本文選題：卵巢癌細胞 + IL-17D��； 參考：《河北醫(yī)科大學》2014年碩士論文

【摘要】：目的：以基因轉(zhuǎn)染的方法建立能穩(wěn)定表達和分泌IL-17D的人上皮性卵巢癌細胞株，通過檢測基因轉(zhuǎn)染前后卵巢癌細胞中IL-17D的表達差異以及外源性IL-17D轉(zhuǎn)染對卵巢癌細胞表面NKG2D配體MICA的影響，探討IL-17D對人卵巢癌細胞及固有免疫的體外影響。 方法： 1體外培養(yǎng)人卵巢漿液性乳頭狀腺癌細胞SKOV3、空載體對照細胞SKOV3/vector、外源性人IL-17D基因穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞SKOV3/IL-17D及順鉑耐藥細胞SKOV3/CDDP；以及人卵巢腺癌細胞OVCAR3、空載體對照細胞OVCAR3/vector、IL-17D基因穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞OVCAR3/IL-17D，連續(xù)傳代培養(yǎng)，于倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)。 2MTT法檢測不同濃度的順鉑對SKOV3及SKOV3/CDDP的抑制率，計算半數(shù)抑制濃度IC50及耐藥細胞SKOV3/CDDP的耐藥指數(shù)。 3MTT法檢測不同時間點（12、24、48、72、96h）7種上皮性卵巢癌細胞的增殖情況，繪制生長曲線。 4提取7種上皮性卵巢癌細胞的RNA，利用real-time PCR在RNA水平檢測7種卵巢癌細胞IL-17D的表達情況。 5應用流式細胞術(shù)（FCM）檢測NKG2D主要活化性配體MICA在7種上皮性卵巢癌細胞表面的表達水平，以熒光指數(shù)（FI）表示MICA蛋白表達的相對含量。FI=試驗品均道值/對照品均道值，均道值=lg(x-mode值)×340。 結(jié)果： 1人卵巢漿液性乳頭狀腺癌SKOV3/CDDP耐藥指數(shù)=SKOV3/CDDP的IC50值/SKOV3的IC50值，即36.09/7.83=4.61，可進行耐藥試驗。 2人卵巢漿液性乳頭狀腺癌SKOV3細胞、人卵巢腺癌OVCAR3細胞分別組內(nèi)兩兩比較，轉(zhuǎn)染組生長速度明顯快于未轉(zhuǎn)染組與空載體組（P0.05），差異有統(tǒng)計學意義；未轉(zhuǎn)染組與空載體組間無明顯差異（P0.05）；耐藥組SKOV3/CDDP細胞生長速度明顯快于親本未轉(zhuǎn)染組（P0.05），差異有統(tǒng)計學意義；耐藥組SKOV3/CDDP與轉(zhuǎn)染組SKOV3/IL-17D比較無明顯差異（P0.05）。 3qRT-PCR分別檢測SKOV3、SKOV3/CDDP、SKOV3/vector、SKOV3/IL-17D及OVCAR3、OVCAR3/vector、OVCAR3/IL-17D七種細胞內(nèi)IL-17D的表達。以2-ΔΔCт表示IL-17D的相對表達量。 以SKOV3細胞內(nèi)IL-17D的表達為對照組，我們通過qRT-PCR可以檢測出SKOV3/vector、SKOV3/IL-17D、SKOV3/CDDP細胞內(nèi)IL-17D表達量分別為1.13±0.24、113.11±24.45、91.96±18.13，經(jīng)單因素方差分析示組間比較差異有統(tǒng)計學意義（F=45.40，P=0.0000.05）；組內(nèi)比較：SKOV3與SKOV3/vector、SKOV3/IL-17D與SKOV3/CDDP比較差異無統(tǒng)計學意義（P0.05），其余各組間比較差異均有統(tǒng)計學意義（P0.05）。 以O(shè)VCAR3細胞內(nèi)IL-17D的表達為對照組，我們通過qRT-PCR可以檢測出OVCAR3/vector、OVCAR3/IL-17D細胞IL-17D表達量分別為1.10±0.07、182.78±16.37，經(jīng)單因素方差分析示組間比較差異有統(tǒng)計學意義（F=369.89，P=0.0000.05）；組內(nèi)比較：OVCAR3與OVCAR3/vector比較差異無統(tǒng)計學意義（P0.05），其余各組間比較差異均有統(tǒng)計學意義（P0.05）。 結(jié)果顯示：SKOV3/IL-17D及OVCAR3/IL-17D內(nèi)IL-17D的含量均高于其未轉(zhuǎn)染組和空載體對照組；耐藥細胞SKOV3/CDDP內(nèi)IL-17D的含量明顯高于其親本細胞SKOV3。 4FCM檢測7種上皮性卵巢癌細胞表面MICA的表達。 SKOV3細胞組：經(jīng)單因素方差分析顯示組間比較差異有統(tǒng)計學意義（F=598.61，，P=0.000.05），組內(nèi)多重比較，SKOV3與SKOV3/vector、SKOV3/IL-17D與SKOV3/CDDP比較差異無統(tǒng)計學意義（P0.05），其余各組間比較差異均有統(tǒng)計學意義（P0.05）。 OVCAR3組：組間比較差異有統(tǒng)計學意義（F=1032.37，P=0.000.05），組內(nèi)比較：OVCAR3與OVCAR3/vector比較差異無統(tǒng)計學意義（P0.05），其余各組間比較差異均有統(tǒng)計學意義（P0.05）。 結(jié)果顯示：IL-17D轉(zhuǎn)染后細胞表面MICA的表達較轉(zhuǎn)染前降低；SKOV3/CDDP耐藥株細胞表面MICA表達量低于親本細胞株。 結(jié)論： 1我們可以在體外獲得IL-17D特異性表達的人卵巢癌細胞株。 2人卵巢漿液性乳頭狀腺癌的耐藥細胞SKOV3/CDDP內(nèi)IL-17D的表達量遠高于其親本細胞SKOV3，推測IL-17D可能與細胞耐藥性有關(guān)，其機制有待進一步探討。 3轉(zhuǎn)染IL-17D后的細胞增殖速度明顯加快，推測IL-17D可能具有促進瘤細胞生長作用；且IL-17D表達量較高的細胞都伴隨著其表面MICA表達的下降，細胞表面MICA的下調(diào)可導致NK細胞對癌細胞的殺傷作用減弱，從而為今后探討卵巢癌的靶向治療及免疫逃逸提供理論依據(jù)。
[Abstract]:Objective: to establish a human epithelial ovarian cancer cell line that can express and secrete IL-17D by gene transfection. By detecting the difference of IL-17D expression in ovarian cancer cells before and after gene transfection and the effect of exogenous IL-17D transfection on the NKG2D ligand MICA on the surface of ovarian cancer cells, IL-17D has been explored for human ovarian cancer cells and inherent immunity. In vitro influence.
Method錛

本文編號：2004998