目的 高遷移率族蛋白(HMGB1)作為炎癥反應(yīng)因子,在敗血癥、關(guān)節(jié)炎等疾病中都發(fā)揮促炎作用。最近研究發(fā)現(xiàn),HMGB1在多種腫瘤中高表達(dá),對(duì)腫瘤的生長(zhǎng)、遷移、侵襲發(fā)揮重要作用。本研究探討高遷移率族蛋白(HMGB1)在上皮性卵巢癌、卵巢良性疾病及健康人血漿中的表達(dá)情況及與臨床治療的關(guān)系,通過RNA干擾抑制探討HMGB1對(duì)卵巢癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的影響,觀察高遷移率族蛋白(HMGB1)對(duì)腫瘤血管生成的體外調(diào)節(jié)作用。 方法 1.通過ELISA方法分別檢測(cè)105例卵巢癌患者治療前及臨床緩解期,46例卵巢良性疾病患者,33例健康女性血漿中HMGB1表達(dá)水平,研究高遷移率族蛋白(HMGB1)在上皮性卵巢癌、卵巢良性疾病及健康人血清中的表達(dá)情況及與臨床治療的關(guān)系。 2.靶向HMGB1基因的慢病毒載體轉(zhuǎn)染卵巢癌細(xì)胞SKOV3、A2780,熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染效果。 3.利用real-time RT-PCR和Western blot方法檢測(cè)卵巢癌細(xì)胞中HNGB1mRNA及蛋白的沉默效果。 4.CCK8法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況,HMGB1沉默后卵巢癌細(xì)胞增殖能力的變化。 5. Transwell小室模型檢測(cè)HMGB1沉默后卵巢癌細(xì)胞遷移和侵襲能力的改變。 6.通過CCK8檢測(cè)不同濃度hrHMGB1和hrVEGF-C刺激下HUVECs細(xì)胞的體外增殖能力。 7.通過Transwell、室模型實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同濃度hrHMGB1和hrVEGF-C刺激下HUVECs細(xì)胞的體外遷移能力。 8.成管實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同濃度hrHMGB1和hrVEGF-C刺激下HUVECs細(xì)胞的體外成管能力。 結(jié)果 1.卵巢癌組HMGB1水平明顯高于良性腫瘤組與健康組(P0.01), HMGB1水平與卵巢癌疾病分期相關(guān),卵巢癌患者治療后血漿HMGB1明顯下降(P0.01)。 2. ShRNA沉默HMGB1的表達(dá)可以降低卵巢癌細(xì)胞的增殖、侵襲、遷移能力。 3. HMGB1可以在體外促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移、成管能力,且其促進(jìn)作用呈劑量依賴關(guān)系。作為陽性對(duì)照的VEGF-C有明顯促血管生成的作用。 結(jié)論 1.卵巢癌患者血漿HMGB1水平較良性患者及健康人高,并隨疾病分期的升高而升高,卵巢癌患者治療緩解后血漿HMGB1下降,可以推測(cè)HMGB1與卵巢癌發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),血漿HMGB1的檢測(cè)有希望成為卵巢癌診斷監(jiān)測(cè)的新方法。 2.沉默HMGB1基因后可顯著抑制卵巢癌細(xì)胞體外增殖、侵襲和遷移能力,提不HMGB1可作為卵巢癌基因治療的有效靶點(diǎn)并且ShRNA可能為卵巢癌基因治療開辟新思路。 3. HMGB1和VEGF-C均為血管生成因子,可以促進(jìn)血管生成和腫瘤血道轉(zhuǎn)移,有望成為腫瘤治療中抑制轉(zhuǎn)移的新方向。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R737.31
文章目錄
中文摘要
Abstract
縮略語/符號(hào)說明
前言
研究現(xiàn)狀、成果
研究目的、方法
一、HMGB1對(duì)卵巢癌診斷價(jià)值的研究
1.1 對(duì)象和方法
1.1.1 ELISA檢測(cè)血漿HMGB1表達(dá)水平
1.2 結(jié)果
1.2.1 卵巢癌、卵巢良性疾病和健康人血漿HMGB1水平測(cè)定
1.2.2 HMGB1表達(dá)與上皮性卵巢癌臨床病理特征的關(guān)系
1.2.3 HMGB1表達(dá)與上皮性卵巢癌臨床治療的關(guān)系
1.3 討論
1.3.1 上皮性卵巢癌與卵巢良性疾病、健康人血漿中的水平
1.3.2 HMGB1表達(dá)與上皮性卵巢癌臨床病理特征的關(guān)系
1.4 小結(jié)
二、HMGB1對(duì)卵巢癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響
2.1 對(duì)象和方法
2.1.1 細(xì)胞培養(yǎng)和細(xì)胞轉(zhuǎn)染
2.1.2 RT-PCR檢測(cè)卵巢癌細(xì)胞中HMGB1mRNA的表達(dá)
2.1.3 Westem blot檢測(cè)卵巢癌細(xì)胞中HNGB1蛋白表達(dá)
2.1.4 CCK8檢測(cè)卵巢癌細(xì)胞增殖
2.1.5 遷移實(shí)驗(yàn)
2.1.6 侵襲實(shí)驗(yàn)
2.2 結(jié)果
2.2.1 SKOV3、A2780細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率
2.2.2 RT-PCR結(jié)果分析
2.2.3 Western blot結(jié)果
2.2.4 CCK8檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)情況
2.2.5 體外遷移實(shí)驗(yàn)
2.2.6 體外侵襲實(shí)驗(yàn)
2.3 討論
2.3.1 HMGB1對(duì)卵巢癌細(xì)胞增殖能力的影響
2.3.2 HMGB1對(duì)卵巢癌細(xì)胞侵襲和遷移能力的影響
2.4 小結(jié)
三、HMGB1對(duì)卵巢癌轉(zhuǎn)移相關(guān)血管生成的作用
3.1 材料和方法
3.1.1 細(xì)胞株和培養(yǎng)基
3.1.2 材料、儀器
3.1.3 實(shí)驗(yàn)方法
3.2 結(jié)果
3.2.1 CCK8實(shí)驗(yàn)結(jié)果
3.2.2 Transwell小室遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果
3.2.3 Matrigel模型成管實(shí)驗(yàn)
3.3 討論
3.4 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
發(fā)表論文和參加科研情況說明
綜述 HMGB1——腫瘤治療新方向
綜述參考文獻(xiàn)
致謝
【參考文獻(xiàn)】
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本文編號(hào)：
2065739
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