本文選題：氧化應(yīng)激 + 過氧化氫��； 參考：《醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào)》2017年02期

【摘要】：目的植入前的胚胎對(duì)氧化應(yīng)激敏感,低氧狀態(tài)可能更有利于胚胎的生長(zhǎng)及發(fā)育。文中旨在探討過氧化氫(H_2O_2)對(duì)蛻膜化小鼠子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞(ESCs)的影響,構(gòu)建蛻膜化小鼠ESCs氧化應(yīng)激模型。方法采用酶解聯(lián)合篩網(wǎng)過濾及差時(shí)貼壁方法分離培養(yǎng)原代小鼠ESCs。實(shí)驗(yàn)分為4組(n=8):空白對(duì)照組為含基礎(chǔ)培養(yǎng)液的小鼠子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞(ESCs);蛻膜化組:基礎(chǔ)培養(yǎng)液中加入10 nmol/L E2、1μmol/L P4體外誘導(dǎo)小鼠ESCs蛻膜化72 h;陰性對(duì)照組:小鼠ESCs蛻膜化誘導(dǎo)成功后,僅予基礎(chǔ)培養(yǎng)液干預(yù)4 h;氧化應(yīng)激組:小鼠ESCs蛻膜化誘導(dǎo)成功后,分別加入含50、100、150、200、250、300μmol/L H_2O_2的基礎(chǔ)培養(yǎng)液繼續(xù)干預(yù)4 h。免疫組化法檢測(cè)Vimentin、Cytokeratin表達(dá)鑒定原代小鼠ESCs,RT-PCR檢測(cè)d PRP mRNA的表達(dá)鑒定ESCs蛻膜化,CCK-8法檢測(cè)H_2O_2干預(yù)后細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖活性,流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)ROS水平判斷氧化應(yīng)激程度。結(jié)果成功分離、培養(yǎng)和鑒定原代小鼠ESCs。鏡下觀察細(xì)胞呈梭形和多角形、放射狀排列;細(xì)胞免疫熒光染色檢測(cè)結(jié)果表明Vimentin表達(dá)(+)、Cytokeratin(-),原代小鼠ESCS純度達(dá)(96.3±0.49)%。10 nmol/L E2、1μmol/L P4作用下,蛻膜化組蛻膜化標(biāo)志物d PRP mRNA顯著高于空白對(duì)照組(1.0010±0.0011 vs 0.000 2±0.0000,P0.01)。與陰性對(duì)照組抑制率[(1.000±0.000)%]比較,氧化應(yīng)激組在H_2O_2濃度為50、100、150、200、250、300μmol/L作用下抑制率[(0.013±0.004、0.032±0.007、0.069±0.023、0.172±0.007、0.395±0.018、0.706±0.013)%],其中150、200、250、300μmol/L H_2O_2與陰性對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。進(jìn)一步評(píng)估50、100μmol/L H_2O_2干預(yù)后測(cè)得的細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激組ROS明顯高于陰性對(duì)照組(27.77±4.20 vs 17.47±0.61,43.57±6.58 vs 17.47±0.61,P=0.001)。結(jié)論 50、100μmol/L H_2O_2不影響蛻膜化小鼠ESCs的生長(zhǎng)、增殖,且隨H_2O_2濃度增加,刺激細(xì)胞內(nèi)ROS的產(chǎn)生增多,100μmol/L H_2O_2可作為蛻膜化小鼠ESCs氧化應(yīng)激模型建立的合適刺激濃度。
[Abstract]:Objective preimplantation embryos are sensitive to oxidative stress and hypoxia may be more conducive to the growth and development of embryos. The purpose of this study was to investigate the effect of H _ 2O _ 2 on decidualized mouse endometrial stromal cells (ESCs) and to establish a decidualized mouse ESCs oxidative stress model. Methods Primary mice ESCs were isolated and cultured by enzymolysis combined with sieve filtration and delayed time adherence. The experiment was divided into 4 groups: blank control group: mouse endometrial stromal cells containing basic culture medium (ESCs); decidualization group: 10 nmol/L E2 + 1 渭 mol/L P4 was added to basic culture medium to induce ESCs decidualization in vitro for 72 h; negative control group: mouse ESCs slough After successful membrane induction, In the oxidative stress group, the mouse ESCs decidua was induced successfully, and then added with 50100150200250300 渭 mol/L H_2O_2 for 4 h. Expression of Vimentin Cytokeratin expression in Primary Mouse ESCs by RT-PCR; ESCs decidualized CCK-8 method was used to detect the cell growth and proliferation activity after H_2O_2 intervention; flow cytometry was used to determine the level of ROS in the cells to judge the degree of oxidative stress. Results the primary mouse ESCs were isolated, cultured and identified successfully. Under microscope, the cells were spindle-shaped and polygonal, and arranged radially, and the results of cell immunofluorescence staining showed that the expression of Vimentin was 96.3 鹵0.49.10 nmol/L E _ 2N _ 1 渭 mol/L P _ 4, the purity of the primary mouse ESCS was 96.3 鹵0.49%. D PRP mRNA of decidualization in decidualization group was significantly higher than that in control group (1.0010 鹵0.0011 vs 0.000 2 鹵0.0000 P 0.01). Compared with the negative control group, the inhibition rate of oxidative stress group was 50100150200250300 渭 mol/L at the concentration of 50100150200250300 渭 mol/L. The inhibition rate was 0.013 鹵0.004 鹵0.007 鹵0.069 鹵0.023 鹵0.172 鹵0.007 鹵0.395 鹵0.018 鹵0.706 鹵0.013% in the oxidative stress group, and there was a significant difference between the 150200250300 渭 mol/L H_2O_2 group and the negative control group (P 0.05). The ROS of the 50100 渭 mol/L H_2O_2 treated group was significantly higher than that of the negative control group (27.77 鹵4.20 vs 17.47 鹵0.61 鹵43.57 鹵6.58 vs 17.47 鹵0.61). Conclusion 50100 渭 mol/L H_2O_2 does not affect the growth and proliferation of ESCs in decidualized mice, and with the increase of H_2O_2 concentration, the production of ROS in the cells is increased. 50100 渭 mol/L H_2O_2 can be used as a suitable stimulation concentration for ESCs oxidative stress model of decidualized mice.
【作者單位】： 廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院生殖中心;廣西壯族自治區(qū)人民醫(yī)院生殖中心;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(81260096)
【分類號(hào)】：R711.74

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1852148