本文選題：孕期 + 慢性應(yīng)激��； 參考：《新疆醫(yī)科大學(xué)》2014年博士論文

【摘要】：目的：通過建立孕期慢性不可預(yù)知溫和應(yīng)激(Chronic unpredictable mild stress, CUMS)大鼠模型,在行為學(xué)、組織學(xué)、分子基因不同水平下,系統(tǒng)的觀察大鼠孕期處于應(yīng)激狀態(tài)對母體生殖功能及母體、子代的學(xué)習(xí)記憶能力、情緒的影響,且從海馬神經(jīng)遞質(zhì)和可塑性出發(fā),探討損傷的可能機制,并經(jīng)過豐富環(huán)境來進行學(xué)習(xí)記憶能力損傷干預(yù)的機制探討,為深入理解和預(yù)測應(yīng)激的遺傳性危害及下一步人群流行病學(xué)研究及干預(yù)提供科學(xué)依據(jù)。方法：選用Wistar雌性成年大鼠20只,隨機分為模型組和對照組,模型組連續(xù)21天采用單籠飼養(yǎng)和慢性輕度不可預(yù)知應(yīng)激造模(在第3天開始交配)；1)動態(tài)觀察母鼠體重變化,采用放射免疫法測定血漿皮質(zhì)酮水平,敞箱實驗測定行為學(xué)改變,糖水消耗實驗測定液體消耗,檢測生殖有關(guān)的基本情況；測定子鼠血漿皮質(zhì)酮濃度,采用Morris水迷宮、Y迷宮實驗測定子鼠學(xué)習(xí)記憶能力,利用液體消耗實驗、敞箱實驗、懸尾實驗測定子鼠情緒變化的測定,并分析其變化；2)采用HE染色和電鏡進行子鼠腦海馬形態(tài)學(xué)觀察,ELISA方法測定腦海馬組織各類中樞神經(jīng)遞質(zhì)含量及活性,分別采用實時熒光定量RT-PCR和Western Blotting測定海馬組織中神經(jīng)營養(yǎng)因子BDNF、IGF-Ⅱ、核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB,海馬中突觸可塑性相關(guān)蛋白Arc表達情況,并分析其相關(guān)性；3)給予孕期慢性應(yīng)激及對照組子代組分別豐富環(huán)境干預(yù),進行行為學(xué)、情緒、腦海馬神經(jīng)遞質(zhì)含量及突觸相關(guān)蛋白表達情況測定,分析其效果。結(jié)果：1)模型組母鼠體重與對照組存在統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),模型組大鼠體重增高率低于對照組；模型組母鼠皮質(zhì)酮與對照組存在統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),模型組母鼠皮質(zhì)酮水平隨應(yīng)激時間增長有大幅度變化；除糞便粒數(shù)外,模型組母鼠行為學(xué)各指標與對照組存在統(tǒng)計學(xué)差異(P均0.05),母鼠各行為學(xué)指標變化與應(yīng)激時間長短有關(guān)系,時間與應(yīng)激因素之間不存在交互關(guān)系(P均0.05)；模型組母鼠純水消耗與對照組未發(fā)現(xiàn)存在統(tǒng)計學(xué)差異,而兩組糖水消耗、總液體消耗和1%蔗糖偏愛存在統(tǒng)計學(xué)差異(P均0.05),表明應(yīng)激對孕期大鼠液體消耗指標有影響；時間因素有統(tǒng)計學(xué)意義(P均0.05),母鼠液體消耗變化與應(yīng)激時間長短有關(guān)系；每個時間點的比較：正常對照組和模型組的基線總液體消耗、糖水消耗、純水消耗、糖水偏愛百分比差異不大,均無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。應(yīng)激第7、14天和21天,模型組大鼠液體消耗各指標與對照組差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；模型組所產(chǎn)子鼠只數(shù)及孕天數(shù)與對照組差異存在統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),模型子鼠組只數(shù)及孕天數(shù)均低于對照子鼠組；2)在PND28和PND42時,模型子鼠組體重與對照子鼠組差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；模型子鼠組血漿皮質(zhì)酮與對照子鼠組差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05); Morris水迷宮實驗：模型子鼠組在水迷宮中逃避潛伏期與對照子鼠組比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),時間因素有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),時間與應(yīng)激因素之間不存在交互關(guān)系(P0.05),模型子鼠組逃避潛伏期時間比對照子鼠組長,且有隨時間縮短的趨勢；跨平臺次數(shù)兩組間存在統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05);Y迷宮實驗：模型子鼠組在Y迷宮試驗中學(xué)會所需的訓(xùn)練次數(shù)、記憶保持測試正確反應(yīng)率與對照子鼠組比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；行為學(xué)實驗：除清潔次數(shù)外,模型子鼠組行為學(xué)各指標與對照子鼠組存在統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)；液體消耗情況：模型子鼠組與對照子鼠組在液體消耗實驗中糖水消耗和1%蔗糖偏愛百分比存在統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),而在純水消耗和總液體消耗方面未發(fā)現(xiàn)存在統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。懸尾實驗：模型子鼠組與對照子鼠組在懸尾實驗中靜止時間和掙扎次數(shù)均存在統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)；3)子鼠腦海馬形態(tài)結(jié)構(gòu)改變,超微結(jié)構(gòu)異常；模型子鼠組與對照子鼠組海馬膽堿能神經(jīng)遞質(zhì)ACh含量、ChAT和AChE活性均存在統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),模型子鼠組ACh含量、ChAT活性下降,AChE活性上升；模型子鼠組與對照子鼠組海馬單胺類神經(jīng)遞質(zhì)NE、DA和5-HT均存在統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),模型子鼠組三個單胺類神經(jīng)遞質(zhì)均下降；模型子鼠組與對照子鼠組海馬的Glu和GABA均存在統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),模型子鼠組較對照子鼠組興奮性神經(jīng)遞質(zhì)Glu降低、而抑制性GABA含量升高；模型子鼠組與對照子鼠組海馬的NO存在統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),模型子鼠組NO含量降低；4)RT-PCR提示：模型子鼠組與對照子鼠組海馬組織的BDNF mRNA、IGF-Ⅱ mRNA和NF-κBmRNA差異均存在統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),模型子鼠組BDNF mRNA、IGF-Ⅱ mRNA和NF-κB mRNA表達降低,Arc mRNA差異未發(fā)現(xiàn)存在統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。Western Blotting檢測發(fā)現(xiàn)：模型子鼠組與對照子鼠組海馬組織的BDNF、IGF-Ⅱ、Arc和NF-κB蛋白表達差異均存在統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),與對照子鼠組相比,模型子鼠組BDNF、IGF-Ⅱ、Arc和NF-κB表達降低；5)相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)：子鼠在水迷宮中的逃避潛伏期和Y迷宮中的訓(xùn)練次數(shù)與母鼠皮質(zhì)酮存在正相關(guān)(P0.05)、與母鼠水平運動、垂直運動和1%蔗糖偏愛存在負相關(guān)(P0.05)；子鼠在水迷宮中的跨平臺次數(shù)和Y迷宮中的正確反應(yīng)率與母鼠皮質(zhì)酮存在負相關(guān)(P0.05),與水平運動、垂直運動和1%蔗糖偏愛存在負相關(guān)(P0.05)；子鼠在水迷宮中的逃避潛伏期和Y迷宮中的訓(xùn)練次數(shù)與子鼠皮質(zhì)酮、海馬中GABA存在正相關(guān)(P0.05)、與子鼠ACh、ChAT、NE、DA、5-HT和NO存在負相關(guān)(P0.05)；子鼠在水迷宮中的跨平臺次數(shù)和Y迷宮中的正確反應(yīng)率與子鼠皮質(zhì)酮、海馬中GABA存在負相關(guān)(P0.05)、與子鼠ACh、ChAT、NE、DA、5-HT和NO存在正相關(guān)(P0.05)；除水迷宮中的跨平臺次數(shù)和Y迷宮中訓(xùn)練次數(shù)與IGF-Ⅱ蛋白表達未發(fā)現(xiàn)存在相關(guān)外(P0.05),其他指標均發(fā)現(xiàn)存在相關(guān)性：子鼠在水迷宮中的逃避潛伏期和Y迷宮中的訓(xùn)練次數(shù)均與突觸各相關(guān)蛋白存在負相關(guān)性(P0.05)；子鼠在水迷宮中的跨平臺次數(shù)和Y迷宮中的正確反應(yīng)率與突觸各相關(guān)蛋白存在負相關(guān)性(P0.05)；6)豐富環(huán)境對子鼠體重的影響：模型子鼠組和模型豐富環(huán)境組體重低于對照和對照豐富環(huán)境組子鼠體重。經(jīng)歷了豐富環(huán)境后,四組體重存在統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)；豐富環(huán)境對子鼠血漿皮質(zhì)酮水平影響：四組血漿皮質(zhì)酮同樣存在統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),模型子鼠組分別與其他各組差異存在統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),對照豐富環(huán)境組子鼠血漿皮質(zhì)酮最低,而模型子鼠組是最高的；7)豐富環(huán)境下子鼠學(xué)習(xí)記憶能力變化：四組在Morris水迷宮中逃避潛伏期與對照子鼠組差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),兩豐富環(huán)境組逃避潛伏期增長,跨平臺次數(shù)四組間存在統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),對照豐富環(huán)境組子鼠跨平臺次數(shù)最多,而模型子鼠組是最少；四組子鼠在Y迷宮試驗中學(xué)習(xí)、記憶次數(shù)比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),進行豐富環(huán)境,學(xué)習(xí)、記憶能力就會有所提高；四組子鼠在水平運動和垂直運動方面比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),進行豐富環(huán)境,水平運動和垂直運動能力就會有所提高；四組子鼠在純水消耗、糖水消耗和1%蔗糖偏愛百分比比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),進行豐富環(huán)境,糖水消耗就會有所增加；四組在靜止時間和掙扎次數(shù)上比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),模型子鼠組水平靜止時間最長、掙扎次數(shù)最少,而模型子鼠組只要進行了豐富環(huán)境,靜止時間就會縮短、掙扎次數(shù)增多；8)豐富環(huán)境對各組子鼠神經(jīng)遞質(zhì)影響：四組子鼠在海馬組織膽堿能神經(jīng)遞質(zhì)ACh含量、ChAT和AChE活性,單胺類神經(jīng)遞質(zhì)NE、DA和5-HT含量及氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)Glu和GABA含量均存在統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),豐富環(huán)境對其均有影響；四組子鼠在海馬組織NO含量方面均存在統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),豐富環(huán)境后,NO含量升高；9)豐富環(huán)境對蛋白表達影響：四組子鼠海馬組織的BDNF mRNA、 IGF-Ⅱ mRNA和NF-κB mRNA及蛋白表達差異均存在統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),經(jīng)過豐富環(huán)境后,蛋白表達增高。結(jié)論：1)孕期應(yīng)激可誘發(fā)實驗?zāi)甘笮袨�、活動�?xí)性和生育能力有影響；2)孕期慢性應(yīng)激致子鼠出現(xiàn)高應(yīng)激狀態(tài),空間、工作學(xué)習(xí)記憶能力下降,情緒出現(xiàn)類似焦慮、抑郁現(xiàn)象；3)孕期慢性應(yīng)激影響子鼠學(xué)習(xí)記憶能力下降與母體及子代血漿中皮質(zhì)酮升高均有關(guān)；4)孕期慢性應(yīng)激對子鼠學(xué)習(xí)記憶能力下降與海馬組織中樞神經(jīng)遞質(zhì)變化及BDNF、IGF-Ⅱ、 Arc和NF-κB蛋白表達降低有關(guān)；5)豐富環(huán)境能改善子鼠的學(xué)習(xí)記憶能力,使大鼠的活動度增高、對新環(huán)境的探究行為和適應(yīng)能力增高、大鼠快感也有所增加；6)豐富環(huán)境提高孕期慢性應(yīng)激子鼠學(xué)習(xí)記憶能力、情緒變化與子鼠血漿中皮質(zhì)酮、子鼠海馬中中樞神經(jīng)遞質(zhì)分泌、海馬組織神經(jīng)營養(yǎng)因子BDNF、IGF-Ⅱ、核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB、海馬中突觸可塑性相關(guān)蛋白Arc mRNAs和蛋白表達均有所增加有關(guān)。
[Abstract]:Objective : To investigate the effects of stress on maternal reproductive function and maternal and offspring learning and memory abilities and mood in rats at different levels of ethology , histology and molecular genes by establishing a rat model of chronic unpredictable mild stress ( CUMS ) .
1 ) To observe the changes of the weight of the mother and mouse dynamically , and the plasma cortisol level was measured by radioimmunoassay . The behavior change was measured by the open - box experiment , the consumption of liquid was measured by the experiment of sugar water consumption , and the basic condition of reproduction was detected ;
The plasma concentrations of cortical ketone were determined by Morris water maze and Y maze test to determine the learning and memory ability of the mice . The changes of emotion were measured by liquid consumption experiment , open - box experiment and suspension tail experiment .
The expression of BDNF , IGF - 鈪，

本文編號：2000782