沉默ATF5對(duì)卵巢癌細(xì)胞skov-3裸鼠成瘤的研究
發(fā)布時(shí)間:2018-04-30 22:23
本文選題:ATF5 + 上皮性卵巢癌 ; 參考:《青島大學(xué)》2014年碩士論文
【摘要】:目的: 分析慢病毒轉(zhuǎn)染沉默人轉(zhuǎn)錄激活因子5(Activating transcription factor5, ATF5)后,對(duì)卵巢癌SKOV-3細(xì)胞體外增殖、凋亡及體內(nèi)成瘤的影響,通過(guò)體外和體內(nèi)的實(shí)驗(yàn)研究來(lái)探討卵巢癌的基因治療,探索沉默ATF5的表達(dá)后,能否開(kāi)辟卵巢癌治療的新方法。 方法: 1、慢病毒攜帶小干擾RNA,分別將構(gòu)建好的攜帶RNA干擾質(zhì)粒(沉默ATF5)和空載體的慢病毒感染生長(zhǎng)良好的卵巢癌SKOV-3細(xì)胞和卵巢癌SKOV-3細(xì)胞進(jìn)行對(duì)照,對(duì)比觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)。 2、MTT法檢測(cè)細(xì)胞的增殖生長(zhǎng)。 3、羅氏凋亡檢測(cè)試劑盒檢測(cè)細(xì)胞凋亡。 4、采用裸鼠皮下接種細(xì)胞的方法,于裸鼠皮下接種成瘤,觀察各組裸鼠的存活狀態(tài)、種植瘤生長(zhǎng)情況,進(jìn)一步計(jì)算成瘤率。 5、RT-PCR檢測(cè)移植瘤ATF5mRNA的表達(dá)情況。 6、Western-Blot檢測(cè)移植瘤ATF5蛋白的表達(dá)情況。 7、HE染色觀察瘤組織組織學(xué)變化。 結(jié)果: 1、在體外培養(yǎng)條件下,SKOV-3的生物學(xué)形態(tài)沒(méi)有明顯差異。在相同培養(yǎng)時(shí)間內(nèi)細(xì)胞的增殖無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,但RNA干擾的實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞凋亡數(shù)量較其他兩組明顯增多。 2、皮下接種成瘤后,三組裸鼠的成瘤率沒(méi)有明顯區(qū)別,但RNA干擾組腫瘤成瘤時(shí)間晚,生長(zhǎng)緩慢。 3、移植瘤組織RT-PCR顯示RNA干擾組mRNA表達(dá)量與其他對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05); 4、瘤組織Western-Blot顯示RNA干擾組ATF5蛋白表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05); 5、HE染色法觀察RNA干擾組分裂相明顯減少,凋亡現(xiàn)象明顯。 結(jié)論: 沉默ATF5的表達(dá)后人上皮性卵巢癌裸鼠移植瘤生長(zhǎng)緩慢,這可能成為卵巢癌基因治療的新靶點(diǎn)。
[Abstract]:Objective:
The effect of Activating transcription factor5 (ATF5) on the proliferation, apoptosis and tumor formation of ovarian cancer SKOV-3 cells in vitro was analyzed. The gene therapy of ovarian cancer was explored in vitro and in vivo, and the new method of ovarian cancer treatment could be opened up after the expression of silent ATF5 was explored.
Method錛,
本文編號(hào):1826499
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