本文選題：子宮平滑肌肉瘤 + CKS2　； 參考：《山東大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：背景子宮平滑肌肉瘤(uterine leiomyosarcoma,ULMS)是臨床上發(fā)病率較低的婦科惡性腫瘤,但它是子宮體最常見(jiàn)的肉瘤之一,占子宮全部惡性腫瘤的1.5%,約占子宮肉瘤的40%。其特點(diǎn)為轉(zhuǎn)移發(fā)生早,復(fù)發(fā)率高,預(yù)后差。細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶亞基2(cyclin-dependent kinase subunit,CKS2)是廣泛分布于真核生物細(xì)胞中的小分子蛋白,在哺乳動(dòng)物早期胚胎發(fā)育、減數(shù)分裂和體細(xì)胞分裂中起重要作用。近期研究發(fā)現(xiàn),CKS2在結(jié)腸癌、乳腺癌、宮頸癌等多種惡性腫瘤中都存在過(guò)度表達(dá)的情況,并對(duì)惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展起重要作用,但關(guān)于CKS2在子宮平滑肌肉瘤中的研究尚未見(jiàn)報(bào)道。本研究主要探討子宮平滑肌肉瘤中CKS2的表達(dá)情況及其臨床意義,并探究CKS2在子宮平滑肌肉瘤細(xì)胞中的作用及其作用機(jī)制。第一部分CKS2在子宮平滑肌肉瘤中的表達(dá)及其臨床意義方法1.收集山東大學(xué)齊魯醫(yī)院和山東省立醫(yī)院2005年-2015年之間38例子宮平滑肌肉瘤病例以及對(duì)照組38例子宮平滑肌瘤,完善病例臨床資料。2.利用免疫組化方法檢測(cè)子宮平滑肌肉瘤組和子宮平滑肌瘤組中CKS2蛋白的表達(dá)情況,并將免疫組化結(jié)果根據(jù)Formwitz評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)分。3.根據(jù)兩組免疫組化評(píng)分結(jié)果,比較子宮平滑肌肉瘤組和子宮平滑肌瘤組中CKS2蛋白表達(dá)情況的差異;將子宮平滑肌肉瘤分為高表達(dá)組(≥4分)和低表達(dá)組(4分),統(tǒng)計(jì)分析CKS2蛋白的表達(dá)水平與子宮平滑肌肉瘤患者臨床病理參數(shù)和預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果1.CKS2在子宮平滑肌肉瘤和子宮平滑肌瘤中的表達(dá)主要定位于細(xì)胞核中。CKS2在子宮平滑肌肉瘤中高表達(dá)率為63.2%(24/38),在平滑肌瘤中高表達(dá)率為18.4%(7/38)。與子宮平滑肌瘤相比,CKS2在子宮平滑肌肉瘤中的表達(dá)水平明顯上調(diào),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.000)。2.統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示,CKS2高表達(dá)組的腫瘤體積更大(p=0.014),孕激素受體的表達(dá)水平下調(diào)(p=0.048),CKS2的表達(dá)與患者年齡、FIGO分期、雌激素受體表達(dá)水平無(wú)明顯關(guān)系。3.Kaplan—Meier分析顯示在子宮平滑肌肉瘤中CKS2高表達(dá)組的病人預(yù)后比低表達(dá)組差(Log Rank Chi-square=4.735,p0.05)。Cox 比例風(fēng)險(xiǎn)模型多因素分析表明CKS2的過(guò)表達(dá)(Risk ratio,RR=3.124,p=0.036)和FIGO分期是子宮平滑肌肉瘤患者的獨(dú)立預(yù)后因子(Risk ratio,RR=2.087,p=0.001)。結(jié)論1.在子宮平滑肌肉瘤和子宮平滑肌瘤中,CKS2主要定位于細(xì)胞核中。與子宮平滑肌瘤相比,CKS2在子宮平滑肌肉瘤中表達(dá)明顯上調(diào)。2.在子宮平滑肌肉瘤中,CKS2高表達(dá)組的腫瘤體積更大,孕激素受體的表達(dá)下調(diào),CKS2的高表達(dá)預(yù)示著較差的預(yù)后。CKS2的表達(dá)和FIGO分期是子宮平滑肌肉瘤患者的獨(dú)立預(yù)后因素。第二部分CKS2對(duì)子宮平滑肌肉瘤細(xì)胞生物學(xué)行為的影響及其作用機(jī)制的研究方法1.設(shè)計(jì)并合成CKS2特異性的的siRNA,以脂質(zhì)體為介導(dǎo)轉(zhuǎn)染子宮平滑肌肉瘤(ULMS)細(xì)胞株(SK-UT-1和SK-UT-1B),干擾CKS2基因的表達(dá),并設(shè)立對(duì)照組。2.轉(zhuǎn)染一定時(shí)間后收集試驗(yàn)組和對(duì)照組腫瘤細(xì)胞,提取細(xì)胞中RNA及蛋白質(zhì),分別利用RT-qPCR和western blot方法檢測(cè)CKS2基因的mRNA的表達(dá)情況和CKS2蛋白的表達(dá)情況,檢測(cè)CKS2的干擾效率。3.利用CCK8方法檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組0-96h ULMS細(xì)胞增殖情況并繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線。4.檢測(cè)干擾CKS2后對(duì)ULMS細(xì)胞遷移和浸潤(rùn)的影響:利用Transwell小室和鋪膠小室檢測(cè)試驗(yàn)組和對(duì)照組中ULMS細(xì)胞遷移和浸潤(rùn)情況。5.檢測(cè)干擾CKS2對(duì)ULMS細(xì)胞平板克隆形成能力的影響:利用平板克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)試驗(yàn)組和對(duì)照組中ULMS細(xì)胞平板克隆形成能力。6.檢測(cè)干擾CKS2對(duì)ULMS細(xì)胞周期的影響:將待測(cè)細(xì)胞用PI染色,利用流式細(xì)胞技術(shù),檢測(cè)試驗(yàn)組和對(duì)照組中腫瘤細(xì)胞周期情況,統(tǒng)計(jì)分析兩組的差異。7.檢測(cè)干擾CKS2后對(duì)ULMS細(xì)胞凋亡的影響:將待測(cè)細(xì)胞用AnnexinV-FITC/PI雙染后,利用流式細(xì)胞技術(shù),檢測(cè)試驗(yàn)組和對(duì)照組中ULMS細(xì)胞凋亡情況,統(tǒng)計(jì)分析兩組的差異。8.檢測(cè)干擾CKS2后對(duì)ULMS細(xì)胞中蛋白質(zhì)表達(dá)改變:利用western blot方法檢測(cè)試驗(yàn)組和對(duì)照組中蛋白表達(dá)水平,統(tǒng)計(jì)分析兩組的差異。結(jié)果1.SK-UT-1和SK-UT-1B細(xì)胞在轉(zhuǎn)染.si-CKS2后,CKS2的mRNA和蛋白表達(dá)均有明顯下降,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01,p0.05)。2.細(xì)胞生長(zhǎng)曲線結(jié)果表明,SK-UT-1和SK-UT-1B細(xì)胞分別在轉(zhuǎn)染si-CKS2后48h和24h后增殖能力出現(xiàn)明顯下降,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3.SK-UT-1和SK-UT-1B細(xì)胞在轉(zhuǎn)染si-CKS2后,細(xì)胞遷移及浸潤(rùn)能力均下降,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01,p0.01)。4.SK-UT-1和SK-UT-1B細(xì)胞中,si-CKS2轉(zhuǎn)染組克隆形成數(shù)量減少,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01,p0.01)。5.SK-UT-1和SK-UT-1B細(xì)胞在轉(zhuǎn)染si-CKS2后,G1期細(xì)胞比例上升,S期細(xì)胞比例下降,細(xì)胞被阻滯于G1期。6.SK-UT-1和SK-UT-1B細(xì)胞在轉(zhuǎn)染si-CKS2后,干擾組的細(xì)胞凋亡率與對(duì)照組相比無(wú)明顯改變,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。7.SK-UT-1和SK-UT-1B細(xì)胞在轉(zhuǎn)染si-CKS2后,cyclin A2表達(dá)下降,claudin 1,p-AKT,p-ERK,p-P38 和 Bax 無(wú)明顯改變。結(jié)論1.CKS2在SK-UT-1和SK-UT-1B細(xì)胞株中均有表達(dá)。2.CKS2可以促進(jìn)ULMS細(xì)胞的增殖、遷移、浸潤(rùn)和體外平板克隆的形成,促進(jìn)ULMS細(xì)胞G1/S期的轉(zhuǎn)化,對(duì)ULMS細(xì)胞的凋亡無(wú)明顯影響。CKS2可通過(guò)上調(diào)cyclin A2表達(dá)發(fā)揮作用。
[Abstract]:The expression of CKS2 in uterine smooth muscle sarcoma and the clinical significance of CKS2 protein in uterine smooth muscle sarcoma were investigated . Multivariate analysis of Cox proportional hazard model showed that overexpression of CKS2 ( Risk ratio , RR = 3.124 , p = 0.036 ) and FIGO staging were independent prognostic factors for patients with uterine smooth muscle sarcoma ( Risk ratio , RR = 2.087 , p = 0.001 ) . The effects of CKS2 on the cell cycle of ULMS cells were determined by means of the method of flow cytometry , the expression of CKS2 mRNA and the expression of CKS2 protein were detected by using the method of flow cytometry . Conclusion 1 . CKS2 can promote the proliferation , migration , infiltration of ULMS cells and the formation of plate clones in vitro , promote the transformation of ULMS cells G1 / S phase , and have no significant effect on the apoptosis of ULMS cells . CKS2 can regulate the expression of cyclin A2 .

【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R737.33

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 陳鑫;CKS2在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中的表達(dá)及其對(duì)腫瘤生物學(xué)行為的影響和機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2015年

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本文編號(hào)：1824561