本文選題：卵巢上皮性癌 + 最大耐受劑量化療�。� 參考：《河北醫(yī)科大學》2014年碩士論文

【摘要】：目的： 利用人卵巢上皮性癌（簡稱卵巢癌）細胞株SKOV3建立裸鼠異種移植瘤模型，分別給予順鉑（DDP）最大可耐受劑量化療(maximum tolerateddose chemotherapy, MTD)及順鉑低劑量節(jié)拍化療（low-dose metronomicchemotherapy，LDM），觀察兩種化療模式對荷人卵巢癌細胞SKOV3裸鼠及其移植瘤的影響，并探討其對乳腺癌耐藥蛋白（breast cancer resistantprotein，BCRP）、肺耐藥蛋白（lung resistance protein，LRP）、p-糖蛋白（P-glycoprotein，P-gp）、增殖細胞核抗原Ki-67及腫瘤干細胞標記物CD133表達水平的影響。 方法： 1建立裸鼠異體移植瘤模型：體外培養(yǎng)SKOV3細胞，將1×107細胞重懸于0.2ml PBS中，接種于6-8周齡雌性裸鼠大腿外側皮下，建立裸鼠異體移植瘤模型。 2當腫瘤體積達到150mm3-200mm3時，將36只裸鼠隨機分為三組，每組12只：順鉑最大可耐受劑量組（MTD-DDP組），DDP3mg/kg,1次/3日，腹腔注射，共6次；順鉑低劑量節(jié)拍化療組（LDM-DDP組），，DDP1mg/kg,1次/日，腹腔注射，共18次；對照組，等量生理鹽水腹腔注射。 3化療期間觀察裸鼠的一般情況（皮膚顏色、皮下脂肪含量、活動情況）和腫瘤生長狀況，每3天測量裸鼠皮下移植瘤體積、記錄體重及鼠糧重量，每6天采尾靜脈血液進行白細胞計數（WBC）。化療中期（自化療當日起第9天）和化療結束（自化療當日起第18天）分別計算兩化療組抑瘤率。 4化療中期及化療結束，每組分別采用戊巴比妥過量麻醉處死6只裸鼠，無菌條件下剝除裸鼠皮下移植瘤，使用Western Blot方法檢測各組移植瘤組織中P-gp、BCRP、LRP、Ki-67、CD133的表達。取出裸鼠內臟進行HE染色，觀察裸鼠內臟有無微小轉移灶及有無組織形態(tài)學改變。 5統(tǒng)計方法：實驗數據采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件處理，計量資料以均數±標準差(x±s)表示，三組以上比較采用方差分析，組間差異比較采用LSD法、Dunnett T3法；兩組數據比較采用t檢驗；以P0.05作為有統(tǒng)計學差異的標準。 結果： 1裸鼠皮下移植瘤生長情況 自化療第1日至18日，對照組、MTD-DDP組、LDM-DDP組裸鼠皮下移植瘤處于持續(xù)增大狀態(tài)，且化療結束與化療中期比較，各組移植瘤體積均增大（P=0.000，P=0.001，P=0.010）。但兩化療組皮下移植瘤增長速度較對照組明顯減慢。化療第6天，與對照組比較，MTD-DDP組、LDM-DDP組裸鼠皮下移植瘤增長速度明顯減慢，LDM-DDP組移植瘤體積小于對照組（P=0.022），但MTD-DDP組移植瘤體積與對照組比較無統(tǒng)計學差異（P=0.215）�；�7天至18天，MTD-DDP組和LDM-DDP組皮下移植瘤增長速度均明顯減慢�；熤衅�，MTD-DDP組、LDM-DDP組移植瘤體積均小于對照組（P=0.047，P=0.002），LDM-DDP組與MTD-DDP組移植瘤體積差異無統(tǒng)計學意義（P=0.158）。兩組抑瘤率分別為31.32%、47.39%。化療結束，MTD-DDP組、LDM-DDP組移植瘤體積均小于對照組（P=0.020，P=0.000），其中LDM-DDP組移植瘤體積顯著小于MTD-DDP組（P=0.004）。MTD-DDP組抑瘤率為27.00%，LDM-DDP組抑瘤率為54.29%。 2裸鼠一般狀況及化療副反應評估 2.1裸鼠一般狀況評估 自化療第1日至18日，各組裸鼠一般狀況良好，未發(fā)現活動減少及便秘或腹瀉。與對照組比較，MTD-DDP組、LDM-DDP組裸鼠進食量減少、皮膚變淺、皮下脂肪減少。化療中期，MTD-DDP組、LDM-DDP組裸鼠進食量均低于對照組（P=0.001，P=0.000），LDM-DDP組裸鼠進食量與MTD-DDP組比較無統(tǒng)計學差異（P=0.657）。化療結束，MTD-DDP組、LDM-DDP組裸鼠進食量均低于對照組（P=0.000，P=0.000），LDM-DDP組與MTD-DDP組裸鼠進食量差異無統(tǒng)計學意義（P=0.834）。 2.2裸鼠化療副反應評估 自化療第1日至18日，MTD-DDP組和LDM-DDP組裸鼠體重都出現了不同程度下降�；熤衅�，MTD-DDP組、LDM-DDP組裸鼠體重均低于對照組（P=0.023，P=0.002），而LDM-DDP組裸鼠體重與MTD-DDP組比較無統(tǒng)計學差異（P=0.322）�；熃Y束，MTD-DDP組、LDM-DDP組裸鼠體重均低于對照組（P=0.015，P=0.002），LDM-DDP組與MTD-DDP組比較裸鼠體重差異無統(tǒng)計學意義（P=0.399）。 自化療第1日至18日，MTD-DDP組裸鼠白細胞呈現持續(xù)下降趨勢。化療6日，對照組、MTD-DDP組、LDM-DDP組裸鼠白細胞差異無統(tǒng)計學意義（P=0.930，F=0.073）。化療12日，MTD-DDP組裸鼠白細胞顯著低于對照組（P=0.006），而LDM-DDP組裸鼠白細胞與對照組比較差異無統(tǒng)計學意義（P=0.192）；化療18天，與對照組及LDM-DDP組比較，MTD-DDP組裸鼠白細胞顯著降低（P=0.010，P=0.029）。 化療中期及化療結束，三組裸鼠內臟均未見微小轉移病灶。化療中期MTD-DDP組有1只裸鼠出現肝細胞脂肪樣變性，化療結束有2只出現肝細胞脂肪樣變性，而對照組和LDM-DDP組裸鼠內臟未見明顯異常。 3移植瘤組織中增殖細胞核抗原Ki-67的蛋白表達 化療中期，MTD-DDP組、LDM-DDP組均可以抑制腫瘤細胞增殖，其Ki-67蛋白表達均顯著低于對照組（P=0.004，P=0.000），但LDM-DDP組Ki-67蛋白表達水平與MTD-DDP組比較差異無統(tǒng)計學意義（P=0.080）。 化療結束，LDM-DDP組可顯著抑制腫瘤細胞增殖，其Ki-67蛋白表達顯著低于對照組（P=0.003）。MTD-DDP組Ki-67蛋白表達與對照組及LDM-DDP組比較差異無統(tǒng)計學意義（P=0.126，P=0.079）。 4移植瘤組織中腫瘤干細胞標記物CD133的蛋白表達 化療中期，對照組、MTD-DDP組、LDM-DDP組CD133蛋白表達差異無統(tǒng)計學意義（P=0.190，F=1.858）。 化療結束，MTD-DDP組、LDM-DDP組CD133蛋白表達均顯著高于對照組（P=0.000，P=0.037），而LDM-DDP組CD133表達顯著低于MTD-DDP組（P=0.011）。 5移植瘤組織中耐藥相關蛋白的表達 5.1BCRP蛋白表達 化療中期，MTD-DDP組、LDM-DDP組BCRP蛋白表達均高于對照組（P=0.000，P=0.001），但LDM-DDP組BCRP蛋白表達水平與MTD-DDP組比較差異無統(tǒng)計學意義（P=0.098）。 化療結束，MTD-DDP組、LDM-DDP組BCRP蛋白表達均高于對照組（P=0.000，P=0.004）；而LDM-DDP組BCRP蛋白表達水平顯著低于MTD-DDP組（P=0.001）。與化療中期比較，化療結束時對照組、MTD-DDP組、LDM-DDP組BCRP蛋白表達均增加（P=0.014，P=0.000，P=0.011）。 5.2LRP蛋白表達 化療中期，MTD-DDP組、LDM-DDP組LRP蛋白表達均高于對照組（P=0.000，P=0.000），LDM-DDP組LRP蛋白表達與MTD-DDP組比較差異無統(tǒng)計學意義（P=0.060）。 化療結束，MTD-DDP組、LDM-DDP組LRP蛋白表達均高于對照組（P=0.000，P=0.003），LDM-DDP組LRP蛋白表達與MTD-DDP組比較無統(tǒng)計學差異（P=0.274）。 5.3P-gp蛋白表達 化療中期，MTD-DDP組、LDM-DDP組P-gp蛋白表達均高于對照組（P=0.000，P=0.006），LDM-DDP組P-gp蛋白表達與MTD-DDP組比較差異無統(tǒng)計學意義（P=0.075）。 化療結束，MTD-DDP組、LDM-DDP組P-gp蛋白表達均高于對照組（P=0.002，P=0.038），LDM-DDP組P-gp蛋白表達與MTD-DDP組比較差異無統(tǒng)計學意義（P=0.171）。 結論： 1在累計藥物劑量相同的情況下，與MTD模式比較，LDM模式抑制荷人卵巢癌SKOV3細胞裸鼠皮下移植瘤生長的效果更好，而骨髓抑制更輕。 2在LDM模式下，卵巢癌移植瘤中腫瘤干細胞標記物、耐藥相關蛋白表達水平顯著低于MTD模式，提示MTD模式較LDM模式更易使殘余瘤灶中具有部分腫瘤干細胞特性且耐藥相關蛋白高表達的瘤細胞富集，即殘余瘤對化療抵抗性更強，更難治療。LDM是一種可以降低復發(fā)、提高化療敏感性的新的有潛力的治療模式。
[Abstract]:Objective:
The xenograft tumor model of nude mice was established by using human ovarian epithelial cancer cell line SKOV3, and the maximum tolerable dose chemotherapy (maximum tolerateddose chemotherapy, MTD) and low dose of cisplatin (low-dose metronomicchemotherapy, LDM) were given respectively, and the two chemotherapy models were observed for human ovarian cancer cells. The effects of SKOV3 nude mice and their xenografts were investigated and their effects on the drug resistance protein (breast cancer resistantprotein, BCRP), lung resistance protein (lung resistance protein, LRP), p- glycoprotein (P-glycoprotein, P-gp), proliferating cell nuclear antigen (PCNA) and tumor stem cell markers were investigated.
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本文編號：2029308