shí)驗(yàn)動物又過于昂貴。豚鼠作為人類生殖研究的良好模型,由于其發(fā)情周期與人類似,且成本低廉易操作,其作為PCOS模型動物具有比較大的潛力�；|(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)參與了卵巢細(xì)胞遷移、細(xì)胞增殖、凋亡和組織形態(tài)發(fā)生的過程,因?yàn)槁殉驳幕竟δ芫褪欠置诩に睾团怕?由此需要動態(tài)的、廣泛的和周期性的組織再造。MMP-2和MMP-9參與了卵巢周期卵泡發(fā)育、排卵、黃體的形成和退化的過程。同時(shí),基質(zhì)金屬蛋白酶/基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑(MMPs/TIMPs)的平衡紊亂可能是引起卵巢病變的原因之一,因?yàn)镻COS的卵巢MMPs/TIMPs平衡是失調(diào)的。因此研究MMP-2和MMP-9對于調(diào)控卵巢周期的表達(dá)特性對闡明PCOS的病理機(jī)制有著重要的意義。本論文以豚鼠為研究對象,重點(diǎn)研究豚鼠卵巢周期和豚鼠不同生長階段卵巢上MMP-2和MMP-9的表達(dá)特性,以及研究豚鼠在經(jīng)不同處理方法(eCG、丙酸睪酮、來曲唑)處理后卵巢MMP-2和MMP-9的表達(dá)特性。主要結(jié)果如下:1.豚鼠發(fā)情周期卵巢MMP-2、9表達(dá)特性為研究正常成年雌性豚鼠發(fā)情周期中卵巢上MMP-2和MMP-9的表達(dá)特性,通過觀察豚鼠陰門外觀和陰道脫落細(xì)胞涂片,確定豚鼠的發(fā)情周期。使用連續(xù)觀察到2個(gè)以上正常發(fā)情周期的豚鼠,分別取處于發(fā)情前期和發(fā)情后期的豚鼠(n=6),采集豚鼠的卵巢,通過HE染色和IHC染色(StAR、MMP-2和MMP-9)并觀察其表達(dá)特性。結(jié)果顯示,MMP-2,-9和StAR在發(fā)情前期豚鼠卵巢的閉鎖卵泡的顆粒細(xì)胞和卵泡膜細(xì)胞上有明顯表達(dá),而它們在發(fā)情后期豚鼠卵巢黃體上也有強(qiáng)表達(dá)。2.初生豚鼠經(jīng)eCG處理卵巢MMP-2、9表達(dá)特性采取3日齡和8日齡初生豚鼠分別注射5 IU eCG和生理鹽水(n=6),2天后采集豚鼠卵巢,通過HE和IHC染色觀察eCG對初生豚鼠卵巢的作用。結(jié)果顯示,3日齡、5日齡、10日齡正常豚鼠卵巢上卵泡形態(tài)變化明顯,有腔卵泡的數(shù)量呈逐漸增多趨勢,10日齡豚鼠上可見大的有腔閉鎖卵泡。初生豚鼠卵巢對激素已有較強(qiáng)敏感性,eCG對初生豚鼠卵巢的卵泡發(fā)育沒有起到類似FSH的促卵泡作用,而是發(fā)揮了類似LH的作用。MMP-2和MMP-9通過參與細(xì)胞增殖和組織形態(tài)發(fā)生過程參與了初生豚鼠卵巢卵泡的發(fā)育,而MMP-2和MMP-9對eCG可能具有不同的敏感性或發(fā)揮不同功能。3.豚鼠經(jīng)丙酸睪酮處理卵巢MMP-2、9表達(dá)特性18只正常發(fā)情期豚鼠隨機(jī)分為3組(n=6):T-1組豚鼠每天注射1 mg/100 g體重的TP(28天),T-2組豚鼠每天注射2 mg/100 g體重的TP(28天),對照組注射生理鹽水。試驗(yàn)結(jié)束后檢測豚鼠血清睪酮、孕酮、雌二醇和濃度,卵巢切片進(jìn)行HE和IHC染色,觀察卵巢上StAR、PCNA、MMP-2和MMP-9的表達(dá)特性。結(jié)果表明,豚鼠經(jīng)28天連續(xù)TP注射后,豚鼠血清睪酮濃度隨注射量的增加而大幅度提升,引起豚鼠持續(xù)不排卵。豚鼠經(jīng)一定劑量丙酸睪酮注射可模擬了人類PCOS的2大生殖特征:無排卵和高雄激素癥。另外,經(jīng)高劑量丙酸睪酮注射豚鼠可能是人類PCOS自我恢復(fù)良好的動物模型。MMP-2、MMP-9共同參與了豚鼠卵巢上卵泡的生長及閉鎖過程,豚鼠卵巢上有腔閉鎖卵泡的增多可能與MMP-2的高表達(dá)有關(guān)。4.豚鼠經(jīng)來曲唑處理卵巢MMP-2、9表達(dá)特性豚鼠每日灌服1 mg/kg和2 mg/kg來曲唑,對照組灌服生理鹽水(n=6,21天和28天)。試驗(yàn)結(jié)束后測定豚鼠血清睪酮、孕酮和雌二醇濃度,豚鼠卵巢切片經(jīng)HE、IHC染色(StAR、PCNA、MMP-2和MMP-9)及明膠酶譜分析。結(jié)果顯示,經(jīng)來曲唑處理豚鼠血清睪酮濃度隨來曲哇使用劑量和處理時(shí)間的增加而提高,而雌二醇和孕酮濃度則相反。豚鼠經(jīng)來曲唑處理卵巢未見黃體,即來曲唑抑制了豚鼠卵巢排卵,處理后卵巢上有腔卵泡數(shù)量隨來曲唑使用劑量和處理時(shí)間的增加而增多。活性MMP-2和MMP-9通過在有腔卵泡顆粒細(xì)胞層和卵泡膜細(xì)胞層的表達(dá),廣泛的參與了豚鼠經(jīng)來曲唑處理后卵巢多囊的生成過程�？傊�,MMP-2和MMP-9都參與了豚鼠卵巢的形態(tài)變化,MMP-2和MMP-9在初生豚鼠卵巢上對eCG具有不同反應(yīng)性,豚鼠經(jīng)丙酸睪酮和來曲唑誘導(dǎo)后卵巢有腔卵泡的增多伴隨卵巢MMP-2表達(dá)的增強(qiáng)和MMP-9表達(dá)的減弱。
[Abstract]:This paper studies the expression of MMP - 2 and MMP - 9 in women with PCOS . The levels of serum testosterone , MMP - 2 and MMP - 9 in guinea pigs were studied by HE , IHC staining in guinea pigs ( n = 6 , 21 days and 28 days ) .
【學(xué)位授予單位】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R711.75

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本文編號：2069274