本文選題：卵巢癌 + 干細胞��； 參考：《大連醫(yī)科大學》2017年碩士論文

【摘要】：背景:卵巢癌是婦科三大惡性腫瘤之一,在我國的發(fā)病率居第三位,目前卵巢癌是婦科腫瘤中死亡率最高的惡性腫瘤[1]。造成卵巢癌高死亡率的主要原因是由于70%的患者診斷時都已是中晚期,這些患者又會有70%以上出現(xiàn)腫瘤的復發(fā);并且很多患者發(fā)生耐藥復發(fā)而最終導致死亡[2]。近年來相關研究提出了卵巢癌干細胞的觀點,認為卵巢癌干細胞的存在可能是卵巢癌耐藥復發(fā)的重要因素之一,干細胞的存在增強了腫瘤的形成能力與耐藥性[3]。迄今為止,卵巢癌干細胞的研究一直具有挑戰(zhàn)性,如何鑒定這類具有特殊生物學行為的細胞群成為目前干細胞研究的重點和難點;所以尋找到不同腫瘤干細胞表面表達的不同生物標記物成為鑒定干細胞的重要方法之一。目前關于卵巢癌干細胞相關標記物的研究主要有CD133、CD24、CD44、CD117和ALDH1等。相關文獻報道顯示[4],目前CD133、CD44以及CD117已被廣泛認為是卵巢癌干細胞的特異性標記物,而CD24及ALDH1并沒有明確定論。ALDH1在許多實體瘤中已經(jīng)被認為是腫瘤干細胞的標記物,而在卵巢癌干細胞中卻尚無定論,但是目前在部分人類卵巢癌組織與細胞系中都能檢測到ALDH1的表達,并且在卵巢癌細胞系中,ALDH1表達的細胞更具有化學藥物抵抗性,與ALDH1陰性細胞相比,ALDH1表達的腫瘤細胞生長更快[5]。所以ALDH1是否也能夠和CD133一樣成為卵巢癌干細胞的特異性標記物,成為目前研究的熱點。目前研究干細胞常用的實驗方法是無血清培養(yǎng)法誘導培養(yǎng)具有干細胞特性的懸浮細胞球,因此本實驗通過該方法培養(yǎng)具有干細胞特性的懸浮細胞球,采用免疫熒光檢測懸浮細胞球中CD133、ALDH1的表達情況,與細胞系比較二者表達的差異,從而初步推斷ALDH1能否成為卵巢癌干細胞的標記物。目的:從細胞系及耐藥細胞株中通過無血清法培養(yǎng)出懸浮細胞球,即卵巢癌干細胞;檢測CD133、ALDH1在懸浮細胞球與細胞系、耐藥細胞株中的表達情況,推斷ALDH1能否與CD133一致成為卵巢癌干細胞有優(yōu)勢的標記物。方法:選擇卵巢癌細胞系SKOV3、Hey-A8、OVCAR-8,篩選出成球較好的細胞系。并建立其耐藥細胞株Hey-A8-DDP、OVCAR-8-DDP。用Western-blot的方法檢測卵巢癌細胞系Hey-A8、OVCAR-8及耐藥株Hey-A8-DDP、OVCAR-8-DDP中CD133、ALDH1的表達。將卵巢癌細胞系Hey-A8、OVCAR-8及耐藥細胞株Hey-A8-DDP、OVCAR-8-DDP通過無血清培養(yǎng)法誘導培養(yǎng)懸浮細胞球。采用免疫熒光染色法分別檢測細胞系和耐藥細胞株培養(yǎng)出來的懸浮細胞球CD133、ALDH1的表達,并且與細胞系比較二者表達的差異。結果:1.卵巢癌細胞系Hey-A8和OVCAR-8及其耐藥細胞株Hey-A8-DDP、OVCAR-8-DDP通過無血清培養(yǎng)法成功培養(yǎng)出懸浮球細胞,觀察至第8天,與細胞系Hey-A8、OVCAR-8相比,其對應的耐藥細胞株的懸浮細胞球體積更大,形態(tài)更規(guī)則,成球性更強。2、卵巢癌耐藥細胞株Hey-A8-DDP中ALDH1的表達較卵巢癌細胞系Hey-A8高。卵巢癌細胞系OVCAR-8及耐藥細胞株OVCAR-8-DDP中ALDH1無明顯表達;上述細胞系及耐藥細胞株均未檢測到CD133的表達。3、卵巢癌細胞系Hey-A8、OVCAR-8及其耐藥細胞株Hey-A8-DDP、OVCAR-8-DDP培育出的懸浮細胞球經(jīng)免疫熒光染色后,CD133、ALDH1均明顯表達,而在兩種耐藥細胞株的懸浮細胞球中二者均超過相對應的細胞系而呈更高表達;同時CD133、ALDH1在OVCAR-8細胞系及耐藥細胞株OVCAR-8-DDP中及其細胞球的差別的更為明顯。結論:1、卵巢癌細胞系Hey-A8和OVCAR-8及耐藥細胞株Hey-A8-DDP、OVCAR-8-DDP中均篩選出卵巢癌干細胞,且在耐藥細胞株中卵巢癌干細胞更為富集,從而推斷卵巢癌干細胞的存在是卵巢癌耐藥復發(fā)的重要原因之一。2、ALDH1在培育出的能夠代表卵巢癌干細胞的懸浮細胞球中高表達,而在細胞系與耐藥細胞株中部分表達或不表達,提示ALDH1可能與CD133一樣,成為卵巢癌干細胞有意義的生物學標記物。3、CD133、ALDH1在所有培育出的懸浮細胞球中均共同高表達,二者聯(lián)合檢測,可增加卵巢癌干細胞篩選的成功率。
[Abstract]:Background : Ovarian cancer is one of the three major malignant tumors of gynecology . In China , the incidence of ovarian cancer is the third , and ovarian cancer is one of the most common malignant tumors in gynecological tumors . The primary cause of high mortality in ovarian cancer was that 70 % of patients were diagnosed with late middle and late stages , with more than 70 % of these patients experiencing recurrent tumor recurrence , and many patients experienced drug - resistant relapse and eventually led to death . In recent years , the research of ovarian cancer stem cells suggests that the presence of ovarian cancer stem cells may be one of the most important factors in ovarian cancer recurrence , and the presence of stem cells enhances the formation and drug resistance of ovarian cancer cells . So far , the research of ovarian cancer stem cells has been challenging . How to identify these cells with special biological behavior has become the focus and difficulty of stem cell research . The expression of CD133 and ALDH1 in ovarian cancer cell lines were investigated by means of immunofluorescence staining . The ovarian cancer stem cells were screened from OVCAR - 8 - DDP , and the ovarian cancer stem cells were more enriched in the drug resistant cell lines .
【學位授予單位】：大連醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R737.31

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 方峻,魏文寧,劉仲萍,宋善俊;人組織因子基因表達載體的構建及其在人卵巢癌細胞系中的表達[J];中國實驗血液學雜志;2003年06期

2 吳尚輝,鄧朝暉,祝斌,顧煥華,羅學濱,祝和成;一株新的卵巢癌細胞系的建立及其生物學特性分析[J];實用預防醫(yī)學;2005年01期

3 李曉艷;王澤華;;卵巢癌細胞系中環(huán)氧化酶2的表達研究[J];邯鄲醫(yī)學高等�？茖W校學報;2006年02期

4 程繼文;蔡捷;鄺曉聰;陳心秋;唐步堅;黃清華;劉燕;李力;;腹水來源卵巢癌細胞系的建立及其生物學特性[J];癌癥;2009年03期

5 徐紅梅;夏美慧;梁作文;鐘加滕;趙雪儉;何津;;卵巢癌細胞系中差異表達蛋白的相關性研究[J];中國婦幼保健;2010年07期

6 盧建,張金山,牟瀚舟,許沈華;糖皮質激素對人卵巢癌細胞系增殖的抑制作用[J];中華婦產(chǎn)科雜志;1996年03期

7 徐明娟,劉宇健,宋亮年,王昭梅,張瓊;視黃酸對人卵巢癌細胞系3AO增殖分化的影響[J];第二軍醫(yī)大學學報;1997年05期

8 顧琳慧;鄭智國;陳魯;許沈華;;高低轉移人乳頭狀漿液性卵巢癌細胞系蛋白表達差異及其意義[J];中國實用婦科與產(chǎn)科雜志;2009年11期

9 王晶;雷利娜;尹洪麗;;透明質酸結合蛋白1在人卵巢癌細胞系中表達及其與紫杉醇敏感性的關系[J];中國實用婦科與產(chǎn)科雜志;2012年01期

10 王建六，錢和年，，李文錦，馮捷;人卵巢癌細胞系在不同品系免疫小鼠腎包膜下生長規(guī)律的探討[J];現(xiàn)代婦產(chǎn)科進展;1995年04期

相關會議論文 前10條

1 鄭智國;高

本文編號：2025483