發(fā)布時間：2018-05-20 11:17

  本文選題：人參皂苷S-Rh2 + 卵巢癌�。� 參考：《吉林大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目的:研究S-Rh2誘導(dǎo)的SKOV3細(xì)胞株自噬變化,初步探索PI3K/AKT/m TOR通路在本實驗中起到的調(diào)控作用,并進(jìn)一步探討其調(diào)控機(jī)制。方法:1.CCK8法測定S-Rh2單獨(dú)應(yīng)用及以PI3K/m TOR阻斷劑預(yù)處理后對SKOV3細(xì)胞的增殖抑制作用。2.觀察不同藥物處理條件下SKOV3細(xì)胞形態(tài)變化,吖啶橙染色后熒光顯微鏡下檢測其自噬溶酶體形成情況。3.Western-blot法檢測S-Rh2處理后PI3K/AKT/m TOR通路蛋白表達(dá)與SKOV3細(xì)胞自噬之間的關(guān)聯(lián)。結(jié)果:1.當(dāng)濃度在40-80μg/ml范圍內(nèi)時,人參皂苷S-Rh2對人卵巢癌SKOV3細(xì)胞具有增殖抑制作用,并呈劑量依賴性。在加入1μg/ml NVP-BEZ235后,S-Rh2濃度為10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml組的增殖抑制作用均顯著提高,P0.01,濃度為80ug/ml組則P0.05無統(tǒng)計學(xué)意義。2.S-Rh2作用后的SKOV3細(xì)胞P-AKT、AKT、m TOR蛋白的表達(dá)下降,出現(xiàn)PI3K/AKT/m TOR通路的抑制,該現(xiàn)象與S-Rh2的濃度呈正相關(guān),并與自噬蛋白LC3 II/LC3 I呈正相關(guān)。3.吖啶橙染色可見隨S-Rh2濃度增高,SKOV3細(xì)胞內(nèi)自噬溶酶體逐漸增加,貼壁細(xì)胞密度降低,細(xì)胞質(zhì)皺縮變圓,而阻斷PI3K/AKT/m TOR通路后,SKOV3細(xì)胞內(nèi)自噬溶酶體紅色熒光強(qiáng)度高于阻斷前。結(jié)論:人參皂苷S-Rh2在殺傷卵巢癌SKOV3細(xì)胞的同時能夠誘導(dǎo)其PI3K/AKT/m TOR通路抑制并產(chǎn)生自噬,該變化與S-Rh2的作用濃度呈現(xiàn)正相關(guān)。在應(yīng)用NVP-BEZ235阻斷PI3K/AKT/m TOR通路后,S-Rh2對SKOV3細(xì)胞的增殖抑制作用在一定程度上有提高,同時伴隨著相應(yīng)細(xì)胞的自噬程度增加。
[Abstract]:Aim: to study the changes of autophagy induced by S-Rh2 in SKOV3 cell lines, and to explore the regulatory role of PI3K/AKT/m TOR pathway in this experiment and its regulatory mechanism. Methods 1. CCK8 assay was used to determine the inhibitory effect of S-Rh2 on the proliferation of SKOV3 cells after being used alone and pretreated with PI3K/m TOR blocker. Morphological changes of SKOV3 cells were observed under different drug treatment conditions. Lysosome formation of SKOV3 cells was detected by fluorescence microscope after acridine orange staining. 3. Western-blot method was used to detect the relationship between PI3K/AKT/m TOR pathway protein expression and autophagy of SKOV3 cells after S-Rh2 treatment. The result is 1: 1. Ginsenoside S-Rh2 inhibited the proliferation of human ovarian cancer SKOV3 cells in a dose-dependent manner when the concentration was in the range of 40-80 渭 g/ml. After adding 1 渭 g/ml NVP-BEZ235, the proliferation inhibition of 10 渭 g / ml ~ 20 渭 g 路ml ~ (-1) L ~ (20 渭 g 路L ~ (-1) 路L ~ (-1) g/ml) was significantly higher than that of 80ug/ml group (P 0.05). 2.The expression of P-AKTK ~ (TM) TOR in SKOV3 cells treated with S-Rh2 was decreased, and the PI3K/AKT/m TOR pathway was inhibited. This phenomenon was positively correlated with the concentration of S-Rh2 and with the autophagy protein LC3 II/LC3 I. Acridine orange staining showed that with the increase of S-Rh2 concentration, the lysosome in SKOV3 cells increased gradually, the density of adherent cells decreased, the cytoplasm became round, and the red fluorescence intensity of autophagy lysosome in SKOV3 cells was higher than that before blocking PI3K/AKT/m TOR pathway. Conclusion: ginsenoside S-Rh2 can induce inhibition of PI3K/AKT/m TOR pathway and autophagy in ovarian cancer SKOV3 cells, which is positively correlated with the concentration of S-Rh2. After blocking the PI3K/AKT/m TOR pathway by NVP-BEZ235, the inhibitory effect of S-Rh2 on the proliferation of SKOV3 cells was increased to a certain extent, and the autophagy degree of the corresponding cells was increased.
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R737.31

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1914401