發(fā)布時間：2018-05-14 17:17

  本文選題：LY294002 + AZD6244��； 參考：《重慶醫(yī)科大學》2014年碩士論文

【摘要】：目的：研究磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）特異性抑制劑LY294002聯(lián)合絲裂原活化蛋白激酶激酶（MEK）特異性抑制劑AZD6244對耐順鉑卵巢癌細胞株（SKOV3/DDP）增殖的影響，并探討其可能機制。 方法： （1）MTT法檢測SKOV3/DDP細胞的耐藥性。 （2）MTT法檢測LY294002（5、10、20μmol/L）、AZD6244（1、2、4μmol/L）單獨及聯(lián)合作用對SKOV3/DDP細胞增殖的影響，Chou-Talalay聯(lián)合指數(shù)法計算半數(shù)抑制濃度（Inhibitory concentration50％，IC50）及合用指數(shù)（Confidence interval，CI）。 （3）根據(jù)MTT結果確定聯(lián)合用藥的濃度，將實驗分為對照組、LY294002組（5μmol/L）、AZD6244組(7μmol/L)及聯(lián)合組(LY2940025μmol/L+AZD62447μmol/L);作用48h后，采用MTT法繪制細胞生長0d、1d、2d、3d、4d、5d的曲線。 （4）計算各組細胞倍增時間。 （5）平板克隆實驗檢測各組細胞集落形成能力。 （6）AnnexinⅤ-PE/7-ADD染色結合流式細胞術(FCM)檢測各組細胞凋亡率，并測定細胞周期。 （7）Western blot法檢測各組細胞外信號調節(jié)激酶1/2(ERK1/2)、磷酸化的ERK1/2（P-ERK1/2）、AKT、磷酸化的AKT(P-AKT)、細胞周期蛋白D1（Cyclin D1）及激活型Caspase3蛋白的水平。 結果： （1）SKOV3/DDP細胞順鉑的IC50為2.3512μg/ml, SKOV3細胞順鉑的IC50為0.3035μg/ml，SKOV3/DDP細胞耐藥指數(shù)為7.7471。 （2）不同濃度的LY294002及AZD6244均可抑制SKOV3/DDP細胞增殖，作用48小時IC50分別為（30.69±1.12）μmol/L及（76.26±2.17）μmol/L，兩藥聯(lián)合作用IC50為（11.75±0.19）μmol/L，兩藥聯(lián)合時，其中LY294002為5μmol/L，AZD6244為7μmol/L，分別為單藥的1/6及1/10，CI＜1，兩藥聯(lián)合作用具有協(xié)同作用。 （3）聯(lián)合組細胞的生長速度較單藥組及對照組慢。 （4）各組細胞倍增時間分別為：對照組（37.43±0.53）h，LY294002組（38.95±1.36）h，AZD6244組（42.15±1.96）h，聯(lián)合組（46.92±1.39）h。聯(lián)合組細胞倍增時間較單藥組及對照組明顯延長(P＜0.05)。 （5）各組集落形成數(shù)目分別為：對照組（115±4.51）/103細胞，LY294002組集落數(shù)為（90.34±4.73）/103細胞，AZD6244組集落數(shù)為（79.67±3.51）/103細胞，聯(lián)合組集落數(shù)為（62±6.25）/103。聯(lián)合組集落形成數(shù)較單藥組及對照組明顯減少(P＜0.01)。 （6）FCM顯示各組細胞凋亡率分別為：對照組（2.67±0.37）%，LY294002組（12.08±3.22）%，AZD6244組（20.35±0.97）%，聯(lián)合組（52.39±3.52）%。聯(lián)合組凋亡率較單藥組及對照組增高。各組阻滯于G1期的細胞比例分別為：對照組(40.15±2.70)%，LY294002組(54.00±1.58)%，AZD6244組(63.84±1.02)%，，聯(lián)合組(77.84±1.26)%；阻滯于S期的細胞比例分別為：對照組(43.05±4.79)%，LY294002組(28.47±1.50)%，AZD624組(23.10±3.25)%，聯(lián)合組(10.64±0.77)%。聯(lián)合組阻滯于G1期的細胞比例明顯增多（P＜0.05），S期明顯減少（P＜0.05），PI顯著降低。 （7）Western blot結果顯示，AKT、 ERK1/2蛋白表達水平在各組間無明顯差異（P＞0.05）；LY294002組P-AKT水平降低，P-ERK水平增高； AZD6244組P-ERK水平降低，P-AKT水平增高；聯(lián)合組P-AKT、P-ERK水平均較單藥組及對照組降低，Cyclin D1表達較其余各組低，激活型Caspase-3較其余各組高(P＜0.05)。 結論：PI3K抑制劑LY294002聯(lián)合MEK抑制劑AZD6244通過促進細胞凋亡及阻滯細胞周期進展協(xié)同抑制SKOV3/DDP細胞的生長，這為耐藥卵巢癌的治療提供了新的理論依據(jù)。
[Abstract]:Objective: To study the effect of phosphatidylinositol 3 kinase (PI3K) specific inhibitor (LY294002) and mitogen activated protein kinase kinase (MEK) specific inhibitor AZD6244 on the proliferation of cisplatin resistant ovarian cancer cell line (SKOV3/DDP), and to explore its possible mechanism.
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本文編號：1888785